Focus sul test BRCA LAURA CORTESI. SSD di Genetica Oncologica. Azienda Ospedaliero-Universitaria Policlinico di Modena

Transcript

1

2 Focus sul test BRCA LAURA CORTESI SSD di Genetica Oncologica Azienda Ospedaliero-Universitaria Policlinico di Modena

3 5200 new cases in 2017 in Italy 3130 deaths in % III - IV stage

4

5 TP53/Rb pathway Chromosomal instability PTEN, ARID1A, PI3KA KRAS, PTEN mutations Clear cell 12% KRAS mutations 15% 5% Mucinous 5% High-grade serous 63% TP53/Rb pathway Chromosomal instability Romero I et al. Endocrinology 2012; 153:

6 Homologous Recombination (HR) Deficiency in High Grade Ovarian Cancer Other 34% MMR Germline 2% CCNE1 Amplification 15% BRCA1 Germline 8% BRCA2 Germline 6% BRCA1 Somatic 3% BRCA2 Somatic 3% BRCA1 Methylation 11% EMSY Amplification 6% PTEN Loss 5% Other HRD 7% BRCA Mutation 31% (14%germline) Others HR deficiency 18% No HR deficiency HR deficiency Levine, D. The Cancer Genome Atlas, Molecular profiling of serous ovarian cancer

7 BRCA1 and BRCA2 The primary genetic risk factors for ovarian cancer BRCA1 or BRCA2 mutation are dominant with subsequent epigenetic silencing or loss of the normal allele in the somatic cell

8 BRCA1 BRCA2 Increasing interest in hereditary breast and ovarian cancer? breast Great interest Increasing interest ovary Indifference

9 As an autosomal dominant syndrome, a deleterious BRCA mutation can be transmitted through maternal or paternal lineages.

10 72% 69% Kuchenbaecher KB, JAMA 2017

11 BRCA1 tumor suppressor protein DNA repair Protein Ubiquitination Regulation of transcription Regulation of cell cycle Repair of double strand DNA breaks / DNA adducts Mediates E2- dependent ubiquitination Modulates gene expression in response to cell stress P21 DNA damage Induces cell cycle arrest at the G1/S, S and G2/M checkpoints Prevention of tumorigenesis

12 Toss & Cortesi, 2013

13 DNA damaging RAD51 forms nucleoprotein filaments ATR Chk2 ATM L G F I D2 A M B C E BRCA1 Ub RAD51 RAD51 RAD51 RAD51 RAD51 BRCA2 BRCA1 is a DNA damaging detector, blocks the transcription by cell cycle arrest at the G1/S, S and G2/M checkpoints and by ubiquitination of FANCD2 otherwise induces the DSB repair by chromatin remodelling RAD51 Toss & Cortesi, 2013

14 Oncogenetic Counselling BRCA1 BRCA2 Prognostic factor Predictive Factor

15 Chemosensitivity/resistance Tassone P. et al.; 2003:88;

16 Chemosensitivity/resistance Tassone P. et al.; 2003:88;

17 Bolton, JAMA 2012

18

19 Phase II trial of trabectedin in BRCA-mutated and/or BRCAness phenotype recurrent ovarian cancer patients: the MITO 15 trial PFS: BRCA Non BRCA OS: BRC A Non BRCA Lorusso D., Ann of Oncol 2016

20 BRCA status and response to chemotherapy 42% platinum resistant; 58% partially platinum sensitive OVA-301 phase III study in recurrent ovarian cancer PLD +/- trabectedin Kaye SB, et al. J Clin Oncol 2012 Monk, et al. Ann Oncol 2015

21 Trabectedina:OVA-301

22 Cortesi L., Current Cancer Drug Targets 2018

23 BRCA Mutation in Ovarian Cancer Patients w/out Family History

24 Germline BRCA test BRCA mutation frequency in 1001 patients with non mucinous ovarian cancer Germline BRCA mutation detected in: 14.1% of the studied population 6.3% of clear cell subtype 8.4% of endometrioid subtype 16.6% of serous histotype 17.1% of high grade serous subtype 15.6% <40 yrs old 24.2% yrs old 17.1% yrs old 8.3% >60 yrs old 44% with no family history of both ovarian and breast cancer Alsop K, et al. J Clin Oncol 2012; 30:

25 PROPORTION OF FAMILIAL vs SPORADIC OC 30 OC BRCA1/2 positive

26 PROPORTION OF PATHOGENIC VARIANTS (C4-C5), NON-PATHOGENIC VARIANTS IN TESTING SEROUS HIGH GRADE OC 73 OC TESTED FOR BRCA1/2

27 Sanger Sequencing FFPE sample 5 slides of 10 µm Promega Maxwell 16 LEV FFPE DNA kit 10ng tumor DNA NGS Ion Torrent Oncomine BRCA Assay Ion Torent Chef / Ion Torrent S5 SNVs & Indel Ion Reporter Oncomine >5% allele pipeline frequency + C3, C4, C5 variants CUSTOM BIOINFORMATIC PIPELINE CNVs for sequence alignment and variant calling MLPA confirmation on both Tumor & Genomic DNAs FISH confirmation on Genomic DNA confirmation on FFPE Sample

28 Sanger Sequencing + (pos) NGS on tumor sample DNA (pos) Sanger on Genomic DNA Germline variant SNVs & Indel >5% allele frequency C3, C4, C5 variants Thermo Minor Variant Finder Software confirmation on both Tumor & Genomic DNAs (pos) NGS on tumor sample DNA (neg) Sanger on Genomic DNA Somatic variant CNVs MLPA FISH (pos) NGS on tumor sample DNA (pos) MLPA on Genomic DNA Germline CNV confirmation on Genomic DNA MRC-Holland Coffalyser.net Software confirmation on FFPE Sample (pos) NGS on tumor sample DNA (neg) MLPA on Genomic DNA (pos) FISH on FFPE Sample Somatic CNV

29

30 Sono eleggibili al test BRCA tutte le pazienti con diagnosi di carcinoma epiteliale ovarico non mucinoso e non borderline, di carcinoma delle tube di Falloppio e di carcinoma peritoneale primitivo per completare la fase diagnostica molecolare in previsione di un eventuale utilizzo terapeutico e per favorire l accesso ad una consulenza pre-test nell ambito dei percorsi di prevenzione.

31 CRITERI PER ACCEDERE AL TEST Breast Ovarian Cancer (BOC): Pazienti affette da BC e OC Hereditary Ovarian Cancer (HOC): 2 o più pazienti affette da OC, con parentela di I grado e su 2 diverse generazioni Sospetto ereditario per carcinoma mammario e/od ovarico (SHBOC): 3 o più pazienti affetti da BC e OC con parentela di I grado senza giovane età o bilateralità, oppure senza parentela di I grado e con giovane età o bilateralità Hereditary Breast/Ovarian Cancer (HBC/HBOC): 3 o più pazienti affetti da BC (e OC), di cui uno con BC entro i 40 anni o bilaterale e parentela di I grado tra i 3 individui Early Onset Breast Cancer (EOBC): Pazienti affette da BC entro i 35 anni di età Male Breast Cancer (MBC): Paziente affetto da BC maschile Familiare per carcinoma mammario e/od ovarico (FBOC): 3 pazienti affetti da BC ed OC senza essere HBOC o SHBOC Fortemente sospette per familiarità (SFBC+/SFBOC+/SFBOC): 2 parenti di I grado di cui 1 con età 40 anni o bilaterale oppure 1 paziente affetta da BC 40 anni o bilaterale e 1 da OC con familiarità di I grado oppure 1 BC e 1 OC con parentela di I grado Triple Negative Breast Cancer (TNBC) < 60 anni Carcinoma Ovarico Non Mucinoso e Non Border-line BRCAPRO o Tyrer-Cuzick > 40% in donna sana

32 Il test BRCA deve essere richiesto per la ricerca di varianti patogenetiche costituzionali e va valutata l eventuale fattibilità del test BRCA somatico. Per un adeguata esecuzione del test è necessaria per i laboratori una comprovata validazione ed un controllo di qualità esterno del test proposto

33 Informazioni sulle possibilità terapeutiche pz con nuova diagnosi di C.O. non mucinoso e non borderline Se BRCA+ : Sempre Carbo+Taxolo+ Bevacizumab o Carbo i.p 3 settimane 1 AZIONE: COG informativa + COG pretest effettuata da oncologici o ginecologi con competenze oncologiche FORMATI 2 AZIONE: COG post test Comunicazione del risultato analisi genetica (se acconsente)

34