CLASSIFICAZIONE DELLE COLORAZIONI:

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Bernarda Orsini
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1 CLASSIFICAZIONE DELLE COLORAZIONI: Le colorazioni, indipendentemente dal meccanismo d azione del colorante, possono essere divise in due gruppi: 1. colorazioni istomorfologiche (nucleo, citoplasma, tessuto nervoso,collagene, ecc...); 2. colorazioni istochimiche (per me>ere in evidenza le sostanze chimiche contenute nei tessu( e la loro posizione).

colorazioni istomorfologiche (nucleo, citoplasma, tessuto nervoso,collagene, ecc...); 2.

2 Coloran( basici legano sostanze acide de>e basofile Ematossilina, blu di me(le, di toluidina, (onina, verde me(le, azzurro B, fucsina Coloran( acidi Eosina, Arancio G, Verde luce legano sostanze basiche de>e acidofile Ematossilina eosina : Ematossilina colora in viole>o sostanze acide (acidi nucleici) Eosina colora in rosa sostanze basiche (proteine del citosol)

luce legano sostanze basiche de>e acidofile Ematossilina eosina : Ematossilina colora in

3 COLORAZIONE EMATOSSILINA/EOSINA (EE): L ematossilina è una sostanza vegetale isolata da un estra>o di legno azzurro (legno di campeggio, Haematoxylum campechianum ) un albero originario del centro America. Questa è di per sé incolore (o si presenta so>o forma di cristalli giallo- bruni) incapace di colorare. Il vero colorante non è l ematossilina, ma il suo prodo>o di ossidazione: l emateina (per questo all ematossilina vanno aggiunte sostanze ossidan( come il permanganato dipotassio, l idrato di potassio, iodato di sodio, ecc.). Ematossilina Emateina Ematossilina Emateina

Questa è di per sé incolore (o si presenta so>o forma di cristalli giallo- bruni) incapace di colorare.

5 Colorazione tricromica Azan- Mallory Vengono impiega( tre coloran( acidi per diversiﬁcare le stru>ure: q Blu di Anilina q Fucsina acida q Orange G

6 Azan Mallory Colorazione elekva per evidenziare le fibre collagene del connekvo. Si usano due coloran( in sequenza: Azocarminio Colora in rosso: - I Nuclei delle Cellule e gli Eritroci( Colora in rosso tenue: - Il Citoplasma Miscela di Mallory Miscela formata da: Blu di Anilina, Orange G e Acido Ossalico. Colora intensamente di blu: - Le Fibre Collagene Colora in azzurro: - Le Mucine Colora in arancio: - Le Cellule del Sangue - Le Fibre Muscolari

in rosso tenue: - Il Citoplasma Miscela di Mallory Miscela formata da: Blu di Anilina, Orange G e Acido Ossalico.

7 Azan- Mallory

9 Carboidra( - Reazione PAS (acido periodico di Schiff) (colora in rosso gli zuccheri) 1. tra>amento acido periodico ossidazione gruppi alcolici in gruppi aldeidici 2. tra>amento reakvo di Schiff (fucsina + acido solforico) incolore lega aldeidi colore

10 Acidi nucleici 1. Miscela: Verde me(le e Pironina colora DNA, croma(na RNA (nucleolo, zone basofile del citoplasma) 2. Reazione di Feulgen Colora in rosso/viola il DNA a. idrolisi con HCl scinde legame glucosidico (purina/ desossiribosio) liberando il gruppo aldeidico del desossiribosio b. tra>amento con reakvo di Schiff colore rosso

del citoplasma) 2. Reazione di Feulgen Colora in rosso/viola il DNA a.

11 v La proprietà istochimica delle fibre re(colari, de>a argirofilia o argentofilia, è rappresentata dalla capacità di legare sali d argento. v In seguito ad opportuno tra>amento riducente, danno origine ad argento metallico, di colore nero. v Le fibre re(colari tra>ate con metodiche di argentofilia (c.d. impregnazione argen(ca come il metodo di Gomori) si presentano come una delicata rete di fibrille nere.

v In seguito ad opportuno tra>amento riducente, danno origine ad argento metallico, di colore nero.

13 Si fa precedere l'impregnazione argen(ca da una ﬁssazione con osmio e bicromato di potassio, questo procedimento fa sì che il nitrato d argento precipi( su tu>a la cellula e su tuk i prolungamen(, evidenziandone la forma: tu>o è omogeneamente ed intensamente di colore nero.

argento precipi( su tu>a la cellula e su tuk i prolungamen(,

14 Colora quindi sia le stru>ure argiroﬁle che argentaﬃni. Colora solo alcuni neuroni, che appaiono quindi isola(. Sezioni di micron per poter osservare il percorso dei prolungamen(. Colora intensamente di nero: - Pirenoforo - Prolungamen(

Sezioni di 20-30 micron per poter osservare il percorso dei

15 Prevede la colorazione con nitrato d'argento, ma non il pretra>amento con osmio e bicromato di potassio, che si ha nel metodo di Golgi. Me>e in evidenza soltanto le stru>ure argirofile all'interno del neurone, le neurofibrille. Si o>engono informazioni sull interno della cellula, par(colarmente sulle neurofibrille. Si intravede il nucleo.

Me>e in evidenza soltanto le stru>ure argirofile all'interno del neurone, le

16 Colora giallino- marrone: - Il Neurone Colora marrone- nero - Le Neurofibrille

17 Striscio di sangue v Quando le cellule che si trovano disperse in un mezzo liquido, come le cellule del sangue, si esaminano agevolmente con la tecnica degli strisci. v Gli strisci di cellule in monostrato vengono osservati al microscopio dopo essiccamento, fissazione e colorazione

18 May- Grünwald- Giemsa Miscela: Blu di Me(lene (basico), Eosina (acido) E poi Giemsa (blu i nuclei e rosa il citoplasma) Colora rosa- arancio: - Gli Eritroci( Colora blu porpora: - I nuclei Colora marrone leggero: - Il Citoplasma dei Neutrofili Colora viole>o- rosa e lillà: - I Granuli dei Neutrofili Colora arancio- rosso brillante: - I Granuli degli Eosinofili Colora blu oltremare:- I Granuli dei Basof

marrone leggero: - Il Citoplasma dei Neutrofili Colora viole>o- rosa e lillà: - I Granuli dei

19 Colorazione (se le sezioni sono paraffinate) u immersione in xilolo per rimozione della paraffina u re- idratazione (passaggi in serie discendente di alcoli 100, 95, 80, 70, 50%) u passaggio in acqua dis(llata u colorazione con coloran( idrosolubili u scala di alcoli crescen( per disidratare di nuovo le sezioni u passaggio in xilolo u montaggio con DPX

50%) u passaggio in acqua dis(llata u colorazione con coloran( idrosolubili u scala di

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