CELL BLOCK Preparazione e uso per immunoistochimica
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- Giacinta Adamo
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1 CELL BLOCK Preparazione e uso per immunoistochimica EXPOSANITA 2018 PATOLOGIA NODULARE DELLA TIROIDE: focus sugli approcci diagnostici Valentina Bartolucci UOC Anatomia Patologica - Università Campus Biomedico Roma
2 COSA E UN CELL BLOCK? E una metodica di allestimento che permette di ottenere un preparato in paraffina a partire da un campione citologico. Questa metodica permette di allestire numerosi vetrini per colorazioni speciali e immunoistochimica da un unico blocchetto. Aumenta sensibilità e specificità diagnostica rispetto allo striscio classico.
3 COME SI ALLESTISCE UN CELL BLOCK PLASMA/TROMBINA ALBUMINA AGAR HISTOGEL CELLIENT
4 PLASMA/TROMBINA Tra le prime metodiche a essere utilizzata per la semplicità e la facilità di reperimento dei materiali. La trombina si acquista mentre il plasma viene fornito dal laboratorio analisi. Metodica: 1. Centrifugazione 2. Scarto del sovranatante 3. 4 gocce di plasma per ogni ml di sedimento 4. 4 gocce di trombina 5. Risospendere 6. Lasciare riposare qualche minuto fino alla formazione del coagulo 7. Recuperare il coagulo e fissarlo in formalina
5 ALBUMINA Metodica piuttosto rapida con un unico limite, non funziona se il paziente ha assunto anticoagulanti. Si basa sulla coagulazione dell albumina bovina. Metodica: 1. Centrifugazione 2. Scarto del sovranatante gocce di albumina bovina al 30% 4. Fissare in alcol Lasciare riposare qualche minuto fino alla formazione del coagulo 6. Recuperare il coagulo e fissarlo in formalina
6 GEL AGGREGANTI: AGAR/HISTOGEL Sono entrambi gel che vengono fusi ad alte temperature, aggiunti al pellet, una volta raffreddati trattengono al loro interno le cellule e possono essere processati come un qualunque campione istologico. E una metodica più lunga delle altre ma permette di ottenere ottimi risultati.
7 AGAR - ALLESTIMENTO - Centrifugazione 1600 rpm per 10
8 AGAR - ALLESTIMENTO -
9 AGAR - ALLESTIMENTO - Centrifugazione 2700 rpm per 5
10 AGAR - ALLESTIMENTO - Si aggiunge agar sciolto a una temperatura di
11 AGAR - ALLESTIMENTO - 2 minuti a 90 C per far sciogliere nuovamente
12 AGAR - ALLESTIMENTO -
13 AGAR - ALLESTIMENTO -
14 Metodica: Il campione viene concentrato in un filtro grazie ad un sistema sottovuoto. Questo pellet viene fissato con un fissativo a base di metanolo. Si può utilizzare anche la formalina per una questione di rispetto dei protocolli di immunoistochimica del laboratorio. Il pellet viene processato e incluso in un blocchetto di paraffina. Tutto il processo dura 45 minuti per singolo campione. CELLIENT E uno strumento che permette di automatizzare l allestimento e la processazione dei citoinclusi.
15 CELL BLOCK VS STRISCIO: VANTAGGI Le cellule sono concentrate in un punto preciso del vetrino. Possibilità di allestire ulteriori vetrini a partire dallo stesso pellet, anche a distanza di tempo. I cell block vengono fissati in formalina, quindi si possono eseguire tutte le colorazioni speciali e immunoistochimica come su preparato istologico. Il campione è rappresentato nella sua totalità compresi aggregati cellulari o frammenti di tessuto (riconoscimento pattern tumorale).
16 figure professionali. CELL BLOCK VS STRISCIO: SVANTAGGI Tempo: L allestimento dei citoinclusi rispetto allo striscio richiede molto più tempo. Impiego di un operatore dedicato: L allestimento del citoincluso a differenza dello striscio può essere eseguito solo in laboratorio dal personale tecnico addestrato, mentre lo striscio può essere allestito in ambulatorio da diverse
17 IMMUNOISTOCHIMICA I campioni allestiti come cell block vengono fissati in formalina. Questo permette di effettuare immunoistochimica senza modificare i protocolli ottimizzati per l istologia, permettendo così standardizzazione e riproducibilità. Vengono allestiti vetrini con sezioni spesse 4 µm. Anticorpi testati su agoaspirato tiroideo: HBME-1 TIREOGLOBULINA GALECTINA3 TTF-1 CD56 CALCITONINA CK 19
18 GRAZIE PER L ATTENZIONE
Il pezzo operatorio: conservazione perfetta per una diagnosi ottimale: dalla sala riduzione al vetrino. A. Marazzi L. Annaratone
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