Helicobacter pylori. Programma VEQ: perché, come e se...

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1 Helicobacter pylori Programma VEQ: perché, come e se...

2 H.pylori: storia Anni 30: batteri associati con danno alla mucosa gastrica 1983: Marshall e Warren stabiliscono link fra H.pylori e patologia gastrointestinale nell uomo 2005: NOBEL PER LA MEDICINA A MARSHALL E WARREN

3 H.pylori:epidemiologia Paesi in via di sviluppo: ~ 80% popolazione infettata Occidente: ~ 50% popolazione infetta Malattia solo nel %

4 H.pylori:patogenesi Settimane Gastrite Acuta Gastrite Cronica Mesi Anni PU GCA Atrofia Metaplasia Displasia MALT Decenni CG

5 H.pylori:epidemiologia Fattori di rischio principali età difficoltà socio economiche comunità chiuse

6 H.pylori:epidemiologia Modalità di trasmissione SCONOSCIUTA ORO-FECALE ORO-ORALE GASTRO-ORALE Non conosciuti serbatoi naturali o animali reservoir

7 H.pylori: storia Inizialmente assegnato al genere Campylobacter (C.pyloridis - C.pylori) 1989: definitivamente denominato Helicobacter pylori Attualmente molte specie nel genere Helicobacter

8 H.pylori:morfologia Batterio Gram negativo Spiralizzato (3µm x µm ) 4-6 flagelli ad un polo cellulare Forme coccoidi (reversibili?)

9 H.pylori:morfologia

10 H.pylori:patogenesi Vive in associazione con ospite e infetta mucosa Deve essere capace di sfuggire agli effetti della risposta immune Differenti strategie (combinate?): intracellulare? Immunomodulazione variazione antigenica (localised sex)

11 H.pylori:patogenesi Caratteri istopatologici della patologia indotta da H.pylori infiltrazione flogistica massiva della lamina propria della mucosa gastrica erosione dell epitelio gastrico Due tipi: I e II Patologia più severa (topo) associata con Tipo I Cag patogenicity island (PAI): 40 kbp alien DNA

12 H.pylori:patogenesi H.pylori tipo I: PAI cag contiene caga ag superficie caga ~120 kda vaca e tossina VacA (citotossica - vacuolizzante ) patologia più severa: PU, GCA, MALT, GC H.pylori tipo II: non esprimono caga in genere non producono VacA (ma hanno vaca) patologia più lieve: moderata gastrite (topo)

13 H.pylori:patogenesi

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17 H.pylori:patogenesi

18 H.pylori:diagnosi HpSA: ag fecale

19 H.pylori:diagnosi ISTOLOGIA SU BIOPSIA GASTRICA Vantaggi: diagnosi suggestiva per presenza ed eradicazione Svantaggi: INVASIVA - lunga esecuzione - soggettiva

20 H.pylori:diagnosi COLTURA SU BIOPSIA GASTRICA Vantaggi: diagnosi DEFINITIVA per presenza ed eradicazione - antibiogramma sull isolato Svantaggi: INVASIVA - lunga esecuzione - lunga incubazione microrganismo fastidioso

21 H.pylori:diagnosi ph UREASE TEST SU BIOPSIA GASTRICA Vantaggi: RAPIDITA - basso costo -semplicità Svantaggi: INVASIVA - specificità? -sensibilità?

22 H.pylori:diagnosi Diverse metodiche con differenti vantaggi e svantaggi: EIA IgG - IgA Immunoblotting IgG - IgA EIA o WB con antigeni H.pylori specifici nativi o ricombinanti NON INVASIVA

23 H.pylori:diagnosi Vantaggi e svantaggi: automatizzabile basso costo ripetibile specifictà? (>50 % positivi in blood donors) insensibile alla terapia (paired samples > 6 mesi) stato immune (IgA?)

24 H.pylori:diagnosi Vantaggi e svantaggi: specificità significato dei singoli antigeni ripetibile costo insensibile alla terapia stato immune (IgA?) esecuzione manuale (tempo - complessità) interpretazione (bande H.pylori specifiche)

25 H.pylori:diagnosi Vantaggi e svantaggi: specificità sensibiltà Tipo I ripetibile terapia (paired sera) automatizzabile costo Tipo II?

26 H.pylori:diagnosi Vantaggi e svantaggi: specificità sensibiltà Tipo I ripetibile rapidità costo Tipo II? terapia

27 H.pylori:diagnosi

28 H.pylori:diagnosi HpSA: identificazione di antigeni H.pylori nelle feci Vantaggi: facilità del prelievo (non invasivo) semplicità esecuzione (EIA e IC) rapidità esecuzione sensibilità alla terapia Svantaggi: costo elevato necessità di ripetere prelievo (serie) specificità sensibilità (IC)

29 H.pylori:diagnosi

30 H.pylori:terapia

31 Caratteristiche del materiale fornito Tecniche impiegate per la valutazione dei campioni VEQ: H.pylori (ag.. Fecale) EIA, immunocromatografia

32 Caratteristiche del materiale fornito matrici fecali (pool) da pazienti clinicamente sani (soggetti con breath test e EGD negativi) addizionate (peso/peso) con sospensioni batteriche di diversi ceppi di H.pylori cresciuti in vitro in terreno liquido e purificati (ceppi selvaggi da paziente e di collezione ATCC e CCUG): positivi. non addizionate: negativi matrici fecali (singolo paziente) clinicamente infetti da Hp e con conferma breath test e EGD solubilizzazione parziale con NaCl 0.9% e suddivisione in provetta del quantitativo richiesto Conservazione a -80 C fino alla spedizione (dry ice) Nuova verifica del materiale (su controcampione) a spedizione avvenuta

33 Andamento temporale dei profili analitici * +! "#$ "% % &" )&"# #" '&%"# ( #%##

34 Profili per anno di esercizio * + && %#,! "#$ "% % &"#" ' &%"# #%##

35 Metodiche usate per anno di esercizio * + && %#, "#&" ( &- '. - - %"- %"- '( - ( &

36 Risultati Campioni inviati: 22 Hp positivi 12 Hp negativi 10 Risultati concordanti EIA: 92% Risultati concordanti IC: 80%