Saggio per il rilevamento delle anfetamine DRI

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1 Saggio per il rilevamento delle anfetamine Per uso diagnostico in vitro (3 x 18 ml) 0017 (100 ml Kit) 0018 (500 ml Kit) Uso previsto Il saggio per il rilevamento delle anfetamine è indicato per la determinazione qualitativa o semi-quantitativa dell'anfetamina e della metanfetamina nell'urina umana. Il saggio ha livelli di cutoff di 500 e e prevede una procedura di screening semplice e veloce per il rilevamento dell'anfetamina e della metafetamina nell'urina con analizzatori clinici automatizzati. I saggio è calibrato con metanfetamina. Il saggio garantisce unicamente un risultato analitico preliminare. Utilizzare un metodo chimico alternativo più specifico a conferma del risultato analitico. La gas cromatografia o la spettrometria di massa () costituiscono il metodo di conferma d'elezione. 1,2 Avvalersi di considerazioni cliniche e del giudizio professionale per interpretare i risultati di qualsiasi test sull'uso o l'abuso di droghe soprattutto quando si utilizzano risultati positivi preliminari. Riepilogo e presentazione del test La anfetamine sono derivati sintetici dell'efedrina. Le anfetamine più comuni comprendono la d-anfetamina, la d-metanfetamina, e la d,l-anfetamina. Agiscono come stimolanti del sistema nervoso centrale. L'anfetamina è l'ammina più simpatomimetica. 3,4 Se ingerita, viene rapidamente disattivata a livello epatico o escreta inalterata nell'urina. Altri derivati dell'efedrina, quale la metanfetamina possono essere metabolizzati ed escreti nell'urina come anfetamina. 5 Il test di rilevamento delle anfetamine è un saggio immunoenzimatico in fase omogenea liquido e pronto per l'uso. 6 Il saggio utilizza specifici anticorpi in grado di rilevare l'anfetamina e/o la metanfetamina contenute nell'urina con minima cross-reattività a numerosi composti da banco non strutturalmente correlati. Il saggio si basa sulla concorrenza tra la sostanza psicotropa (droga) marcata con un enzima glucosio-6-fosfato deidrogenasi (G6PD) e la droga contenuta nel campione di urina per un quantitativo determinato di siti di legame di uno specifico anticorpo. Se il campione non contiene droga libera, l'anticorpo specifico si lega alla droga marcata con la G6PDH determinando una riduzione dell'attività enzimatica. In presenza di droga libera, questa occupa i siti di legame dell'anticorpo, consentendo alla G6PDH marcata per la droga di interagire con il substrato, determinando un'attività enzimatica. Questo fenomeno crea una relazione diretta tra la concentrazione della droga nell'urina e l'attività enzimatica. L'attività enzimatica viene determinata mediante spettrofotometria a 340 nm misurando la sua abilità di convertire il NAD (nicotinammide adenina dinucleotide) in NADH. Precauzioni e avvertenze PERICOLO: 1. Questo test è unicamente per uso diagnostico in vitro. I reagenti sono dannosi se ingeriti. 2. I reagenti contenuti nei componenti del saggio contengono 0.09 % azoturo di sodio, che può reagire con il piombo o il rame delle condutture e formare azoturi metallici potenzialmente esplosivi. Nello smaltire i reagenti aver cura di sciacquare sempre con acqua abbondante onde prevenirne l accumulo. 3. Il dosaggio per anfetamine (100 ml) contiene 0,5% di anticorpo specifico anti-droga e 0,2% di albumina sierica bovina (BSA). 4. Non utilizzare i reagenti oltre la data di scadenza. H317 - Può provocare una reazione allergica cutanea. H334 - Può provocare sintomi allergici o asmatici o difficoltà respiratorie se inalato. Evitare di respirare la polvere o i vapori. Gli indumenti da lavoro contaminati non devono essere portati fuori dal luogo di lavoro. Indossare guanti protettivi/proteggere gli occhi/il viso. In caso di ventilazione insufficiente utilizzare un apparecchio respiratorio. In caso di contatto con la pelle: lavare abbondantemente con acqua e sapone. IN CASO DI INALAZIONE: se la respirazione è difficile, trasportare l infortunato all aria aperta e mantenerlo a riposo in posizione che favorisca la respirazione. In caso di irritazione o eruzione della pelle: consultare un medico. In caso di sintomi respiratori: contattare un CENTRO ANTIVELENI o un medico. Lavare gli indumenti contaminati prima di indossarli nuovamente. Smaltire il contenuto/contenitore in conformità alle normative locali/regionali/nazionali/internazionali. Reagenti Reagente anticorpo/substrato: contiene anticorpi monoclonali anti-anfetamine, glucosio-6- fosfato (G6P), e il nicotinammide adenina dinucleotide (NAD) in tampone Tris con azoturo di sodio come conservante. Reagente enzima-coniugato: contiene anfetamine marcate con glucosio-6-fosfato deidrogenasi (G6PD) in tampone Tris con azoturo di sodio come conservante. Preparazione e conservazione dei reagenti I reagenti sono pronti per l'uso. Non richiedono alcuna preparazione. Tutti i componenti del saggio, conservati alla temperatura di 2 8 C sono stabili fino alla data di scadenza indicata sull'etichetta. Materiali aggiuntivi occorrenti (venduti separatamente): Descrizione del kit 1664 Calibratore, 10 ml 1388 Calibratore, 25 ml 1588 Calibratore multidroga 1, 10 ml 1589 Calibratore multidroga 1, 25 ml 1591 Calibratore multidroga 2, 10 ml 1592 Calibratore multidroga 2, 25 ml 1594 Calibratore multidroga 3, 10 ml 1595 Calibratore multidroga 3, 25 ml 1597 Calibratore multidroga 4, 10 ml 1598 Calibratore multidroga 4, 25 ml DOAT-2 MAS DOA Total 2, 6 x 18 ml DOAT-3 MAS DOA Total 3, 6 x 18 ml DOAT-4 MAS DOA Total 4, 6 x 18 ml DOAT-5 MAS DOA Total 5, 6 x 18 ml Raccolta e manipolazione del campione Prelevare i campioni di urina in contenitori di plastica o vetro. Si consiglia di saggiare campioni freschi di urina. Prestare attenzione a salvaguardare l integrità chimica del campione di urina dal momento del prelievo fino all esecuzione dell analisi. I campioni mantenuti a temperatura ambiente che non vengono inizialmente analizzati entro 7 giorni 7 dall arrivo in laboratorio devono essere riposti in un unità di refrigerazione sicura a una temperatura compresa tra 2 e 8 C per diverse settimane. 8 La conservazione dei campioni di urina per periodi più lunghi prima dell analisi o quella dopo l analisi deve essere effettuata a una temperatura di -20 C. 9 Gli studi hanno dimostrato che gli analiti dell anfetamina nell urina sono stabili a -20 C a tempo indefinito. 8 I laboratori che seguono le linee guida obbligatorie SAMHSA devono fare riferimento ai requisiti SAMHSA Short-Term Refrigerated Storage (Conservazione refrigerata a breve termine) e Long-Term Storage (Conservazione a lungo termine). 10 Per proteggere l integrità del campione, non indurre la formazione di schiuma ed evitare congelamenti e scongelamenti ripetuti. Cercare di ottenere campioni pipettati senza detriti di grandi dimensioni. Si raccomanda di centrifugare i campioni notevolmente torbidi prima dell analisi. I campioni congelati devono essere scongelati e miscelati prima dell analisi. L adulterazione del campione di urina può portare a risultati errati. Se si sospetta un adulterazione del campione, prelevarne un altro e inoltrare entrambi i campioni al laboratorio per l analisi. Maneggiare tutti i campioni di urina come materiale potenzialmente infettivo. Procedimento Per l'esecuzione del saggio si possono usare analizzatori in grado di mantenere una temperatura costante, di pipettare i campioni, miscelare i reagenti e misurare i tassi enzimatici a 340 nm e i tempi di reazione con accuratezza. Prima di eseguire il saggio, consultare la documentazione protocollare dell'analizzatore che contiene parametri e/o ulteriori istruzioni per l'uso. Controllo della qualità e calibrazione La buona pratica di laboratorio raccomanda di utilizzare campioni di controllo per assicurare la corretta esecuzione del saggio. Utilizzare controlli prossimi al calibratore di cutoff per convalidare la calibrazione. I risultati del controllo devono ricadere entro intervalli prestabiliti, determinati dalle procedure e dalle linee direttive del laboratorio. Se ricadono esternamente agli intervalli predefiniti, il saggio deve essere considerato non valido. Tutti i requisiti di controllo della qualità devono essere eseguiti in osservanza dei requisiti locali, regionali e statali o dei requisiti di accreditamento vigenti. Ogni laboratorio deve stabilire una propria frequenza di calibrazione e di controllo. Analisi qualitativa Per l'analisi qualitativa dei campioni, utilizzare il calibratore multidroga per urina 1 o 2. Il calibratore 1 contiene 500 di d-metanfetamina, che è utilizzata quale riferimento di cutoff per distinguere i campioni "positivi" da quelli "negativi" con cutoff di 500. Il calibratore 2 contiene di d-metanfetamina, valore utilizzato come riferimento di cutoff per distinguere i campioni "positivi" da quelli "negativi" con cutoff di Analisi semi-quantitativa Per l'analisi semi-quantitativa, utilizzare tutti i calibratori. Risultati e valori attesi Risultati qualitativi Un campione in cui si rileva una variazione del valore di assorbanza ( A) uguale o superiore al valore ottenuto con il calibratore di cutoff è considerato positivo. Un campione che rilevi una variazione del valore di assorbanza ( A) inferiore al valore ottenuto con il calibratore di cutoff è considerato.

2 Risultati semi-quantitativi Una stima approssimativa della concentrazione della sostanza psicotropa nei campioni può essere ottenuta eseguendo una curva standard con tutti i calibratori e quantificando i campioni esterni alla curva standard. I risultati dei campioni eccedenti il calibratore alto devono essere diluiti con urina negativa e ritestati. La semi quantificazione dei risultati positivi consente al laboratorio di determinare una diluizione appropriata del campione a sostegno di un metodo di conferma quale una (gas cromatografia/spettrometria di massa). Consente inoltre al laboratorio di istituire procedure di controllo della qualità e di valutare la performance del controllo. Limitazioni 1. Un risultato positivo di questo saggio è unicamente indicativo della presenza di anfetamina o metamfetamina e non è necessariamente correlato con l'entità degli effetti fisiologici e psicologici. 2. Un risultato positivo del saggio deve essere confermato da un altro metodo non immunologico quale una gascromatografia (GC), una cromatografia su strato sottile (TLC, thin-layer chromatography) o una gascromatografia/spettrometria di massa (). 3. Il test è indicato per l'uso unicamente con urina umana. 4. Vi è inoltre la possibilità che altre sostanze e/o fattori (ad es. tecnici o procedurali) non elencati nella tabella delle specificità possano interferire con il test causando dei falsi risultati. Caratteristiche prestazionali specifiche I risultati prestazionali tipici ottenuti sull'analizzatore Beckman Coulter AU680 sono elencati in basso. 11 Studi sui recuperi e linearità della diluizione Un campione "alto" di urina di un paziente contenente circa di metanfetamina è stato diluito serialmente con urina priva di analita per incrementi del 10 % e sottoposto a test in 5 repliche in modalità semi-quantitativa. Tutti i campioni sono stati recuperati con un errore compreso entro ± 10 % del valore atteso e il valore R era di 0,9998. Precisione Dei campioni addizionati con quantità variabili di d-anfetamina e di d-metanfetamina sono stati saggiati in modalità qualitativa e semi-quantitativa utilizzando un protocollo di precisione CLSI (EP05-A2). 12 I campioni sono stati saggiati in repliche di 2, due volte al dì per 20 giorni, in totale N = 80. I risultati sono riportati nelle tabelle seguenti. Analisi qualitativa Concentrazione del campione, Numero di determinazioni d-anfetamina Cutoff 500 Cutoff / 0 80 / / 0 80 / / 0 80 / / / / / / 80 0 / / 80 0 / 80 d-metanfetamina / 0 80 / / 0 80 / / 0 80 / / / / / / 80 0 / / 80 0 / 80 Analisi semi-quantitativa: Conc. del campione, Media dei risultati, Precisione intrasequenza SD % CV SD, d-anfetamina Precisione totale Cutoff 500 % CV Cutoff ,9 9,0 6,2 10,1 6,9 80 / 0 80 / ,8 10,2 2,7 10,9 2,9 80 / 0 80 / ,9 11,2 1,6 13,5 2,0 0 / / ,4 14,1 1,8 17,6 2,3 0 / / ,9 23,6 1,8 28,4 2,2 0 / 80 0 / ,6 23,0 1,6 32,0 2,2 0 / 80 0 / 80 2 Conc. del campione, Media dei risultati, Precisione intrasequenza SD % CV SD, d-metanfetamina Precisione totale Cutoff 500 % CV Cutoff ,4 7,4 4,4 9,3 5,5 80 / 0 80 / ,8 8,0 2,0 11,1 2,8 80 / 0 80 / ,1 9,6 1,5 12,1 1,9 0 / / ,4 9,7 1,3 11,8 1,5 0 / / ,1 15,5 1,2 18,9 1,5 0 / 80 0 / ,1 21,4 1,4 27,3 1,8 0 / 80 0 / 80 Caratterizzazione di cutoff Campioni prossimi ai valori di cutoff sono stati preparati addizionando separatamente d-anfetamina e d-metamfetamina in campioni di urina delle 24 ore negativi. I campioni sono stati saggiati in repliche di 20 in modalità qualitativa e semi-quantitativa. In modalità qualitativa, tutti i campioni sono stati rilevati accuratamente con i campioni negativi recuperanti meno dei calibratori di cutoff e i campioni positivi recuperanti più dei calibratori di cutoff. In modalità semi-quantitativa, la percentuale di recupero dei campioni era compresa entro ± 12 % di errore rispetto ai relativi valori nominali. La precisione dei 20 replicati era inferiore ad un CV dell'1 % per la modalità qualitativa e inferiore ad un CV del 4 % per la modalità semi-quantitativa. Accuratezza 160 campioni clinici di urina sono stati sottoposti a test con il saggio per il rilevamento delle anfetamine su Beckman Coulter AU680 e con gas cromatografia/spettrometria di massa (). Sono stati registrati alcuni risultati discordi quando il saggio è stato utilizzato per rilevare l'anfetamina e la metanfetamina quali singoli analiti. Il saggio è in grado di rilevare la presenza degli analiti anfetamina e metanfetamina con cross-reattività del 100 % per entrambe le droghe. Pertanto i campioni saggiati per un analita possono dare luogo a risultati falsi positivi per la presenza dell'altro analita. Analisi qualitativa: la concordanza complessiva tra il saggio per il rilevamento delle anfetamine e la gas cromatografia/spettrometria di massa () per l'anfetamina era del 58,0 % per il cutoff 500 e del 59,4 % per il cutoff Cutoff 500 cutoff positivo (tra il cutoff e Alto positivo (superiore a Positivo ,0 % Negativo ,7 % Cutoff Positivo ,5 % Negativo ,9 % 500 Qualitativo Analisi semi-quantitativa: la concordanza complessiva tra il saggio per il rilevamento delle anfetamine e la gas cromatografia/spettrometria di massa () per l'anfetamina era del 58,0 % per il cutoff 500 e del 58,7 % per il cutoff Cutoff 500 cutoff positivo (tra il cutoff e Alto positivo (superiore a Positivo ,0 % Negativo ,7 % Cutoff Positivo ,5 % Negativo ,9 %

3 500 Semi-quantitativo Riepilogo dei risultati discordi per le anfetamine: I campioni per lo studio dell'accuratezza sono stati suddivisi per categorie in base unicamente alla concentrazione di d-anfetamina. La tabella seguente identifica tali campioni con una concentrazione di d-anfetamina inferiore al cutoff, in cui il risultato osservato del saggio per il rilevamento delle anfetamine era positivo. () Risultato () () 500 Positivo Positivo Positivo Positivo Positivo Positivo Positivo Positivo Positivo Positivo Positivo a Positivo Positivo Positivo Positivo Positivo Positivo Positivo Positivo Positivo Positivo Positivo Positivo Positivo Positivo Positivo Positivo Positivo Positivo Positivo Positivo Positivo Positivo Positivo Positivo Positivo Positivo Positivo Positivo Positivo Positivo Positivo Positivo Positivo Tabella (segue) () Risultato () () 500 Positivo Positivo Positivo Positivo Positivo Positivo Positivo Positivo Positivo Positivo Positivo Positivo Positivo Positivo Positivo Positivo Positivo Positivo Positivo Positivo Positivo Positivo Positivo Positivo Positivo Positivo Positivo Positivo Positivo Positivo Positivo Positivo Positivo Positivo Positivo Positivo Positivo Positivo Positivo Positivo Positivo Positivo Positivo Positivo Positivo Positivo Positivo Positivo Positivo Positivo Positivo Positivo Positivo

4 Tabella (segue) () Risultato () () Positivo Positivo Positivo Positivo Positivo Positivo Positivo Positivo Positivo Positivo Positivo Positivo Positivo Positivo Positivo b Positivo Positivo Negativo Analisi qualitativa: la concordanza complessiva tra il saggio per il rilevamento delle anfetamine e la gas cromatografia/spettrometria di massa () per la metanfetamina era dell'87,4 % per il cutoff 500 e dell'87,4 % per il cutoff Cutoff 500 Prossimo al cutoff positivo con (tra il cutoff e Alto positivo con GC/ MS (superiore a con Positivo ,0 % Negativo ,0 % Cutoff Positivo ,0 % Negativo ,9 % Cutoff Qualitativo Prossimo al cutoff positivo con (tra il cutoff e Alto positivo (superiore a con Positivo ,0 % Negativo ,0 % Cutoff Positivo ,0 % Negativo ,1 % 500 Semi-quantitativo Riepilogo dei risultati discordi per la metanfetamina I campioni per lo studio dell'accuratezza sono stati suddivisi in categorie in base unicamente alla concentrazione di d-metanfetamina. La tabella seguente identifica tali campioni con una concentrazione di d-metanfetamina inferiore al cutoff, in cui il risultato osservato del saggio per il rilevamento delle anfetamine era positivo. () Risultato () () 500 Positivo Positivo Positivo Positivo Positivo Positivo Positivo Positivo Positivo Positivo Positivo Positivo Positivo Positivo Positivo Positivo Positivo Positivo Positivo Positivo Positivo Positivo Positivo Positivo Positivo Positivo Positivo Positivo Positivo a Il campione conteneva anche MDA ~288 e MDMA ~ b Il campione conteneva anche PPA ~1.000 e pseudoefedrina 40 µg/ml. Specificità La specificità del saggio è stata valutata saggiando numerosi campioni strutturalmente correlati e non correlati per la cross-reattività. Il potenziale composto cross-reattivo veniva addizionato ad un pool di urina alle concentrazioni elencate e saggiato in modalità qualitativa e semi-quantitativa. I campioni che risultavano positivi o superiori alla concentrazione di cutoff erano considerati in grado di manifestare cross-reattività con il saggio e i campioni che risultavano negativi o inferiori alla concentrazione di cutoff erano considerati non manifestare una cross reattività significativa. 4

5 I seguenti composti precursori e metaboliti, quando venivano sottoposti a test con il saggio per il rilevamento delle anfetamine, producevano un risultato positivo alle concentrazioni sottoelencate. Composto 500, 1.000, d-anfetamina d-metanfetamina Metilenediossianfetamina (MDA) Metilendiossimetamfetamina (MDMA) Alcuni composti strutturalmente non correlati e/o farmaci utilizzati in concomitanza hanno prodotto un risultato alle concentrazioni sottoelencate. Composto 500, 1.000, Acido acetilsalicilico Benzfetamina Benzilpiperazina Benzoilecgonina Bupropione Caffeina Cetirizina dicloridrato Clorpromazina Codeina d,l efedrina D-efedrina Destrometorfano d-pseudoefedrina Fenciclidina (PCP) Fendimetrazina Fenfluramina Fenilefrina Feniletilamina Fenilpropanolamina Fenmetrazina Fenobarbital Fenotiazina Fentermina Isometeptene l L-efedrina l l-pseudoefedrina Mefentermina Meperidina Metadone Metapirilene Metilfenidato Metronidazolo Morfina Norpseudoefedrina Oxazepam Paracetamolo Tabella (segue) Composto 500, 1.000, Procainamide Prometazina Propranololo Ranitidina Scopolamina Secobarbital Tioridazina Tiramina Trifluoperazina Triflupromazina Vasosuprina OH-tiramina Interferenza I potenziali effetti del ph, delle sostanze endogene ed esogene sul recupero delle anfetamine utilizzando il saggio per il rilevamento delle anfetamine sono stati valutati aggiungendo quantità note di sostanze potenzialmente interferenti a due pool di urina priva di droga contenenti la massima concentrazione di anfetamina e metanfetamina che produce un risultato costantemente, e la minima concentrazione di anfetamina e metanfetamina che produce un risultato costantemente positivo, tra ± 25 % del valore di cutoff. I campioni sono stati saggiati sia in modalità qualitativa, sia semi-quantitativa. Non sono risultate osservabili interferenze con l'aggiunta dei composti alle concentrazioni elencate nella tabella seguente. Sostanza psicotropa: anfetamina, metanfetamina Composto interferente Concentrazione del composto neg. Cutoff 500 (NEG/POS) pos. Cutoff (NEG/POS) neg. pos. Acetone 1 g/dl Neg Pos Neg Pos Acido ascorbico 1 g/dl Neg Pos Neg Pos Acido ossalico 100 mg/dl Neg Pos Neg Pos Albumina sierica umana 500 mg/dl Neg Pos Neg Pos Aspirina 100 µg/ml Neg Pos Neg Pos Caffeina 100 µg/ml Neg Pos Neg Pos Cloruro di sodio 1 g/dl Neg Pos Neg Pos Creatinina 500 mg/dl Neg Pos Neg Pos Emoglobina 150 mg/dl Neg Pos Neg Pos Etanolo 1 g/dl Neg Pos Neg Pos Galattosio 10 mg/dl Neg Pos Neg Pos -globulina 500 mg/dl Neg Pos Neg Pos Glucosio 3 g/dl Neg Pos Neg Pos Ibuprofene 100 µg/ml Neg Pos Neg Pos Intervallo del ph 3 11 Neg Pos Neg Pos Paracetamolo 100 µg/ml Neg Pos Neg Pos Peso specifico 1,004 1,038 g/ml Neg Pos Neg Pos Riboflavina 7,5 mg/dl Neg Pos Neg Pos Urea 1,25 g/dl Neg Pos Neg Pos 5

6 Bibliografia 1. Urine Testing for Drugs of Abuse. National Institute on Drug Abuse (NIDA). Research Monograph 73, Mandatory Guidelines for Federal Workplace Drug Testing Programs. National Institute On Drug Abuse. Federal Register Vol. 73, No. 228, 2008: Julien RM. A Primer of Drug Action. 6th ed. New York, NY: WH Freeman & Co; Miller NS, Gold MS. Amphetamine and its derivatives. In: Giannini AJ, Slaby AE, eds. Drugs of Abuse. Oradell, NJ: Medical Economics Books; Baselt RC. Disposition of Toxic Drugs and Chemicals in Man, 5th ed. Foster City, CA: Chemical Toxicology Institute; Rubenstein KE, Schneider RS, and EF Ullman: Homogenous Enzyme Immunoassay: A New Immunochemical Technique. Biochem Biophys Res Commun. 1972:47, Jimenez, et al, Stability Studies of amphetamine and ephedrine derivatives in urine. Journal of Chromatography B, (2006) 84: Drugs of Abuse, Clinical Reference Laboratory, Inc., (2009) C52-A2, Toxicology and Drug Testing in the Clinical Laboratory; Approved Guideline Second Edition, Clinical and Laboratory Standards Institute (CLSI) (April 2007). 10. Notice of Mandatory Guidelines for Federal Workplace Drug Testing Program: Final Guidelines; Federal Register, Substance Abuse and Mental Health Administration (SAMHSA), (1994) 110 (June 9): Data on file at Microgenics Corporation, a part of Thermo Fisher Scientific. 12. Clinical and Laboratory Standards Institute. Evaluation of Precision Performance of Quantitative Measurement Methods; Approved Guideline. 2nd ed. Wayne, PA: Clinical and Laboratory Standards Institute; NCCLS EP05-A2 Document Microgenics Corporation Kato Road Fremont, CA USA Servizio di assistenza tecnica e alla clientela negli USA: B R A H M S GmbH Neuendorfstrasse Hennigsdorf, Germany Per gli aggiornamenti del foglio illustrativo, visitare: Negli altri paesi: Rivolgersi al rappresentante Thermo Fisher Scientific locale di zona IT