BIOLOGIA MOLECOLARE NEL LINFONODO SENTINELLA

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1 Lezione di Anatomia Patologica BIOLOGIA MOLECOLARE NEL LINFONODO SENTINELLA Luigia Macrì Università degli Studi di Torino AO-U San Giovanni Battista di Torino

2 1. Cos è il linfonodo sentinella? Linfonodo Sentinella Il Linfonodo Sentinella è il primo linfonodo che riceve la linfa da un tumore ed è quello che più probabilmente viene colonizzato dalle cellule tumorali, dando origine alle METASTASI linfonodali. 2. Chi esamina il linfonodo sentinella? L ANATOMO PATOLOGO è il medico che con un esame al microscopio valuta la presenza di metastasi nel Linfonodo Sentinella.

3 3. Quando può essere esaminato? La diagnosi al microscopio sul Linfonodo Sentinella, per definire se ci sono o meno metastasi, viene effettuata dall anatomo patologodopo o durante l intervento. In questo caso si parla di esame intraoperatorio. 2 mm EE 2 mm ICC

4 LINFONODO SENTINELLA FISSATO IN FORMALINA ED INCLUSO IN PARAFFINA RIDUZIONE CON SEZIONI SERIATE UN BLOCCHETTO IN PARAFFINA

5 J Clin Pathol 2004;57: Le procedure anatomo-patologiche per la valutazione del LS mancano di standardizzazione riduzione macroscopica utilizzo dell esame al congelatore numero di sezioni istologiche da esaminare utilizzo di colorazioni ancillari stesura del referto

6 STAGING nella VALUTAZIONE CLASSICA DEL LINFONODO SENTINELLA Based on AJCC/UICC TNM, 7th edition Protocol web posting date: October 2009 (sn): Valutatoilsolo linfonodo(i) sentinella. Se vengonoasportati6 o piùlinfonodisentinellae/o linfonodi non sentinella, questa sigla non dovrebbe essere utilizzata. pn0 Istologicamente non metastasi in linfonodo regionale, non ulteriori valutazioni per cellule tumorali isolate. pn0(i )Istologicamente non metastasi in linfonodo regionale, con valutazione immunoistochimica negativa pn0(i+) Gruppi di cellule maligne, o singole cellule, in linfonodo(i) regionale(i) non più grandi di 0.2 mm, o menodi200 cellule in una singola sezione istologica(evidenziate da colorazione E/E o ICC, incluse le cellule tumorali isolate) pn1 pn1mi: MICROMETASTASI (più grandi di 0.2 mm e/o composte da più di 200 cellule, ma nessuna metastasi più grande di 2.0 mm). pn1 a: METASTASI interessanti da1 a 3 linfonodi ascellari, con almeno unametastasipiùgrandedi2.0 mm

7 LINFONODO SENTINELLA FISSATO IN FORMALINA ED INCLUSO IN PARAFFINA RIDUZIONE CON SEZIONI SERIATE UN BLOCCHETTO IN PARAFFINA

8 4. Nuove tecnologie In questo caso l anatomo patologonon cerca più le cellule tumorali al microscopio, ma esegue indagini di biologia molecolareche permettono valutare la presenza di molecole di RNA proprie delle cellule di tumori della mammella (proteina CK19) nel Linfonodo Sentinella. In particolare la metodica One Step Nucleic Acid Amplification (OSNA) prevede l uso di uno strumento automatizzato e di prodotti dedicati (kit).

9 One Step OSNA Step Nucleic Acid Amplification PROCEDURA AUTOMATIZZATA DIAMPLIFICAZIONE DEGLI ACIDI NUCLEICI VERIFICA LA PRESENZA DEL GENE DELLA CK19 NEL TESSUTO LINFONODALE CONSENTE UNA DIAGNOSI MOLECOLARE DEL LINFONODO SENTINELLA INTRAOPERATORIA DEFINITIVA FORNISCE UN RISULTATO DINEGATIVO, MICROMETASTASI O MACROMETASTASI

10 La diagnosiosna SENTINELLA CLASSICO SENTINELLA OSNA Dimensioni delle metastasi mrna della CK19 Macro-Metastasi Micro-Metastasi ITC / background copie mrna/µl CK19 (1.0 x 10 8) copie mrna/µl CK19 - (5.0 x 10 6 )

11 FLOW-CHART DIAGNOSTICA - MOLINETTE Diagnosi di carcinoma mammario Valutazione ECOGRAFICA dei linfonodi LNF non sospetti LNF sospetti LINFONODO SENTINELLA Valutazione ICC della positività per CK-19 (sul tumore primitivo) Agoaspirato negativo positivo dissezione ascellare CK-19 POSITIVO CK-19 NEGATIVO OSNA + Imprint Metodica istologica standard

12 DIAGNOSI INTRAOPERATORIA SLN: utilizzo dell intero linfonodo morfologica 2 mm EE 2 mm ICC molecolare IMPRINT Interpretazione e diagnosi Patologo OSNA

13 2010: eseguiti 279 LS presso Breast Unit Molinette OSNA 110 casi Metodo Tradizionale 169 casi Macrometastasi 11% 20 % Micrometastasi 18% 8% ITC Negativo 71% 73% P<0.01

14 Macrometastasi OSNA Metodo Tradizionale Cavo ascellare positivo 42% 45% Micrometastasi OSNA Metodo Tradizionale Cavo ascellare positivo 22% 22%

15 GRAZIE PER L ATTENZIONE