ABX Pentra Lactic Acid

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1 2017/09/13 A93A01294CIT A11A ml 10 x 10 ml Pentra C400 Reagente diagnostico per la determinazione quantitativa in vitro dell'acido lattico nel plasma mediante colorimetria. QUAL-QA-TEMP-0846 Rev.9 Versione dell'applicazione Plasma: Lact 1.xx Uso previsto è un reagente diagnostico per la determinazione quantitativa in vitro dell'acido lattico nel plasma mediante colorimetria. Le misurazioni dell'acido lattico per la valutazione dello stato acido-base vengono utilizzate nella diagnosi e nel trattamento dell'acidosi lattica (acidità del sangue superiore ai livelli normali). Interesse clinico (1) L'acido lattico è il prodotto finale della glicolisi aerobica e rappresenta la fonte principale di energia di alcuni tessuti. È considerato il migliore indicatore dello stato di ossigenazione dei tessuti. È utilizzato in particolare nei trattamenti di rianimazione in caso di shock ipovolemico, tossico-infettivo o cardiogeno, così come nel trattamento delle acidosi respiratorie del neonato. Questa determinazione è utilizzata anche in medicina sportiva per migliorare le prestazioni atletiche. Metodo (2, 3) a Metodo colorimetrico enzimatico. Metodo Trinder. Il lattato è un metabolita intermedio della glicolisi che contribuisce al mantenimento del valore del ph del a Modifica: modifica del paragrafo "Metodo". b Modifica: modifica del paragrafo "Reagenti". sangue. La lattato ossidasi attiva il rilascio di perossido di idrogeno che, reagendo con 4-aminoantipirina ed ESPAS, dà origine a un complesso colorato in presenza di perossido. L'intensità della colorazione è proporzionale alla quantità di lattato presente nel campione. Lattato ossidasi Lattato + O 2 Piruvato + H 2 O 2 Perossidasi 2H 2 O 2 + 4AAP + ADPS Chinoneimina + 4H 2 O (4 AAP = 4-aminoantipirina, ADPS = n-etil-n-sulfopropilm-anisidina Reagents b è liofilizzato. Reagente 1: Tampone fosfato (ph 7,50) ADPS 100 mmol/l 0,94 mmol/l Sodio azide < 0,1% Reagente 2: Lattato ossidasi Perossidasi 4-aminoantipirina 450 U/L 2000 U/L 0,40 mmol/l deve essere utilizzato secondo le indicazioni specifiche del reagente. Il produttore non garantisce le prestazioni qualora il prodotto venga utilizzato in modo non conforme. 1 / 5

2 Manipolazione in rack 1. Dissolvere il reagente 2 in 10 ml di reagente 1, come illustrato sulla fiala del reagente Richiudere la fiala e omogeneizzare la miscela capovolgendo con delicatezza. La soluzione è pronta per l'uso dopo 15 minuti. 3. Versare il volume di soluzione necessario per l'attività di laboratorio quotidiana in una fiala di reagente da 15 o 10 ml. 4. Collocare la fiala in una posizione disponibile sul rack. Reagente 5. Eliminare l'eventuale schiuma utilizzando una pipetta di plastica. 6. Collocare il rack reagenti nel comparto refrigerato dei reagenti di Pentra C400. Manipolazione in cassetta 1. Dissolvere il reagente 2 in 10 ml di reagente 1, come illustrato sulla fiala del reagente Richiudere la fiala e omogeneizzare la miscela capovolgendo con delicatezza. La soluzione è pronta per l'uso dopo 15 minuti. 3. Identificare la cassetta utilizzando le apposite etichette per reagenti con codice a barre (604). 4. Trasferire il reagente necessario per l'attività di laboratorio quotidiana nel comparto 1 (capacità 30 ml) della cassetta 30/10 fornita (vedere lo schema riportato). Il comparto 2 della cassetta non verrà utilizzato. 6. Collocare la cassetta di reagenti nel comparto refrigerato dei reagenti di Pentra C400. Calibratore Ai fini della calibrazione, utilizzare gli elementi descritti di seguito. Multical, rif. A11A01652 (non incluso) 10 x 3 ml (liofilizzato) Controllo Ai fini del controllo qualità interno, utilizzare gli elementi descritti di seguito. N Control, rif. A11A01653 (non incluso) 10 x 5 ml (liofilizzato) P Control, rif. A11A01654 (non incluso) 10 x 5 ml (liofilizzato) Analizzare ogni controllo quotidianamente e/o dopo una calibrazione. La frequenza dei controlli e i limiti di fiducia devono essere conformi alle istruzioni di laboratorio e alle direttive specifiche del singolo paese. Per l'analisi dei materiali di controllo della qualità, attenersi alle disposizioni nazionali, regionali e locali. I risultati devono essere compresi nel range dei limiti di fiducia definiti. Ciascun laboratorio è tenuto a fissare una procedura da seguire nel caso in cui i risultati oltrepassino detti limiti di fiducia. Materiali necessari non in dotazione Analizzatore automatico di chimica clinica: Pentra C400 Calibratore: Multical, rif. A11A01652 Controlli: N Control, rif. A11A01653, e P Control, rif. A11A01654 Attrezzature standard per laboratorio. Campione (4) Plasma in litio eparina. 5. Eliminare l'eventuale schiuma utilizzando una pipetta di plastica. Gli anticoagulanti non riportati nell'elenco non sono stati testati da HORIBA Medical. Il loro utilizzo con questa analisi è pertanto sconsigliato. 2 / 5

3 Stabilità: A C: 3 giorni A 4-8 C: 3 giorni A -20 C: 3 giorni Range di riferimento (5) Ogni laboratorio deve determinare i propri range di riferimento. I valori forniti in questo documento sono puramente indicativi. 0,50-2,20 mmol/l (4,5-20 mg/dl). Conservazione e stabilità Se conservati in fiale chiuse a una temperatura compresa tra 2-8 C, i reagenti rimangono stabili fino alla data di scadenza riportata sull'etichetta. Una volta ricostituito, è stabile per: 8 ore a C 7 giorni a 2-8 C Gestione dei rifiuti Attenersi alle disposizioni locali. Questo reagente contiene meno dello 0,1% di sodio azide come conservante. La sodio azide può reagire con piombo e rame e formare un complesso metalloazide esplosivo. Precauzioni di carattere generale c Il reagente può essere utilizzato esclusivamente da esperti a fini diagnostici in vitro. Solo per l'uso previsto. Questo reagente è classificato come non pericoloso in conformità alla direttiva (CE) 1272/2008. EUH208: contiene lattato 2-monoossigenasi. Può provocare una reazione allergica. Evitare qualsiasi contatto tra il reagente e la pelle per prevenire la contaminazione a causa del lattato presente nel sudore. Non ingerire. Evitare il contatto con la cute e con le membrane mucose. Avvertenza: questo reagente è derivato da sostanze di origine animale. Deve pertanto essere trattato come potenzialmente infetto e deve essere manipolato con la dovuta cautela in conformità alle buone pratiche di laboratorio (6). Rispettare le precauzioni per l'uso standard di laboratorio. Le fiale di reagenti sono monouso e devono essere eliminate in conformità alle disposizioni locali. Consultare la scheda di sicurezza specifica del reagente. Non utilizzare il prodotto se vi sono segni evidenti di deterioramento biologico, chimico o fisico. L'utente è tenuto a verificare che il presente documento faccia riferimento al reagente utilizzato. Prestazioni con Pentra C400 I dati sulle prestazioni elencati di seguito sono rappresentativi delle prestazioni con i sistemi HORIBA Medical. Numero di analisi: circa 260 analisi Volume del campione: 3,0 µl/analisi Limite di rilevabilità: Il limite di rilevabilità viene determinato in base al protocollo Valtec (7) ed equivale a 0,03 mmol/l (0,3 mg/dl). Accuratezza e precisione: Ripetibilità (precisione intra-serie) 3 campioni di concentrazione bassa, media ed elevata e 2 controlli vengono analizzati per 20 volte in conformità alle indicazioni fornite nel protocollo Valtec (7). controllo 1 controllo 2 mmol/l Valore medio CV % mg/dl 1,62 14,6 0,6 3,24 29,2 0,7 Campione 1 1,05 9,5 0,8 Campione 2 3,47 31,2 0,4 Campione 3 7,56 68,1 0,5 c Modifica: modifica delle precauzioni di carattere generale. 3 / 5

4 Riproducibilità (precisione complessiva) 2 campioni (di livello medio ed elevato) e 2 controlli vengono analizzati in duplice test per 20 giorni (2 serie al giorno) in conformità alle indicazioni fornite nel protocollo CLSI (NCCLS) EP5-A (8). controllo 1 controllo 2 mmol/l Valore medio CV % mg/dl 1,67 15,1 1,16 3,31 29,8 1,16 Campione 1 3,48 31,4 1,29 Campione 2 7,41 66,8 1,65 Intervallo di misurazione: L'analisi ha confermato un intervallo di misurazione compreso tra 0,03 e 13,3 mmol/l (0,3 e 120 mg/dl), con una post-diluizione automatica fino a 39,9 mmol/l (360 mg/dl). La linearità del reagente è stata determinata fino a 13,3 mmol/l (120 mg/dl) in base alle indicazioni fornite nel protocollo CLSI (NCCLS), EP6-A (9). Correlazione: 100 campioni di pazienti (plasma) sono stati messi a confronto prendendo come riferimento un reagente disponibile in commercio in conformità alle indicazioni fornite nel protocollo CLSI (NCCLS), EP9-A2 (10). Di seguito è riportata l'equazione per la linea allometrica ottenuta mediante la regressione di Passing-Bablock (11): Y = 1,04 X + 0,04 (mmol/l) Y = 1,04 X + 0,36 (mg/dl) con coefficiente di correlazione r 2 = 0,9986. Interferenze: Emoglobina: Trigliceridi: Bilirubina totale: Bilirubina diretta: N-acetilcisteina (NAC): a 290 µmol/l (500 mg/dl). a una concentrazione di Intralipid (rappresentativo della lipemia) di 7 mmol/l (612,5 mg/dl). a 615 µmol/l (36,0 mg/dl). a 513 µmol/l (30,0 mg/dl). I pazienti trattati con N-acetilcisteina (NAC) a seguito di overdose di paracetamolo possono fornire risultati erroneamente bassi. Young fornisce altri limiti sotto forma di elenco di variabili preanalitiche e farmaci noti che possono influenzare questa metodologia (12, 13). Stabilità della calibrazione: Il reagente viene calibrato il giorno 0. Per controllare la stabilità della calibrazione, vengono analizzati 2 campioni di controllo. La durata della stabilità della calibrazione è di 1 settimana. Nota: si consiglia di effettuare nuovamente la calibrazione quando si cambiano i lotti di reagente e quando i risultati dei controlli della qualità non rientrano nell'intervallo stabilito. Versione dell'applicazione: 1.xx Fattore di conversione: mmol/l x 9,01 = mg/dl Riferimenti bibliografici 1. Thomas L. Lactate. In: Thomas L, editor. Clinical Laboratory Diagnostics. 1 st ed. Frankfurt: TH-Books Verlagsgesellschaft, (1998): Trinder P. Determination of glucose in blood using glucose oxidase with an alternative oxygen acceptor. Ann. Clin. Biochem. (1969) 6: Sacks DB. Carbohydrates. In: TIETZ Fundamentals of Clinical Chemistry. 5 th Ed., Burtis CA, Ashwood ER (WB Saunders eds., Philadelphia, USA), (2001): Guder WG, Zawta B. The Quality of Diagnostics Samples. Samples: From the Patient to the Laboratory. 1 st Ed. Guder WG, Narayanan S, Zawta B. (WHILEY-VCH, Darmstadt, Germany) (2001): Toffaletti J, Hammes ME, Gray R, Lineberry B, Abrams B. Lactate measured in diluted and undiluted whole blood and plasma: comparison of methods and effect on hematocrit. Clin. Chem. (1992) 38: Council Directive (2000/54/EC). Official Journal of the European Communities. No. L262 from October 17, 2000: Vassault A, Grafmeyer D, Naudin C et al. Protocole de validation de techniques (document B). Ann. Biol. Clin. (1986) 44: Evaluation of Precision Performance of Clinical Chemistry Devices. Approved Guideline, CLSI (NCCLS) document EP5-A (1999) 19 (2). 9. Evaluation of the Linearity of Quantitative Analytical Methods. Approved Guideline, CLSI (NCCLS) document EP6-A (2003) 23 (16). 10. Method Comparison and Bias Estimation Using Patient Samples. Approved Guideline, 2 nd ed., CLSI (NCCLS) document EP9-A2 (2002) 22 (19). 4 / 5

5 11. Passing H, Bablock W. A new biometrical procedure for testing the equality of measurements from two different analytical methods. J. Clin. Chem. Clin. Biochem. (1983) 21: Young DS. Effects of Drugs on Clinical Laboratory Tests. 4 th Edition, Washington, DC, AACC Press (1997) 3: Young DS. Effects of Preanalytical Variables on Clinical Laboratory Tests. 2 nd Edition, Washington, DC, AACC Press (1997) 3: / 5

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