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Agata Cenci
6 anni fa
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6 ER membrane ribosomi lume

7 RER and SER

9 Trasporto di proteine nei mitocondri

12 Traduzione In vitro su polisomi liberi : NH2 Signal peptide Leader peptide: hydrophobic amino acids Traduzione In vivo nella cellula: NH2 COOH COOH La traduzione In vitro su polisomi liberi produce proteine più lunghe (secrete)

13 (microsome-bound) Traduzione In vitro su polisomi legati all ER ER lumen NH2 NH2 Produce Proteine native (senza peptide leader) COOH Ipotesi del Segnale COOH

14 Gunter Blobel Nobel Prize 1999 Signal hypothesis "for the discovery that proteins have intrinsic signals that govern their transport and localization in the cell"

15 Two populations of ribosomes: Free - cytosolic Bound - ER microsomes

18 L IPOTESI DEL SEGNALE

19 PAUSA nella TRADUZIONE Particella di riconoscimento del segnale (SRP) Canale di traslocazione GTP GDP+Pi

20 Signal Recognition Particle SRP Particella di riconoscimento del segnale

21 Traslocazione di proteine nell ER signal peptide citosol translocation channel signal peptidase fig ER-lume Proteine solubile che verrà secreta

25 Most cytosolic transmembrane proteins have an N-terminal signal sequence and an internal topogenic sequence Type I protein

26 Stop-transfer sequence Type I Membrane Protein citosol signal peptide ER-lume

27 Topologies of some integral membrane proteins synthesized on the rough ER

28 A single internal signal-anchor sequence directs insertion of single-pass Type II transmembrane proteins Type II protein, no N-terminal signal sequence

29 Type II Membrane Protein ER-lumen

30 Multipass transmembrane proteins have multiple topogenic sequences

31 Double-pass Membrane Protein

32 Multipass Membrane Protein

33 Figure Molecular Biology of the Cell ( Garland Science 2008)

34 L IPOTESI DEL SEGNALE

35 Most cytosolic transmembrane proteins have an N-terminal signal sequence and an internal topogenic sequence Type I protein

36 Protein co- and post-translational modifications in the ER 1 proper folding / quality control 2 formation of disulfide bonds 3 addition of carbohydrates (glycosylation) 4 assembly of multimeric proteins

37 Chaperones: folding ER unfolded protein chaperone protein

38 Chaperones: quality control ER properly folded protein misfolded protein chaperone protein refolding Molte proteine non riescono a raggiungere il loro corretto stato ripiegato (>80% per alcune proteine)

39 proteina disolfuro isomerasi - PDI

40 Correct folding of newly made proteins is facilitated by several ER proteins Copyright (c) by W. H. Freeman and Company

41 Protein co- and post-translational modifications in the ER 1 proper folding / quality control 2 formation of disulfide bonds 3 addition of carbohydrates (glycosylation) 4 assembly of multimeric proteins

42 Sugar-Protein bonds N-linked glycosylation O-linked glycosylation

43 N-linked glico proteina.. N X S/T. Asparagine-X-Ser/Thr COOH oligosaccaride glyco-moiety

44 N-glicosilazione co-traduzionale

50 Figure 12-55b Molecular Biology of the Cell ( Garland Science 2008)

52 L IPOTESI DEL SEGNALE

53 RER and SER

54 La maggior parte dei doppi strati lipidici è assemblata nell ER

55 scramblasi Flippasi

56 Proteine di scambio dei fosfolipidi

57 Vesicular transport secretion ER Golgi complex

58 DA NON USARE

59 detergent lysis cell homogenate sonication homogenization

61 cell homogenate centrifugation supernatant pellet differential centrifugation S1 S2 S3 S4 V1 V2 V3 V4 fig. 8-8 P1 P2 P3 100,000xg P4

62 12 Density gradient centrifugation (or Equilibrium sedimentation)

63 smooth microsomes (from smooth ER) cells 13 ER homogenate fig. 8-9,12-39 (from rough ER) rough microsomes reclosure

64 More secretion correlates with more ER There are ER bound polysomes NH2 COOH In vitro translation on free polysomes produces longer proteins (of the secreted type) with a hydrophobic leader peptide

65 Figure Molecular Biology of the Cell ( Garland Science 2008)

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