Studio sull epatite E, zoonosi emergente nei paesi industrializzati, quale malattia professionale in suinicoltura

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1 Studio sull epatite E, zoonosi emergente nei paesi industrializzati, quale malattia professionale in suinicoltura Caruso Claudio, Rosamilia Alfonso S.S. Virologia Liguria e Valle d Aosta.

2 Tipologia produttiva Percentuale Percentuale cumulata Aperto 10,32 10,32 Chiuso 7,48 17,80 Produzione 49,17 66,97 Autoconsumo 33,03 100,00 Figura 1. distribuzione degli allevamenti suini in Piemonte

3 Classi di consistenza Percentuale % cumulata Fino a 10 43,48 43, capi 6,28 49, capi 2,13 51, capi 13,84 65, capi 12,40 78, capi 20,54 98,67 >5001 capi 1,33 100,00 Graf. 1: distribuzione consistenza aziende suine. Sull'asse delle x sono rappresentati i numeri di capi per azienda sull'asse delle Y la frequenza del numero di aziende

4 INTRODUZIONE E SCOPO DEL PROGETTO MATERIALI E METODI RISULTATI CONCLUSIONI 5

5 PARTE I Indagine sierologica anticorpi anti- HEV suini; Indagine virologica presenza HEV feci e sangue suini; Analisi filogenetica degli isolati. PARTE II (Umana- Ospedale Amedeo di Savoia ) Anticorpi anti - HEV in cat. professionali esposte e non; Fattori di rischio correlati alla malattia

6 MATERIALI E METODI

7 TIPOLOGIA Ciclo aperto Ciclo chiuso NUMERO MEDIA SCROFE MEDIA CAPI CONSISTENZA CAPANNONI min.1- max min.2- max. 11

8 10 Scrofe Magroncelli 6 Reparto scrofe Reparto magroncelli 10 Scrofe Magroncelli 840

9 INDAGINE SIEROLOGICA Kit ELISA indiretto tipo trapping Antigene capsidico ORF2 HEV legato alla fase solida attraverso l anticorpo monoclonale specifico 1/100 >10% < 10% (Stercoli et al., 2010).

10 INDAGINE VIROLOGICA 10% P/V in PBS 1X 5000 rpm x 5min 20 l H 2 0 Sangue EDTA +

11 MIX TOTALE (Jothikumar et al., 2006) Master Mix 2x 12,5µl (JVHEV_R) 10 M 0,625µl (JVHEV_F) 10 M 0,625µl (Probe)-BHQ1 M 0,25µl MgSO 4 50 M 0,5µl RNA estratto 3 µl Taq Mix 0,5 l H 2 0 Rnase/DNase-free. 7 µl TOTALE 25 µl

12 MIX TOTALE (F.F. Huang et al., 2002) Buffer 10x + Mgcl 2 5µl P1,P2,P3,P4 1, 5µl dntps MIX 1 µl Taq (Roche) 5U/ l 0,2 GC Roche 10 µl H 2 O 29,3 1,5-10 l cdna TOTALE 50 µl 710 bp 348 bp

13 ANALISI FILOGENETICA

14 PARTE II (Umana) 69 PROFESSIONALMENTE ESPOSTI NON ESPOSTI <età<75

15 Kit ELISA commerciale Antigene ricombinanti ORF2-ORF3 Western blot

16 RISULTATI

17 41/42 INDAGINE SIEROLOGICA 28 = allevamenti a ciclo aperto 13 = allevamenti ciclo chiuso 97% 413/840 49% S 305/413 M 108/413 74% 26%

18 INDAGINE VIROLOGICA 15/42? 2/400 36% 57/504 12% 44 =10 allevamenti a ciclo aperto 13 = 5 allevamenti ciclo chiuso S M 28% 16/57 41/57 72%

19 ANALISI FILOGENETICA 15 VS 11

20 ANALISI FILOGENETICA 1= 3c 2= 3e 8= 3f

21 E S P O S T E N O N E S P O S T E PARTE II (Umana) 4 1 Graf. 1: distribuzione sieropositività in un campione di 142 soggetti. esito esito Frequenza Percentuale Percentuale cumulativa negativi positivi

22 Graf. 2: Western Blot - 5 campioni positivi IgG indice di infezione pregressa.

23 CONCLUSIONI

24 Elevata % sieroprevalenza in allevamenti Piemontesi 49% Martinelli et al., Di Bartolo et al., Spagna 77% (Seminati et al.) Regno Unito 85% (Heath G.S. et al.) Sieropositività > nelle scrofe, rispetto ai magroncelli Di Bartolo et al., de Deus et al., Mcreary et al. La sieroprevalenza aumenta con l età del soggetto per continua esposizione al virus 74% VS 26%

25 % di isolati > nei magroncelli, rispetto alle scrofe Meng et al., Kanai et al., Fernandez-Barredo et al., Leblanc et al. Animali giovani sono più suscettibili all infezione per perdita dell immunità passiva materna 72% VS 28% Isolati virali identificati come genotipo 3 Martelli et al., Di Bartolo et al., Fogeda et al., Kaba et al., Dalton et al. Il genotipo 3 è l unico circolante in Europa. Il sottotipo f è il piu comune in Europa in suini e uomo

26 PARTE II (Umana) Esposto alla manipolazione di suini Associazione esito sierologico e Esposto Frequenza Percentuale Frequenza cumulativa no si Percentuale cumulativa? tutti i fattori della scheda epidemiologica per il disegno dello studio. Residenza nella Provincia di Cuneo Residenza nella provincia di Cuneo Frequenza Percentuale Frequenza cumulativa no si Percentuale cumulativa Sesso Sesso Frequenza Percentuale Frequenza cumulativa F M Percentuale cumulativa Nessuno dei 3 fattori considerati è risultato associato all esito sierologico.

27 WHO: The Global Prevalence of Hepatitis E Virus and Susceptibility: A Systematic Review-2010 E S P O S T E N O N E S P O S T E 2 3,5% 2-3% 4 1

28 S.S.Laboratorio Virologia

29 Simone Peletto Paola Modesto Mariagrazia Maniaci Claudia Boin Gigi Acutis Nicoletta Vitale Filippo Balsamelli Valeria Ghisetti Mariagrazia Milia Alex Proietti Bruno Sona Bruno Parizia Silvia Origlia

30 1. Xxx 2. Xxx 3. Xxx 4. Xxx 5. Xxx 6. Xxx 7. Xxx 8. Xxx 9. Xxx 10.Xxx 11.Xxx 12.Xxx 13.Xxx 14.Xxx 15.Xxx 16.Xxx 17.Xxx 18.Xxx 19.Xxx 20.Xxx 21.Xxx 22.Xxx 23.Xxx 24.Xxx 25.Xxx 26.Xxx 27.Xxx 28.Xxx 29.Xxx 30.Xxx 31.Xxx 32.Xxx 33.Xxx 34.Xxx 35.Xxx 36.Xxx 37.Xxx 38.Xxx 39.Xxx 40.Xxx 41.Xxx 42.Xxx 43.Xxx 44.Xxx 45.Xxx 46.Xxx 47.Xxx 48.Xxx 49.Xxx 50.Xxx 51.Xxx 52.Xxx 53.Xxx 54.Xxx 55.Xxx 56.Xxx 57.Xxx 58.Xxx 59.Xxx 60.Xxx 61.Xxx 62.Xxx 63.Xxx 64.Xxx 65.Xxx 66.Xxx 67.Xxx 68.Xxx 69.Xxx 70.Xxx 71.Xxx 72.Xxx 73.Xxx 74.Xxx 75.Xxx 76.Xxx 77.Xxx 78.Xxx 79.Xxx 80.Xxx 81.Xxx 82.Xxx 83.Xxx 84.Xxx 85.Xxx 86.Xxx 87.Xxx 88.Xxx 89.Xxx 90.Xxx 91.Xxx 92.Xxx 93.Xxx 94.Xxx 95.Xxx 96.Xxx 97.Xxx 98.Xxx 99.Xxx 100.Xxx 101.Xxx 102.Xxx 103.Xxx 104.Xxx 105.Xxx 106.Xxx 107.Xxx 108.Xxx 109.Xxx 110.Xxx 111.Xxx 112.Xxx 113.Xxx 114.Xxx 115.Xxx 116.Xxx 117.Xxx 118.Xxx 119.Xxx 120.Xxx 101.Xxx 102.Xxx 103.Xxx 104.Xxx 105.Xxx 106.Xxx 107.Xxx 108.Xxx 109.Xxx 110.Xxx 111.Xxx 112.Xxx 113.Xxx 114.Xxx 115.Xxx 116.Xxx 117.Xxx 118.Xxx 119.Xxx 120.Xxx 121.Xxx 122.Xxx 123.Xxx 124.Xxx 125.Xxx 126.Xxx 127.Xxx 128.Xxx 129.Xxx 130.Xxx 131.Xxx 132.Xxx 133.Xxx 134.Xxx 135.Xxx 136.Xxx 137.Xxx 138.Xxx 139.Xxx 140.Xxx 141.Xxx 142.Xxx

31 e voi per l attenzione