Chromatic TM ESBL Chromatic TM ESBL+AmpC Chromogenic media for detection of ESBLs and AmpC in Enterobacteriaceae directly from clinical specimens.

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1 Chromatic TM ESBL Chromatic TM ESBL+AmpC Chromogenic media for detection of ESBLs and AmpC in Enterobacteriaceae directly from clinical specimens. DESCRIPTION Chromatic TM ESBL is a chromogenic medium used for detection of Extended-spectrum β-lactamase (ESBL)-producing Enterobacteriaceae. ESBLs are enzymes that hydrolyze most penicillins and cephalosporins, inhibited by β-lactamase inhibitors such as clavulanic acid, sulbactam and tazobactam. ENGLISH Chromatic TM ESBL+AmpC is a chromogenic medium used for detection of ESBL and AmpC producers. AmpC-type enzymes hydrolyze penicillins, cephalosporins and monobactam and are poorly inhibited by the classical ESBL inhibitors, especially clavulanic acid. ESBL-producing Enterobacteriaceae have become one of the most important causes of nosocomial community-acquired infections caused by Escherichia coli and Klebsiella pneumoniae, but also other Gram-negative bacteria. Patients infected by ESBL producers often received inadequate empirical therapy until the pathogen s resistance is recognized. Early detection is, therefore, essential in order to limit the spread of these pathogens. Organisms producing enough AmpC β-lactamase will typically give a positive ESBL screening test but fail the confirmatory test involving increased sensitivity with clavulanic acid. TYPICAL FORMULA (g/l) Peptone Mix 43.2 Chromogenic Mix 1.0 Agar 15.0 Selective Mix 0.5 Final ph 7.2 ± 0.2 at 25 C Liofilchem - Chromatic TM ESBL and Chromatic TM ESBL+AmpC - Rev.0 / METHOD PRINCIPLE Peptones supply amino acids, nitrogen, carbon, minerals, vitamins and other nutrients which support the growth of microorganisms. Chromogenic mix allows the identification of microorganisms on the basis of the colony color and morphology. Agar is the solidifying agent. The Selective mix in Chromatic ESBL inhibits the ESBL-non-producing organisms, including AmpC producers. The Selective mix in Chromatic ESBL+AmpC inhibits the ESBL-non-producing organisms, but allows the growth of AmpC producers. PREPARATION Dehydrated medium Supplements Suspend 29.6 g of the powder in 500 milliliters of distilled or deionized water. Mix well. Heat until completely dissolved. Sterilize in autoclave at 121 C for 15 minutes. Cool to C. Aseptically, add 5 ml previously reconstituted supplement, mix well and dispense in Petri dishes. Add 5 ml distilled or deionized water to the lyophilized supplement tube to be used. Mix well using a vortex mixer before adding to the medium being prepared. TEST PROCEDURE Inoculate the plates by streaking directly the specimen onto the agar surface. Incubate aerobically at 37 C for hours. INTERPRETING RESULTS After incubation observe the color of the colonies and interpret the results as indicated in the ID table. ID Table. Microorganism* Typical colony color E. coli Pink-reddish-mauve Klebsiella spp, Enterobacter spp, Serratia spp Proteus spp Green-blue Brown *On Chromatic TM ESBL medium only ESBL-producing organisms grow, while Chromatic TM ESBL+AmpC allows the growth of both ESBL and AmpC producers. See pictures in Appendix I. APPEARANCE Dehydrated medium: fine, dry, homogeneous, free of extraneous material, beige. Lyophilized supplements: whitish button, limpid solution once reconstituted. Prepared medium: slightly opalescent, amber. STORAGE The powder is very hygroscopic, store the powder at C, in a dry environment, in its original container tightly closed. Store prepared plates and the lyophilized supplements at 2-8 C away from light. Do not use the product beyond its expiry date on the label or if product shows any evidence of contamination or any sign of deterioration. Page 1 of 2

2 SHELF LIFE Dehydrated medium: 4 years. Lyophilized supplements: 4 years. Ready-to-use plates: 4 months. QUALITY CONTROL Plates are inoculated with the microbial strains indicated in the QC tables. Inoculum for productivity: CFU/ml. Inoculum for selectivity: CFU/ml. Incubation conditions: aerobically at 35±2 C for h. Chromatic TM ESBL, QC Table. Microorganism phenotype phenotype Growth Specification Escherichia coli DSM Positive Negative Good Reddish colonies Klebsiella pneumoniae ATCC Positive Negative Good Green-blue colonies Klebsiella pneumoniae ATCC BAA-1144 Negative Positive Inhibited --- Escherichia coli ATCC Negative Negative Inhibited --- Chromatic TM ESBL+AmpC, QC Table. Liofilchem - Chromatic TM ESBL and Chromatic TM ESBL+AmpC - Rev.0 / Microorganism phenotype phenotype Growth Specification Enterobacter cloacae ATCC BAA-1143 Negative Positive Good Green-blue colonies Klebsiella pneumoniae ATCC Positive Negative Good Green-blue colonies Klebsiella pneumoniae ATCC BAA-1144 Negative Positive Good Green-blue colonies Escherichia coli ATCC Negative Negative Inhibited --- WARNING AND PRECAUTIONS The product does not contain hazardous substances in concentrations exceeding the limits set by current legislation and therefore is not classified as dangerous. It is nevertheless recommended to consult the safety data sheet for its correct use. The product is intended for In vitro diagnostic use and must be used only by properly trained operators. DISPOSAL OF WASTE Disposal of waste must be carried out according to national and local regulations in force. BIBLIOGRAPHY 1. EUCAST guidelines for detection of resistance mechanisms and specific resistances of clinical and/or epidemiological importance. Version 1.0, Podschun R, Ullman U. Klebsiella spp as Nosocomial Pathogens: Epidemiology, Taxonomy, Typing Methods, and Pathogenicity Factors. Clinical Microbiology Reviews. 1998; 11 (4): Geiss H.K. Comparison of two test kits for rapid identification of Escherichia coli by a beta-glucuronidase assay. European Journal of Clinical Microbiology & Infections Diseases. 1990; 9 (2): PRESENTATION Contents Ref. Chromatic TM ESBL 90 mm ready-to-use plates 20 plates Chromatic TM ESBL+AmpC 90 mm ready-to-use plates 20 plates Chromatic TM ESBL Dehydrated medium 500 g of powder Chromatic TM ESBL Dehydrated medium 100 g of powder Chromatic TM ESBL Supplement Lyophilized supplement 10 tubes Chromatic TM ESBL+AmpC Supplement Lyophilized supplement 10 tubes TABLE OF SYMBOLS LOT Batch code IVD In vitro Diagnostic Medical Device Manufacturer Use by Fragile, handle with care Keep away from sunlight REF Catalogue number Temperature limitation Contains sufficient for <n> tests Caution, consult Instruction For Use Do not reuse LIOFILCHEM s.r.l. Tel Fax liofilchem@liofilchem.net Page 2 of 2

3 Chromatic ESBL Chromatic ESBL+AmpC Terreno cromogenico per la ricerca di ESBL ed AmpC in Enterobacteriaceae direttamente da campioni clinici. Istruzioni per l uso ITALIANO DESCRIZIONE Chromatic ESBL è un terreno cromogenico utilizzato per la ricerca di Enterobacteriaceae produttrici di β-lattamasi a spettro esteso. ESBL sono enzimi che idrolizzano la maggior parte delle penicilline e cefalosporine, inibiti da inibitori delle β-lattamasi come acido clavulanico, sulbactam e tazobactam. Chromatic ESBL+AmpC è un terreno cromogenico utilizzato per la ricerca di produttori di ESBL ed AmpC. AmpC sono enzimi che idrolizzano penicilline, cefalosporine e monobattami e sono inibiti debolmente dai classici inibitori degli ESBL, specialmente l acido clavulanico. Le Enterobacteriaceae produttrici di ESBL sono diventate tra i maggiori responsabili di infezioni nosocomiali principalmente ad opera di Escherichia coli e Klebsiella pneumoniae, ma anche altri batteri Gram-negativi. Pazienti infettati da produttori di ESBL spesso ricevono terapie empiriche inadeguate finché la resistenza del patogeno non viene riconosciuta. L'identificazione precoce è, quindi, essenziale al fine di limitare la diffusione di questi patogeni. Gli organismi che producono abbastanza β-lattamasi AmpC tipicamente risultano positivi ad uno screening per ESBL ma falliscono i test di conferma che prevedono un aumento di sensibilità con l acido clavulanico. FORMULA TIPICA (g/l) Miscela di Peptoni 43.2 Miscela Cromogenica 1.0 Agar 15.0 Miscela Selettiva 0.5 ph Finale 7.2 ± 0.2 a 25 C Liofilchem - Chromatic ESBL and Chromatic ESBL+AmpC - Rev.0 / PRINCIPIO DEL METODO I peptoni forniscono amino acidi, azoto, carbonio, minerali, vitamine ed altri nutrienti che supportano la crescita dei microrganismi. La miscela cromogenica permette l identificazione dei microrganismi sulla base del colore e della morfologia delle colonie. L agar è l agente solidificante. La Miscela selettiva in Chromatic ESBL inibisce gli organismi che non producono ESBL, inclusi i produttori di AmpC. La Miscela Selettiva in Chromatic ESBL+AmpC inibisce gli organismi che non producono ESBL, ma permette la crescita dei produttori di AmpC. PREPARAZIONE Terreno disidratato Supplementi Sospendere 29.6 g di polvere in 500 millilitri di acqua distillata o deionizzata sterile. Mescolare bene. Riscaldare fino a completa dissoluzione. Sterilizzare in autoclave a 121 C per 15 minuti. Raffreddare il terreno a C. In condizioni di asepsi, aggiungere 5 ml di supplemento precedentemente ricostituito, mescolare bene e dispensare in piastre Petri. Aggiungere 5 ml di acqua distillata o deionizzata nella provetta contenente il supplemento liofilizzato da utilizzare. Mescolare bene utilizzando un miscelatore vortex prima di aggiungere al terreno in preparazione. PROCEDURA DEL TEST Inoculare la piastra strisciando direttamente il campione clinico sulla superficie dell agar. Incubare in atmosfera aerobica a 37 C per ore. INTERPRETAZIONE DEI RISULTATI Dopo l incubazione osservare il colore delle colonie ed interpretare i risultati come indicato nella tabella ID. Tabella ID. Microrganismo* Colore tipico delle colonie E. coli Rosa-rossastro-malva Klebsiella spp, Enterobacter spp, Serratia spp Proteus spp Verde-blu Marrone *Sul terreno Chromatic ESBL crescono solo organismi produttori di ESBL, mentre Chromatic ESBL+AmpC permette la crescita di produttori sia di ESBL che AmpC. Consultare le figure nell Appendice I. ASPETTO Terreno disidratato: fine, asciutto, omogeneo, privo di materiale estraneo, beige. Supplemento liofilizzato: bottone biancastro, soluzione limpida una volta ricostituita. Terreno preparato: ambra, leggermente opalescente. Pagina 1di 2

4 CONSERVAZIONE La polvere è fortemente igroscopica, conservare a C, in ambiente asciutto, nel suo contenitore originale chiuso ermeticamente. Conservare le piastre pronte ed i supplementi liofilizzati a 2-8 C al riparo dalla luce. Non usare il prodotto dopo la sua data di scadenza indicata sull etichetta o se il prodotto mostra segni di contaminazione o deterioramento. DURATA Terreno disidratato: 4 anni. Supplementi liofilizzati: 4 anni. Piastre pronte all uso: 4 mesi. CONTROLLO DI QUALITÀ Le piastre vengono inoculate con i ceppi microbici indicati nelle tabelle CQ. Inoculo per produttività: UFC/ml. Inoculo per selettività: UFC/ml. Condizioni di incubazione: ambiente aerobico a 35±2 C per ore. Chromatic TM ESBL, Tabella CQ. Microrganismo Fenotipo Fenotipo Crescita Specifiche Escherichia coli DSM Positivo Negativo Buona Colonie rossastre Klebsiella pneumoniae ATCC Positivo Negativo Buona Colonie verdi-blu Klebsiella pneumoniae ATCC BAA-1144 Negativo Positivo Inibita --- Escherichia coli ATCC Negativo Negativo Inibita --- Chromatic TM ESBL+AmpC, QC Tabella CQ. Liofilchem - Chromatic ESBL and Chromatic ESBL+AmpC - Rev.0 / Microrganismo Fenotipo Fenotipo Crescita Specifiche Enterobacter cloacae ATCC BAA-1143 Negativo Positivo Buona Colonie verdi-blu Klebsiella pneumoniae ATCC Positivo Negativo Buona Colonie verdi-blu Klebsiella pneumoniae ATCC BAA-1144 Negativo Positivo Buona Colonie verdi-blu Escherichia coli ATCC Negativo Negativo Inibita --- AVVERTENZE E PRECAUZIONI Il prodotto non contiene sostanza nocive in concentrazioni superiori ai limiti fissati dall attuale legislazione e perciò non è classificato come pericoloso. Ciononostante si raccomanda di consultare la scheda di sicurezza per il suo corretto uso. Il prodotto è da intendersi per uso diagnostico in vitro e deve essere utilizzato esclusivamente da operatori adeguatamente addestrati. SMALTIMENTO DEI RIFIUTI Lo smaltimento dei rifiuti deve essere effettuato in conformità alle normative nazionali e locali in vigore. Istruzioni per l uso BIBLIOGRAFIA 1. EUCAST guidelines for detection of resistance mechanisms and specific resistances of clinical and/or epidemiological importance. Version 1.0, Podschun R, Ullman U. Klebsiella spp as Nosocomial Pathogens: Epidemiology, Taxonomy, Typing Methods, and Pathogenicity Factors. Clinical Microbiology Reviews. 1998; 11 (4): Geiss H.K. Comparison of two test kits for rapid identification of Escherichia coli by a beta-glucuronidase assay. European Journal of Clinical Microbiology & Infections Diseases. 1990; 9 (2): PRESENTAZIONE Contenuto Ref. Chromatic TM ESBL Piastre da 90 mm pronte all uso 20 piastre Chromatic TM ESBL+AmpC Piastre da 90 mm pronte all uso 20 piastre Chromatic TM ESBL Terreno disidratato 500 g di polvere Chromatic TM ESBL Terreno disidratato 100 g di polvere Chromatic TM ESBL Supplement Supplemento liofilizzato 10 provette Chromatic TM ESBL+AmpC Supplement Supplemento liofilizzato 10 provette TABELLA DEI SIMBOLI LOT Codice del lotto IVD Dispositivo Medico Diagnostico in vitro Fabbricante Utilizzare entro Fragile, maneggiare con cura REF Numero di catalogo Limiti di temperatura Contenuto sufficiente per <n> saggi Attenzione, Consultare le istruzioni per l uso Non riutilizzare LIOFILCHEM s.r.l. Tel Fax liofilchem@liofilchem.net Pagina 2di 2

5 Liofilchem - ChromaticTM ESBL and ChromaticTM ESBL+AmpC - Rev.0 / ChromaticTM ESBL ChromaticTM ESBL+AmpC Chromogenic media for detection of ESBL and AmpC in Enterobacteriaceae directly from clinical specimens. Colony appearance on ChromaticTM ESBL and ChromaticTM ESBL+AmpC plates. E. coli DSM (ESBL+) K. pneumoniae ATCC (ESBL+) LIOFILCHEM s.r.l. Tel Fax Page 1 of 1 liofilchem@liofilchem.net ENGLISH Appendix I