COLORAZIONI ISTOCHIMICHE

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Filomena Borrelli
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1 COLORAZIONI ISTOCHIMICHE

2 ALDEIDI E CHETONI Viene utilizzato il reattivo di Schiff (leucofucsina o acido bis-naminosolfonico), che in presenza di aldeidi o chetoni, in ambiente acido e in presenza di SO2 in eccesso, dà luogo a un prodotto colorato (rosso magenta). Ambiente acido > produzione di aldeidi > legame con la leucofucsina Questa reazione viene sfruttata principalmente in 2 tipi di colorazioni: FEULGEN (DNA) e PAS (carboidrati)

3 ACIDI NUCLEICI REAZIONE FEULGEN Il DNA è in grado di legare il reattivo di Schiff formando un composto colorato dopo una leggera idrolisi acida. Questa idrolisi separa le basi azotate dallo zucchero (il cui gruppo aldeidico è ora libero di reagire con il reattivo di Schiff). Il risultato è la colorazione del DNA in rosso magenta. VERDE DI METILE Il verde di metile, come tutti i composti derivati dal trifenilmetano, si lega stabilmente al DNA.

4 FEULGEN REAZIONE DI FEULGEN:

5 VERDE DI METILE

6 CARBOIDRATI Per la dimostrazione dei glucidi si utilizzano la REAZIONE PAS (acido periodico-schiff) o l ALCIAN BLU. REAZIONE PAS Polisaccaridi (semplici e anche i mucopolisaccaridi), quando ossidati a mezzo dell'acido periodico (H5IO6), danno origine ad aldeidi. I gruppi aldeidici vengono quindi rivelati istologicamente a mezzo del reattivo di Schiff con una colorazione rosso magenta. ALCIAN BLU Specifico per i mucopolisaccaridi acidi. E una ftalocianina rameica idrosolubile che si lega ai polianioni dei mucopolisaccaridi acidi, dando un prodotto colorato in blu.

7 PAS INTESTINO TENUE

8 PAS CARTILAGINE

9 PAS INTESTINO TENUE

10 PAS RENE

11 ALCIAN BLU INTESTINO CRASSO

12 ALCIAN BLU POLMONE

13 LIPIDI - Coloranti liposolubili (lisocromi) - Fissazione blanda in formalina - Taglio direttamente al criostato I coloranti lisocromi più usati sono: Oil red O Sudan rossi (Sudan III e Sudan IV) Sudan nero B

14 OIL RED O T. ADIPOSO

15 OIL RED O

16 OIL RED O

17 SUDAN IV Sudan IV

18 SUDAN NERO Sudan nero B

19 COLORAZIONI ISTOCHIMICHE Tecniche speciali

20 MEMBRANA BASALE Gomori metenamina silver E il metodo di elezione per lo studio della membrana basale nella biopsia renale. Si basa sul principio che l acido periodico agendo su gruppi glicolici e glicoaminici presenti nei mucopolisaccaridi delle membrane basali li ossida a gruppi aldeidici. Il cloruro di argento è quindi ridotto da questi gruppi aldeidici e precipita come argento metallico. Pertanto si tratta di una impregnazione argentica.

21 MEMBRANA BASALE Gomori metenamina silver E il metodo di elezione per lo studio della membrana basale nella biopsia renale. Si basa sul principio che l acido periodico agendo su gruppi glicolici e glicoaminici presenti nei mucopolisaccaridi delle membrane basali li ossida a gruppi aldeidici. Il cloruro di argento è quindi ridotto da questi gruppi aldeidici e precipita come argento metallico. Pertanto si tratta di una impregnazione argentica.

22 GOMORI METENAMINA SILVER RENE

23 GOMORI METENAMINA SILVER RENE

24 PIGMENTI EMATOGENI - emoglobina - emosiderina - pigmenti biliari NON EMATOGENI - melanina - pigmenti lipidici (lipofuscina) - urati MINERALI Ferro, rame, calcio, amianto

25 MELANINA Fontana-Masson Metodo di elezione per questo pigmento. Si tratta di una impregnazione argentica. Reazione argentaffine: capacità di alcune componenti tessutali di agire quali sostanze riducenti sui sali di argento, facendolo precipitare come argento metallico.

26 FONTANA-MASSON

27 FONTANA-MASSON

28 MINERALI FERRO Metodo di PERLS (Blu di Prussia) Rivelazione del ferro che si localizza nelle cellule sotto forma di granuli di emosiderina. Reazione di Perls: l HCl libera gli ioni Fe associati alle proteine, che reagiscono con il ferrocianuro di potassio formando un precipitato blu detto ferrocianuro ferrico o Blu di Prussia.

29 REAZIONE DI PERLS FEGATO

30 REAZIONE DI PERLS MACROFAGO

31 REAZIONE DI PERLS MILZA

32 MINERALI RAME Rodanina È un metodo usato per determinare il rame nei tessuti. Il suo accumulo nel fegato e in altri distretti (cornea, SNC) è una caratteristica del morbo di Wilson, malattia ereditaria caratterizzata da un eccesso di rame provocato da una ridotta escrezione biliare del rame. La tecnica si basa sulla capacità della Rodanina di legarsi sia al rame libero che a quello associato a proteine.

33 RODANINA FEGATO

34 MINERALI RAME Acido rubeanico Altro metodo usato per determinare il rame nei tessuti. L acido rubeanico reagisce con il rame e forma dei precipitati nero-verdastri (Rubeanato di rame)

35 ACIDO RUBEANICO FEGATO

36 MINERALI CALCIO Alizarin Red S (Metodo di Dahl) Il Rosso di Alizarina (Alizarin Red S) è un colorante antrachinonico in grado di formare complessi con il calcio.

37 ALIZARIN RED S EMBRIONI DI TOPO

38 MINERALI CALCIO Von Kossa E una impregnazione argentica. Il nitrato d argento (AgNO3) viene ridotto ad argento metallico (per esposizione alla luce solare o ultravioletta), il quale viene fissato dai sali di calcio presenti nel campione.

39 VON KOSSA EMBRIONI DI TOPO

40 VON KOSSA RENE

41 MINERALI AMIANTO Fibre di amianto: composte da diversi silicati (crisotile, tremolite, crocidolite, actinolite) che contengono anche silicio, ferro, calcio e magnesio. L inalazione prolungata provoca l ASBESTOSI polmonare. Fibrosi alveolare progressiva, asbestosici, e tosse pleurica diffusa, (presenza complessi che provoca nell'espettorato ferruginosi) e di dispnea "corpi insufficienza cardiorespiratoria. I corpi asbestosici vengono rivelati con il Blu di Prussia (ferro)

42 BLU DI PRUSSIA POLMONE

43 TECNICHE IMMUNOISTOCHIMICHE Le tecniche immunoistochimiche sfruttano la capacità degli anticorpi di legarsi all antigene specifico. - anticorpo coniugato con l enzima perossidasi - incubazione con la sezione, dove si legherà all antigene - incubazione con un substrato dell enzima (diamminobenzidina) - la perossidasi trasforma la diamminobenzidina in un prodotto colorato nel punto esatto ove si era legato l anticorpo, rivelando così la localizzazione dell antigene. prodotto colorato METODO DIRETTO prodotto colorato P DAB P DAB METODO INDIRETTO

44 TECNICHE IMMUNOISTOCHIMICHE Localizzazione immunoistochimica di Cellule epiteliali e macrofagi bronchiali Localizzazione immunoistochimica di Cellule della lamina propria

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