ScanGel COOMBS + NEUTRAL Schede Schede
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- Sebastiano Rosa
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1 ScanGel COOMBS + NEUTRAL Schede Schede GEL FORMULATI CON UN ANTIGLOBULINA POLISPECIFICA (FRAZIONI POLICLONALE E MONOCLONALE MURINA) E GEL NEUTRO Ricerca di Ac irregolari IVD Tutti i prodotti fabbricati e commercializzati dalla società Bio-Rad sono sottoposti a un sistema di assicurazione qualità dal momento del ricevimento delle materie prime fino alla commercializzazione dei prodotti finiti. Ciascun lotto di prodotto finito è soggetto a un controllo di qualità e viene messo in commercio soltanto se risulta conforme ai criteri di accettazione. Tutta la documentazione relativa alla produzione e al controllo di ciascun lotto è conservata a cura del fabbricante. 29
2 I - UTILIZZO E PRINCIPIO DEL TEST Questa scheda è strettamente riservata all uso professionale e diagnostico in vitro. Destinato alla monitoraggio degli anticorpi antieritrocitari irregolari, il test combina i principi di agglutinazione e gel filtrazione. La reazione può essere effettuata e letta in seguito a centrifugazione di microprovette appositamente realizzate, riempite o di gel impregnato del reagente antiglobulinico per la tecnica antiglobulinica indiretta (Coombs Indirect), oppure di gel neutro per la tecnica enzimatica. La sospensione di globuli rossi del test trattati o no con la papaina a seconda che si tratti del metodo enzimatico o del test antiglobulinico indiretto (Coombs Indirect) e il siero o il plasma da testare vengono depositati nel pozzetto delle microprovette e centrifugati dopo un periodo di incubazione. I globuli rossi non agglutinati vengono raccolti sul fondo della microprovetta, mentre gli agglutinati vengono trattenuti nel gel in base alle loro dimensioni. L intensità della reazione è determinata dalla posizione degli agglutinati all interno del gel La capacità del gel di separare i globuli rossi dal siero o dal plasma elimina la fase di lavaggio obbligatoria nelle tecniche convenzionali. II - CARATTERISTICHE DEI REAGENTI Le prime tre microprovette della schede Scangel COOMBS + NEUTRAL contiene un gel impregnato di un reagente antiglobulina polispecifica (AHG). La frazione anti-igg viene preparata a partire da sieri di capre iperimmunizzate La frazione anti-complemento è preparata a partire da una miscela di sieri di capre iperimmunizzate con un anticorpo monoclonale murino di specificità anti-c3d prodotto a partire dal clone 053A714. La quarta, la quinta e la sesta microprovetta contengono gel neutro (Neutr.). I reagente contiene azide di sodio (< 0,1%) come conservante. Il codice prodotto e il numero di test card contenute in ogni scatola sono indicati sull etichetta della scatola stessa. III - CONSERVAZIONE - VALIDITÀ La data limite per l utilizzo e le condizioni di conservazione sono indicate sulla scatola. Conservare le schede a temperatura ambiente compresa tra +15 C e +25 C. Le schede devono essere conservate in posizione verticale al riparo da fonti di calore in un luogo a relativa costanza di temperatura e igrometria. 30
3 IV - AVVERTENZE E PRECAUZIONI L affidabilità dei risultati dipende dalla corretta esecuzione delle Buone Pratiche di Laboratorio di seguito riportate : Non utilizzare i reagenti oltre la data di scadenza indicata sull'etichetta. Non utilizzare schede con evidenti segni di essiccazione, bolle o con la linguetta sigillante danneggiata o parzialmente sollevata. I reattivi contenuti nelle microprovette sono differenti, cosi' è essenziale prendere precauzioni in modo da non provocare contaminazioni tra microprovette, e in particolare durante l'apertura della copertura d'alluminio e durante i passaggi di distribuzione. Utilizzare un puntale di pipetta diverso per ogni campione e per ciascun test per globuli rossi. Verificare la precisione e il buon funzionamento delle pipette e degli altri strumenti. Indossare guanti e occhiali di protezione durante la manipolazione dei reagenti e dei campioni. Non pipettare mai direttamente con la bocca. Evitare gli schizzi. In caso di schizzi, pulire con candeggina a 12 Cl diluita a 1/10 e asciugare con carta assorbente. Il materiale utilizzato per pulire dovrà essere gettato in un contenitore per residui contaminati. Consumabili e prodotti che sono stati in contatto con campioni o reagenti contenenti materiali di origine umana devono essere scartati solamente dopo essere stati decontaminati. Su richiesta sono disponibili schede di sicurezza. V - RACCOLTA E TRATTAMENTO DEI CAMPIONI Prelevare il sangue in condizioni asettiche in una provetta senza o con anticoagulante (EDTA). Eseguire il test il più presto possibile dopo il prelievo. I campioni che non potranno essere analizzati rapidamente dovranno essere conservati ad una temperatura compresa tra +2 C e +8 C e sottoposti a test nel giro di 48 ore. Accertarsi che non sussistano mai emolisi. Non riscaldare i campioni. VI - TECNICHE Materiale fornito Schede Scangel COOMBS + NEUTRAL Altro materiale necessario, ma non fornito ScanCell : reagente globuli rossi pronti all uso per il monitoraggio degli anticorpi antieritrocitari irregolari (test antiglobulinico indiretto) ScanCell 3 x 10 ml 31
4 ScanCell P : reagente globuli rossi pronti all uso per il monitoraggio degli anticorpi antieritrocitari irregolari (metodo enzimatico) ScanCell P 3 x 10 ml IH QC : Controllo sierologico del gruppo sanguigno IH QC 4 x 6 ml Incubatore : Scangel Incubator Centrifuga : Scangel Centrifuge Pipette automatiche o semi-automatiche Puntale per pipette Provette mono-uso Recipiente per rifiuti a rischio biologico Candeggina Guanti in lattice Carta assorbente Occhiali di protezione Controlli Controllo positivo (siero noto, contenente almeno un anticorpo) e negativo (siero noto, privo di anticorpi) per ciascuna delle due tecniche (tecnica antiglobulinica indiretta e tecnica enzimatica). IH QC : Controllo sierologico del gruppo sanguigno. Modo operativo Attenersi strettamente al modo operativo. Portare tutti i reagenti a temperatura ambiente prima dell'utilizzo. Separare tramite centrifugazione (2000 g x 2 minuti) il siero o il plasma dei globuli rossi del campione da testare. Qualora il sangue venga prelevato in una provetta asciutta, il siero deve essere centrifugato nuovamente a 1500 g per 10 minuti. Tecnica 1. Identificare la scheda con il nome o il numero del campione corrispondente. Staccare con cautela la linguetta in alluminio delle schede onde evitare contaminazioni tra i pozzetti. Risospendere le emazie prima dell'uso. 2. Distribuire 50 μl di ciascuna sospensione di ScanCell nel pozzetto delle prime tre microprovette della card (I nella 1 a microprovetta, II nella 2 a microprovetta e III nella 3 a microprovetta) e 50 μl ciascuna sospensione di ScanCell P nel pozzetto delle ultime tre microprovette (IP nella 4 a microprovetta, IIP nella 5 a microprovetta e IIIP nella 6 a ). 32
5 3. Aggiungere immediatamente 25 μl di plasma o siero da testare nel pozzetto di ciascuna microprovetta. In nessun caso l intervallo tra la distribuzione dei globuli rossi e quella del plasma o del siero deve superare i 10 minuti. 4. Incubare per 15 minuti a +37 C nello Scangel Incubator. 5. Centrifugare 10 minuti nella Scangel Centrifuge. 6. Leggere le reazioni. VII - RISULTATI E INTERPRETAZIONE La presenza di agglutinati (in superficie o dispersi nel gel) o di un emolisi in una microprovetta corrisponde a un risultato positivo. Un sedimento di globuli rossi depositatisi sul fondo della microprovetta e l assenza di emolisi corrisponde a un risultato negativo. I risultati sono validi soltanto se i controlli positivo e negativo danno i risultati attesi. a) Interpretazione delle microprovette AHG Un risultato negativo (assenza di agglutinazione e di emolisi) in ciascuna delle microprovette AHG utilizzate indica che il campione testati non contengono l anticorpo, corrispondente agli antigeni presenti sul test per globuli rossi, identificabile mediante la tecnica adottata. Un risultato positivo (agglutinazione e/o emolisi) in almeno una delle microprovette AHG utilizzate dimostra al contrario la presenza di uno o più anticorpi nel campione testati. Si dovrà pertanto effettuare l identificazione di detto(detti) anticorpo(i). È possibile individuare soltanto gli anticorpi corrispondenti agli antigeni presenti sui test per globuli rossi. b) Interpretazione delle microprovette Neutr. Un risultato negativo (assenza di agglutinazione e di emolisi) in ciascuna delle microprovette Neutr. utilizzate indica che il campione testati non contengono l anticorpo, corrispondente agli antigeni presenti sul test per globuli rossi, identificabile mediante la tecnica adottata. Un risultato positivo (agglutinazione e/o emolisi) in almeno una delle microprovette Neutr. utilizzate dimostra al contrario la presenza di uno o più anticorpi nel siero o nel plasma. Si dovrà pertanto effettuare l identificazione di detto(detti) anticorpo(i). È possibile individuare soltanto gli anticorpi corrispondenti agli antigeni presenti sui test per globuli rossi. 33
6 VIII - PERFORMANCE a) Performance specifiche del reagente antiglobulina polispecifica (AHG) La valutazione delle performance effettuata su 2516 campioni (1782 pazienti e 734 donatori) ha messo in evidenza una reazione equilibrata tra sensibilità e specificità). L'applicazione rende possibile la determinazione di anti-rh1(d) umane aventi concentrazione eguale a 20 ng/ml. La specificità su un campione di pazienti non selezionati è pari al 99,8%. Quanto alla riproducibilità dell applicazione, il test ha dato buoni risultati sia intra dosaggio sia inter dosaggio. b) Performance specifiche del reagente neutro (Neutr.) La valutazione delle performance effettuata su 2517 campioni (1783 pazienti e 734 donatori) ha messo in evidenza una reazione equilibrata tra sensibilità e specificità). La percentuale di pazienti non selezionati risultati positivi alla ricerca di anticorpi irregolari (monitoraggi positivi che hanno condotto all identificazione di uno o più allo e/o auto-anticorpi) è pari al 3,8%. La specificità su un campione di pazienti non selezionati è pari al 98,8%. Poiché alcuni antigeni come MNS1(M), MNS2(N), MNS3(S), FY1(Fya), FY2(Fyb) e XG1(Xga) vengono distrutti o alterati durante il trattamento dei globuli rossi con gli enzimi proteolitici, il metodo enzimatico non può essere impiegato come unico metodo per la ricerca di anticorpi anti-eritrocitari irregolari. Quanto alla riproducibilità dell applicazione, il test ha dato buoni risultati sia intra dosaggio sia inter dosaggio. LIMITI Risultati anomali possono essere causati da : contaminazione batterica o chimica del siero, del plasma, dei globuli rossi o del materiale. presenza di medicazioni o stato patologico del paziente che abbiano scatenato una reazione incrociata. rimessa in sospensione incompleta dei globuli rossi. emolisi dei campioni o dei globuli rossi del test. presenza di fibrina (immagine di un sedimento cellulare compatto sul fondo di una microprovetta accompagnato da una sottile striscia rosa nella parte alta del gel corrispondente ai globuli rossi trattenuti dai residui di fibrina). contaminazione tra microcolonne. uso di altre procedure rispetto a quella sopra descritta. 34 Su licenza DIAMED SA, 1785 Cressier-sur-Morat, Svizzera
7 IX - LITERATURE 1. Löw B, Messeter L. Antiglobulin test in low-ionic strength salt solution for rapid antibody screening and cross-matching. Vox Sang. 1974;26: Kankura T, Kurashina S, Nakao M. A gel filtration technique for separation of erythrocytes from human blood. J Lab Clin Med 1974;83: Rouger Ph, Salmon Ch.: La pratique de l'agglutination des érythrocytes et du test de Coombs. Masson Issitt PD. Applied blood group serology. 3rd ed. Miami: Montgomery Scientific Publications, ISBT/ICSH Working Party : International Reference Polyspecific AntiHuman Globulin Reagents. Engelfriet CP, Voak D. Vox Sang.1987;53: Engelfriet C.P., Overbeeke MAM, Voak D : the antiglobulin test (Coombs test) and the red cell; In Cash, Progress in Transfusion Medecine. Churchill Livingstone. 1987; vol 2: Voak D.: Coordinated report of studies on monoclonal antibodies to complement. Rev. Fr. Transf. Immunhematolol. 1988;XXXI, Voak D, Downie D.N. : Serological characterisation of monoclonal antibodies to complement components of C3 and C4. Rev. Fr. Transf. Immunohematol. 1988;XXXI, Lapierre Y, Rigal D, Adam J et al : The gel test : a new way to detect red cell antigen-antibody reactions. Transfusion 1990;30: Proceedings of the second international workshop and symposium on monoclonal antibodies against human red blood cells and related antigens. IgG/Complement. Lund. 1990; Bromilov IM, Adams KE, Hope J, Eggington JA and Duguid JKM. Evaluation of the ID-gel test for antibody screening and identification. Transfusion Medecine 1991;1: Salmon Ch, Cartron JP, Rouger Ph.: Les groupes sanguins chez l'homme. 2é ed. Masson Pottier C, Quillet P, Baufine-Ducroq H.: Gel-test : Interpretation and value of a new technique for the detection of irregular antibodies. Ann Bio Clin 1992;50: Deffune E, Le Pennec P.Y., Lascaux J.M., Rouger Ph.: Méthode d'étude des réactifs anti-complément : utilisation d'hématies sensibilisées congelées/décongelées. Rev. Fr. Transfu. Hémobiol. 1992;35: Burin des Rosiers N, Nasr O.: Recherche des anticorps irréguliers érythrocytaires par la méthode du gel-test. Analyse de échantillons. Rev. Fr. Transfus. Hemobiol., 1993;36: International Forum. What is the best technique for the detection of red cell alloantibodies. Vox Sang 1995;69:
8 Bio-Rad 3, bd Raymond Poincaré Marnes-la-Coquette - France Tél.: /2007 Fax.: Code:
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