L incidenza degli autoanticorpi anti-mpo nelle diverse varianti di vasculite e forme associate è qui di seguito riportata:

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1 QUANTA Lite Per uso diagnostico In Vitro Complessità CLIA: elevata MPO SC ELISA Finalità d uso Il presente dosaggio permette la determinazione in-vitro degli anticorpi IgG anti-mieloperossidasi (MPO) in siero umano, come sussidio nella diagnosi di certe forme di vasculite autoimmune, tra cui la glomerulonefrite a semilune e la poliarterite microscopica in congiunzione con altri dati clinici. Vengono forniti materiali sufficienti per il dosaggio di un massimo di 41 campioni in doppio o di 89 campioni in singolo, con una curva di calibrazione, un controllo positivo e uno negativo. Riassunto e Spiegazione del test Gli autoanticorpi anti-mpo sono uno degli otto principali ANCA (anticorpi anti-citoplasma dei neutrofili). La maggior parte degli antigeni bersaglio degli ANCA sono enzimi derivati dai neutrofili e includono: proteinasi (PR), proteina inducente permeabilità batterica (BPI), lisozima, elastasi, lattoferrina, catepsina G e azurocidina. Gli ANCA danno origine a tre principali pattern di colorazione all immunofluorescenza (IF) su neutrofili fissati in etanolo: perinucleare (p-anca), citoplasmatico (c-anca) e atipico o X-ANCA. La mieloperossidasi è il principale antigene per il pattern p-anca. Gli autoanticorpi anti-mpo possono servire da marcatori per la patologia e l attività, con titoli anticorpali che aumentano durante la fase più attiva della malattia. L incidenza degli autoanticorpi anti-mpo nelle diverse varianti di vasculite e forme associate è qui di seguito riportata: PATOLOGIA INCIDENZA (%) Glomerulonefrite necrotizzante / a semilune Vasculite necrotizzante 65 Poliangite microscopica 45 Sindrome di Churg-Strauss Granolomatosi di Wegener 10 Poliarterite nodosa 60 Granulomatosi allergica * *La specificità degli autoanticorpi è stata associata alla forma corrispondente, tuttavia non sono riportate in dettaglio le percentuali di incidenza. Sebbene le tecniche IF ed ELISA siano ancora in fase di standardizzazione, si raccomanda la seguente procedura di riferimento: l IF dovrebbe servire da screening iniziale per determinare il tipo di ANCA, vale a dire p- o c-anca e il titolo. Ciascun campione ANCA-positivo all IF deve essere susseguentemente dosato in ELISA per determinare l esatta specificità antigenica dell autoanticorpo rilevato, ad esempio la MPO per un campione p-anca positivo. Far riferimento agli articoli 1, 2 e 4-11 per ulteriori approfondimenti. Principio della Metodica I micropozzetti sono sensibilizzati con antigene MPO. I calibratori, i controlli e i campioni vengono dispensati nei pozzetti. Gli eventuali autoanticorpi diretti verso l antigene MPO si legheranno durante la prima incubazione. Dopo il lavaggio dei pozzetti, per rimuovere il materiale non legato, viene aggiunto il coniugato: anti-igg umane di capra marcate con perossidasi. Il coniugato si legherà agli eventuali anticorpi umani catturati nel pozzetto mentre il coniugato in eccesso viene rimosso mediante ulteriore lavaggio. Il coniugato legato verrà evidenziato mediante aggiunta del substrato TMB (,,5,5 tetrametilbenzidina). In presenza di perossidasi, si ottiene una colorazione blu che virerà al giallo dopo aver aggiunto acido solforico. L intensità del colore, proporzionale alla concentrazione di autoanticorpi nel campione, viene letta a 450nm. Reagenti 1. Evitare piastre ELISA di micropozzetti di polistirene rivestiti di antigene MPO (12-1 x 8 pozzetti), con supporto, in busta chiusa contenente materiale essicante 2. Controllo ELISA Negativo, 1 flacone di tampone contenente conservante e siero umano senza anticorpi umani anticorpi a. Calibratore A ELISA MPO SC, 1 flacone di tampone contenente conservante ed anticorpi siero umano 4. Calibratore B ELISA MPO SC, 1 flacone di tampone contenente conservante ed anticorpi siero umano 5. Calibratore C ELISA MPO SC, 1 flacone di tampone contenente conservante ed anticorpi siero umano 6. Calibratore D ELISA MPO SC, 1 flacone di tampone contenente conservante ed anticorpi siero umano 7. Calibratore E ELISA MPO SC, 1 flacone di tampone contenente conservante ed anticorpi siero umano 8. Controllo ELISA debolmente positivo per MPO SC, 1 flacone di tampone contenente conservante ed anticorpi siero umano 9. Diluente per campioni Type III, 2 flacones di colore giallo contenente Tween 20, stabilizzatori delle proteine e conservante, 50mL 1

2 10. Soluzione di lavaggio HRP Concentrata, 1 flacone di soluzione concentrata 40x di colore rosso contenente soluzione fisiologica tamponata con Tris e Tween 20, 25mL. Vedi la Sezione Metodi per le istruzioni sulla diluizione. 11. Coniugato HRP MPO SC IgG, 1 flacone di colore blu contenente tampone, stabilizzatori delle proteine e conservante, 10mL 12. Cromogeno TMB, 1 flacone contenente stabilizzatori, 10mL 1. Soluzione di arresto HRP, Acido solforico 0,44M, 1 flacone incolore, 10mL Avvertenze 1. ATTENZIONE: Questo prodotto contiene un composto chimico (cloramfenicolo allo 0,02%) i campioni, nei controlli, diluente e nel coniugato, noto allo Stato della California come causa di tumori. La diluente per campioni contenente Proclin 150. Per prevenire lesioni, evitare l inalazione, l ingestione o il contatto con la cute e con gli occhi. 2. Tutte le fonti umane di materiali usati nella preparazione dei controlli per questo prodotto sono state testate e sono risultate negative per la presenza di anticorpi anti-hiv, per HBsAg e per anticorpi anti-hcv mediante metodi approvati dall FDA. Tuttavia nessun test offre la certezza completa dell assenza di HIV, HBV, HCV o di altri agenti infettivi. Pertanto, i Controllo debolmente positivo per MPO SC, MPO SC Calibratori A E, ed Controllo ELISA Negativo devono essere maneggiati come materiali potenzialmente 14 infettivi.. La sodio azide è usata come conservante. La sodio azide è un veleno e può essere tossica se ingerita o assorbita attraverso la cute o gli occhi. La sodio azide può reagire con le tubature di piombo o rame formando azidi metalliche potenzialmente esplosive. Lasciar scorrere grandi quantità di acqua, se si usa un lavandino per eliminare i reagenti, per prevenire la formazione di azidi. 4. Il Coniugato HRP MPO SC IgG contiene un composto chimico velenoso/corrosivo, che può essere tossico se ingerito. Per prevenire possibili ustioni chimiche, evitare il contatto con la cute e con gli occhi. 5. Il Cromogeno TMB contiene un irritante, che può essere dannoso se inalato, ingerito o assorbito attraverso la cute. Per prevenire lesioni, evitare l inalazione, l ingestione o il contatto con la cute e con gli occhi. 6. La Soluzione di arresto HRP è costituita da una soluzione di acido solforico diluito. Evitare l esposizione a basi, metalli o altri composti che possono reagire con gli acidi. L acido solforico è velenoso e corrosivo e può essere tossico se ingerito. Per prevenire possibili ustioni chimiche, evitare il contatto con la cute e con gli occhi. 7. Usare appropriati indumenti personali protettivi mentre si lavora con i reagenti forniti. 8. I reagenti eventualmente rovesciati devono essere rimossi immediatamente. Seguire tutte le normative vigenti in materia di eliminazione dei residui di natura chimica. Precauzioni 1. Questo prodotto è stato messo a punto per l uso diagnostico In Vitro. 2. Il presente prodotto deve essere utilizzato da personale specializzato.. Si raccomanda di osservare la procedura del test alla lettera. Qualsiasi variazione potrebbe influire sui risultati e la qualità del dosaggio. Non trascurare le eventuali Note ed avvertenze contenute nelle istruzioni. 4. I reattivi provenienti da lotti diversi di kit NON sono intercambiabili. Se si effettuano molti dosaggi, occorre avere l accortezza di controllare che tutti I reattivi provengano dallo STESSO lotto. Tutti gli strip utilizzati devono provenire dalla medesima custodia di alluminio. La sostituzione di qualsiasi componente può portare a risultati errati. 5. Per evitare contaminazioni, utilizzare solamente vetreria/contenitori di plastica nuovi o perfettamente puliti. Mai versare reattivi inutilizzati nuovamente nel flacone di origine. 6. Non lasciare i flaconi dei reattivi stappati; qualsiasi evaporazione o contaminazione che ne risultasse darà luogo a risultati inattendibili. 7. Il cromogeno TMB deve essere mantenuto al riparo dalla luce e dall acqua. 8. I sieri con contaminazioni microbiche, emolizzati o lipemici ed i campioni contenenti particelle non devono essere utilizzati. 9. L accuratezza della diluizione dei campioni non può essere verificata in quanto i controlli sono pronti per l uso. Si consiglia pertanto l utilizzo di pipette calibrate e di sieri di controllo interni. 10. L utilizzo di campionatori automatici, diluitori per campioni o di qualsiasi altro tipo di strumentazione automatica può dar luogo a differenze nei risultati, rispetto al procedimento manuale. È responsabilità del laboratorio convalidare il sistema di automazione, verificando che i risultati rientrino nei limiti definiti nella presente metodica e nel certificato QC annesso. 11. Tutta la strumentazione utilizzata dovrà essere tarata e sottoposta alla manutenzione periodica suggerita dalla casa madre. Condizioni di conservazione 1. Il kit deve essere conservato a 2-8 C e non deve essere congelato. Temperature di conservazione inappropriate possono influire sui risultati. 2. Il tampone di lavaggio diluito in un contenitore pulito può essere conservato a temperatura ambiente (20-26 C) per un massimo di 1 settimana.. La scadenza del kit è evidenziata sull etichetta esterna. Raccolta dei campioni 1. I campioni di sangue devono provenire da prelievi venosi, lasciati coagulare naturalmente, separandone poi il siero. 2. Il siero può essere conservato a 2-8 C per un massimo di 7 giorni prima del dosaggio 1, oppure per periodi più lunghi, aliquotare e conservare a -20 C o temperature inferiori.. Evitare ripetuti congelamenti/scongelamenti dei campioni. 4. I campioni di siero non devono essere inattivati mediante calore, in quanto ciò può dar luogo a risultati falsi positivi. 2

3 Procedura Materiali forniti Foglietto illustrativo: Dà esaurienti dettagli del test. Certificato Controllo Qualità (CQ): Indica i risultati attesi del lotto. MPO SC Coated Wells (Pozzetti rivestiti con MPO SC): 12 x 8 strip di pozzetti sensibilizzati con l antigene MPO (colorati in verde). La piastra è inserita in una custodia di alluminio richiudibile con 2 bustine di agente essiccante. Type III Sample Diluent (Diluente dei campioni Type III): 2 flaconi contenenti 50mL di tampone per la diluizione dei campioni. Colorato in giallo, pronto per l uso. HRP Wash Concentrate (Tampone di lavaggio HRP): 1 flacone contenente 25mL di tampone concentrato 40x per il lavaggio dei pozzetti. MPO SC Calibrators (Calibratori MPO SC): 5 flaconcini, ciascuno contenente 1,2mL di siero umano diluito alle seguenti concentrazioni di autoanticorpi anti-mpo: 100;,; 11,1;,7; 1,2 U/mL. Pronti per l uso. MPO SC Positive Control (Controllo positivo MPO SC): 1 flaconcino contenente 1,2mL di siero umano diluito. Pronto per l uso. ELISA Negative Control (Controllo negativo ELISA): 1 flaconcino contenente 1,2mL di siero umano diluito. Pronto per l uso. HRP MPO SC IgG Conjugate (Coniugato HRP MPO SC): un flacone contenente 10mL di anticorpi anti-igg umane, purificati, coniugati con perossidasi. Colorato in blu, pronto per l uso. TMB Chromogen (Cromogeno TMB): un flacone contenente 10mL di cromogeno TMB. Pronto per l uso. Stop Solution (Soluzione bloccante): un flacone contenente 10mL di acido solforico 0,44M. Pronto per l uso. Materiali richiesti ma non forniti Lavatore automatico per micropiastre: È consigliato, sebbene il lavaggio della piastra possa essere eseguito manualmente. Lettore per piastre: In grado di misurare la densità ottica a 450nm, calibrato contro aria. Acqua distillata o deionizzata: Si raccomanda l uso di acqua della migliore qualità disponibile. Micropipette calibrate: Per dosare 1000, 100 e 10µL. Pipetta multicanale: Consigliata per dosare volumi di 100µL di coniugato, cromogeno TMB e soluzione bloccante. Provette di vetro/plastica: Per la diluizione dei campioni. Metodica Prima di incominciare 1. Portare il kit a temperatura ambiente Il kit è stato messo a punto per una procedura a temperatura ambiente (20-24 C). Togliere il kit dal luogo di conservazione e attendere che raggiunga la temperatura ambiente (per circa 60 minuti). I pozzetti non devono essere rimossi dalla custodia di alluminio finché non abbiano raggiunto la temperatura ambiente. Nota: I kit si mantengono a temperatura ambiente per una settimana. 2. Componenti del kit Miscelare uniformemente ciascun componente del kit prima dell uso.. Diluizione del tampone di lavaggio (concentrato 40x) Diluire la Soluzione di lavaggio HRP concentrata 1:40 aggiungendo il contenuto del flacone fornito con il kit a 975mL di acqua distillata o deionizzata. Se non si usa l intera piastra in una sola volta, si può preparare una minore quantità di soluzione di lavaggio aggiungendo 2,0mL di concentrato a 78mL di acqua distillata o deionizzata ogni 16 pozzetti utilizzati. La soluzione di lavaggio diluita è stabile per 1 settimana a 2-8 o C. 4. Diluizione dei campioni Diluire 10µL di ciascun campione con 1000µL di diluente dei campioni (1:101) e miscelare accuratamente. Nota: I campioni diluiti devono essere utilizzati entro 8 ore. 5. Manipolazione degli strip e del supporto Inserire il numero desiderato di pozzetti negli strip, a partire dal pozzetto A1, riempiendo le colonne da sinistra a destra, fino a completare l intera piastra. Durante tale procedura è opportuno premere sui lati più lunghi del supporto, per evitare la fuoriuscita dei pozzetti. Nota: Riporre immediatamente i pozzetti non utilizzati nella custodia di alluminio con le 2 bustine di essiccante, richiudendo saldamente per ridurre al minimo l esposizione all umidità. Assicurarsi che non vi siano strappi o forature nella custodia di alluminio: AVVERTENZA: L esposizione dei pozzetti all umidità, la contaminazione da polvere o da qualsiasi altro tipo di particelle può dar luogo al deterioramento degli antigeni, con risultati del dosaggio poco attendibili. Esecuzione del test Mantenere lo stesso ordine di dispensazione durante tutta la seduta. 1. Dispensazione dei campioni Dispensare 100µL di ciascun calibratore, controllo e campione prediluito (1:101) nei rispettivi pozzetti, all interno della piastra. Nota: I campioni devono essere dispensati il più velocemente possibile per ridurre al minimo l effetto deriva sul dosaggio. Far partire il timer dopo aver dispensato l ultimo campione. Incubare a temperatura ambiente per 0 minuti. 2. Lavaggi La procedura di lavaggio rappresenta un passaggio critico e richiede particolare attenzione. Una piastra non lavata correttamente può dare risultati inaccurati, con scarsa precisione ed elevati rumori di fondo. Terminata l incubazione, lavare la piastra volte con µL di tampone di lavaggio per pozzetto. Utilizzare un lavatore automatico oppure procedere manualmente come qui di seguito riportato. Dopo l ultimo lavaggio automatico, capovolgere la piastra su carta assorbente picchiettando delicatamente.

4 Le piastre possono essere lavate manualmente come segue: a. Rovesciare il contenuto della piastra in uno scarico. b. Capovolgere la piastra su carta assorbente picchiettando delicatamente. c. Con una multicanale, dispensare µl di tampone di lavaggio. d. Agitare la piastra delicatamente su una superficie piana. e. Ripetere a-d due volte. f. Ripetere a e b.. Dispensazione del coniugato Dispensare 100µL di coniugato in tutti i pozzetti. Rimuovere eventuali schizzi sulla superficie dei pozzetti con carta assorbente. Nota: Per evitare contaminazioni, non versare il coniugato in eccesso nuovamente nel flacone d origine.incubare a temperatura ambiente per 0 minuti. 4. Lavaggio Procedere come al punto Dispensazione del cromogeno (TMB) Dispensare 100µL di cromogeno TMB in tutti i pozzetti. Rimuovere eventuali schizzi sulla superficie dei pozzetti con carta assorbente. Nota: Per evitare contaminazioni, non versare il substrato in eccesso nuovamente nel flacone d origine.incubare a temperatura ambiente per 0 minuti al riparo dalla luce. 6. Dispensazione del bloccante Dispensare 100µL di soluzione bloccante in tutti i pozzetti. Il colore virerà dal blu al giallo. 7. Lettura delle densità ottiche Leggere le densità ottiche (DO) dei pozzetti a 450nm in un lettore per micropiastre, entro 0 minuti dalla dispensazione del bloccante. Controllo di qualità 1. Controllo qualità Per essere valido il dosaggio deve rispettare i seguenti requisiti: I calibratori e i controlli negativo e positivo devono essere inclusi in ogni seduta. I valori ottenuti per ciascun controllo positivo e negativo devono rientrare nei range specificati sul Certificato QC. La forma della curva dovrà essere simile a quella riportata sul Certificato QC. Se non vengono rispettati i suddetti criteri, il dosaggio sarà invalidato e si dovrà ripetere la seduta. 2. Calcolo delle densità ottiche medie (solo per dosaggi in doppio) Calcolare la DO media delle due letture per ciascun calibratore, controllo e campione dispensato in doppio. Il C.V.% di ciascun replicato dovrà essere inferiore al 15%.. Tracciare la curva di calibrazione La curva di calibrazione potrà essere tracciata in automazione o manualmente come segue, con la concentrazione degli autoanticorpi anti-mpo su scala log, rispetto alle DO su scala lin, per ciascun calibratore: In automazione utilizzare un software adeguatamente validato, scegliendo il fitting che meglio si adatta ai dati. Manualmente utilizzando carta log/lineare (semilogaritmica) tracciare una curva uniforme attraverso i punti (non una retta o una punto-punto). 4. Trattamento dei punti anomali Se uno dei punti fuoriesce dalla curva, questo potrà essere rimosso. Se in seguito a tale rimozione la curva assume una forma diversa rispetto a quella riportata sul Certificato QC o se più punti risultano fuorvianti, il dosaggio dovrà essere ripetuto. 5. Calcolo dei valori dei controlli Leggere i livelli degli autoanticorpi anti-mpo nei controlli direttamente sulla curva di calibrazione. I valori dei controlli dovrebbero rientrare nei range riportati sul Certificato QC. 6. Calcolo dei livelli anticorpali nei campioni prediluiti Leggere i livelli degli autoanticorpi anti-mpo nei campioni prediluiti direttamente sulla curva di calibrazione. Nota: I valori dei calibratori sono già corretti considerando un fattore 100 per la prediluizione 1:101 dei campioni. Non sono pertanto necessarie ulteriori correzioni. 7. Calibrazione del dosaggio Il dosaggio è calibrato in U/mL rispetto a un calibratore di riferimento arbitrario, in quanto non sono attualmente disponibili standard internazionali. Limitazioni del test 1. Il presente kit va utilizzato unicamente come sussidio diagnostico. Un risultato positivo è indice di alcune patologie che andranno confermate attraverso i parametri clinici e ulteriori test sierologici. 2. I risultati ottenuti nel dosaggio non rappresentano una prova diagnostica dell insorgere o meno di una determinata patologia. 4

5 Valori attesi Il range di normalità è stato determinato sul siero di 187 donatori sani. Il limite superiore di normalità è espresso come concentrazione media + 8 DS (deviazioni standard) ca., vale a dire 9,0 U/mL, con una media di 1,6 U/mL e una DS di 0,97 U/mL. I range rappresentano unicamente un parametro guida. I dosaggi ELISA risultano molto sensibili e in grado rivelare differenze minime nelle popolazioni dei campioni. Si raccomanda pertanto che ciascun laboratorio stabilisca i propri limiti di normalità, in base alla popolazione locale, alla strumentazione e alle tecniche impiegate. RANGE ATTESO 9,0 U/mL Risultato negativo > 9,0 U/mL Risultato positivo Caratteristiche Metodologiche Precisione La precisione intra- ed inter-saggio è stata determinata su campioni che rientravano nei range della curva di calibrazione. Le medie ed i C.V.% di ciascun campione sono qui di seguito riportati: PRECISIONE INTRA-SAGGIO n=16 Concentrazione (U/mL) C.V. % Campione 1 4,1 9,5 Campione 2 8,2 2,4 Campione 7,, PRECISIONE INTER-SAGGIO n= Concentrazione (U/mL) C.V. % Campione 1 4,8 8,5 Campione 2 9,4 1, Campione 7, 5,7 Range normale Gli anticorpi anti-mpo sono stati determinati in 187 donatori sani adulti (90 uomini e 97 donne). In base a un cut-off positivo di >9,0 U/mL, tutti i campioni sono risultati negativi. Il cut-off costituisce unicamente un parametro guida. Si raccomanda che ciascun laboratorio stabilisca i propri limiti di normalità. Specificità, Sensibilità e Concordanza Relative Sono state determinate specificità, sensibilità e concordanza relative, rispetto a un kit EIA alternativo per anti-mpo, utilizzando 77 campioni. EIA Alternativo + - BINDAZYME Anti-MPO EIA Sensibilità relativa 90,0% Specificità relativa 96,5% Concordanza relativa 94,8% Sostanze Interferenti Sono stati dosati vari tipi di siero per verificare i possibili effetti di sostanze interferenti. I risultati sono qui espressi in numero di campioni positivi / numero di campioni dosati. Siero Positivi/No. dosati Lipemici 0/8 Emolizzati 0/10 Bilirubina elevata 0/10 Iperproteine (Mieloma) 0/10 Sensibilità Analitica La sensibilità è stata determinata come concentrazione media + 2 DS, su 16 determinazioni del diluente dei campioni, ottenendo un valore di 0,4 U/mL. Range di Misurazione Il range di misurazione del dosaggio è tra 1,2-100 U/mL. 5

6 Schema Piastra A B C D E F G H Riassunto del metodo 1. Dispensare 100µL di ciascun controllo e calibratore pronto per l uso e dei campioni diluiti 1:101 nei rispettivi pozzetti. Incubare per 0 minuti. Lavare. 2. Dispensare 100µL di coniugato in tutti i pozzetti. Incubare per 0 minuti. Lavare.. Dispensare 100µL di substrato in tutti i pozzetti. Incubare per 0 minuti. 4. Dispensare 100µL di soluzione bloccante in tutti i pozzetti. Misurare l assorbanza a 450nm. QUANTA Lite e INOVA Diagnostics sono marchi registrati Copyright 2012 Tutti i diritti riservati 6

7 Bibliografia 1. Ramirez G, Khamashata M. A and Hughes G. R. V. The ANCA test: Its clinical relevance. Annals of the Rheumatic Diseases; 1990; 49: Noel L. H et al. Antineutrophil cytoplasm antibodies: Diversity and clinical applications. Advances in Nephrology; 199; 22: Gross W. L, Schmitt W. H and Csernok E. ANCA and associated diseases: Immunodiagnostic and pathogenic aspects. Clin. Exp. Immunol.; 199;91: Gross W. L, Hauschild S and Mistry N. The clinical relevance of ANCA in vasculitis. Clin. Exp. Immunol; 199; 9: Hagen E. C et al. Development and standardisation of solid phase assays for the detection of antineutrophil cytoplasmic antibodies (ANCA). A report on the second phase of an international co- operative study on the standardisation of ANCA assays. Journal of Immunological Methods, 1996; 196: Savage C. O. S. The interaction of endothelial cells with inflammatory cells in vasculitis. Sarcoidosis Vasculitis and Diffuse Lung Diseases; 1996; 1: Special Issue 7. Bosch X. et al. Prognostic implication of anti-neutrophil cytoplasmic autoantibodies with myeloperoxidase specificity in anti-glomerular basement membrane disease. Clinical Nephrology; 1991; : Cohen J. W, Tervaert et al. Autoantibodies against myeloid lysosomal enzymes in crescentic glomerulonephritis. Kidney International; 1990; 7: Rump J. A. et al. P-ANCA of undefined specificity in ulcerative colitis: correlation to disease activity and therapy. Advances in Experimental Medicine and Biology; 199; 6: Lesavre P. et al. Atypical autoantigen targets of perinuclear antineutrophil cytoplasm antibodies (P-ANCA): Specificity and clinical associations. Journal of Autoimmunity; 199; 6: Broekroelofs J, MD et al. Anti-neutrophil cytoplasmic antibodies (ANCA) in sera from patients with Inflammatory Bowel Disease. Digestive Diseases and Sciences, 1994; : Nölle B, Specks U. et al. Anti-cytoplasmic antibodies: their immunodiagnostic value in Wegener s granulomatosis. Ann Intern Med, 1989; 111: Protein Reference Unit Handbook of Autoimmunity (rd Edition) 2004 Ed A Milford, Ward. J. Sheldon, GD Wild. Publ. PRU Publications, Sheffield Biosafety in Microbiological and Biomedical Laboratories. Center for Disease Control/National Institute of Health, 2007, Fifth Edition. Fornitore: INOVA Diagnostics, Inc Old Grove Road San Diego, CA 9211 United States of America Technical Service (U.S. & Canada Only) : Technical Service (Outside the U.S.) : support@inovadx.com Rappresentante Autorizzato: Medical Technology Promedt Consulting GmbH Altenhofstrasse 80 D-6686 St. Ingbert, Germany Tel.: Fax.: ITA July 2012 Revision 7