For the detection of coliform bacteria in milk and milk products, with MPN technique, proceed according to ISO

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1 TECHNICAL SHEET TS Rev. 0 of Pag. 1 of 2 Selective medium for coliforms and faecal coliforms detection according to ISO TYPICAL FORMULA (g/l) Oxbile Lactose Peptone Brilliant Green Final ph 7.2 ± 0.2 DESCRIPTION is a selective medium for coliforms and faecal coliforms detection with MPN method. The medium is recommended : For coliforms determination at 30 C with MPN method by directive UNI ISO 4831 for foods and by ISO 5541/2 for milk and dairy products.. By APHA for confirmation of faecal coliforms at 44.5 C. By DPR n. 470, , for research with MPN method, of coliforms in water bathing at 44 C. By O.M. 11/10/87 for presumptive test of research of coliforms in milk, products with eggs, ice-creams and compounds for ice-creams. PRINCIPLE contains two inhibitors of both gram-positive and selected gram-negative organisms; i.e., oxgall and brilliant green dye. Organisms, primarily coliforms, which are resistant to the action of the inhibitors and which ferment the lactose, are able to replicate in this medium. Fermentation is detected by gas production. TECHNIQUE For the enumeration of coliform bacteria with the most probable number (MPN) technique proceed according to ISO 4831 and proceed as following: 1. From each of the incubated tubes with double-strength and single -strength Lauryl Pepto Broth (Code ) inoculate with a loop a tube of and incubate at 30 or 37 C for 24 ± 2 hours or, if gas formation is not observed, for 48 ± 2 hours. 2. For each dilution of incubated confirmation liquid medium count the total number of tubes in which gas formation is observed. 3. Express the results as the Most Probable Number of coliforms on the basis of gas production in tubes after 48 hours incubation. For the enumeration of faecal coliform bacteria with the most probable number technique proceed as following: 1. From each of the positive tubes of MacConkey Broth (Code 20126), inoculate, with a loop, a tube of and a tube of Peptone Water (Code 20098) and incubate at 44 C. 2. Observe for gas production in, after 24 and 48 hours of incubation and test the indole production on Peptone Water (Code 20098) after 24 hour of incubation. For the detection of coliform bacteria in milk and milk products, with MPN technique, proceed according to ISO INTERPRETATION OF RESULTS Gas production within 48 ± 3 hours is considered positive evidence of fermentation by coliform bacilli. Detailed results for the enumeration of coliforms using are discussed in the various compendia of methods for microbiological examination of foods, dairy products and water and wastewater. STORAGE C away from light, until the expiry date indicated on the label or until signs of deterioration or contamination are evident. WARNING and PRECAUTIONS The product is not classified as hazardous by current legislation and does not contain harmful substances in concentrations of 1%.The product must be used only by properly trained operators. DISPOSAL of WASTE Disposal of waste must be carried out according to national and local regulations in force. REFERENCES 1. Clesceri, Greenberg and Eaton (ed.) Standard methods for the examination of water and wastewater, 20 th ed. American Public Health Association, Washington, D.C. 2. Marshall (ed.)1993. Standard methods for the examination of dairy products, 16 th ed. American Public Health Association, Washington, D.C. 3. Horwitz (ed.) Official methods of analysis of AOAC International, 17 th ed. Vol. 1. AOAC International, Gaithersburg, Md. 4. ISO 4832 Microbiology of food and animal feeding stuffs_horizontal method for the enumeration of coliforms_colony Count technique. 5. ISO Milk and Milk products- Enumeration of coliforms- Part 2 Most probable number technique at 30 C

2 TS Rev. 0 of Pag. 2 of 2 PRODUCTS SPECIFICATIONS NAME PRESENTATION Glass tubes containing 10 ml of broth with Durham tube. STORAGE C PACKAGING Code Content Packaging tubes x 10 ml 10 tubes in cardboard box ph OF THE MEDIUM 7.2± 0.2 USE Selective medium for coliforms and faecal coliforms detection according to ISO TECHNIQUE Refer to technical sheet of the product. APPEARANCE of the MEDIUM Emerald green SHELFLIFE 2 years QUALITY CONTROL 1. Control of general characteristics, label and print 2. Sterility control 2 days at 20 ± 2 C, in aerobiosis 1 day at 36 ± 1 C, in aerobiosis 3. Microbiological control Inoculum for productivity: UFC/ml Inoculum for specificity: 10 4 UFC/ml Inoculum for selectivity: UFC/ml Incubation conditions: 35± 2 C for hours. Microorganism Growth Gas production Klebsiella pneumoniae ATCC Good + Proteus mirabilis ATCC25933 Good - Escherichia coli ATCC Good + Pseudomonas aeruginosa ATCC Good - TABLE of SYMBOLS Symbol Meanings Manufacturer Catalogue number Use by Temperature limitation Do not reuse Contains sufficient for <n> tests Consult accompanying documents Batch code Fragile, handle with care

3 Pag. 1 di 3 Terreno selettivo per la ricerca di coliformi e coliformi fecali secondo la ISO 4832 FORMULA TIPICA (g/l) Bile Batteriologica 20.0 Lattosio 10.0 Peptone 10.0 Verde Brillante ph = finale 7.2 ± 0.2 DESCRIZIONE è un terreno selettivo per la ricerca di coliformi e coliformi fecali secondo la ISO Il terreno è raccomandato : per la determinazione dei coliformi a 30 C con il metodo MPN dalla direttiva UNI ISO 4832 per gli alimenti in generale e dalla ISO 5541/2 per latte e prodotti caseari in particolare. Dall' APHA per la conferma dei coliformi fecali a 44.5 C. Dal DPR n. 470, , per la determinazione dei coliformi a 44 C con il metodo MPNnelle acque di balneazione. Dall' O.M. 11/10/87 per la ricerca presuntiva dei coliformi nel latte, nei prodotti contenenti uova, gelati e composti per gelati. PRINCIPIO Il peptone fornisce azoto, carbonio, zolfo e vitamine. Il lattosio è una fonte di energia che favorisce la crescita dei microrganismi. La presenza del verde brillante sopprime la crescita dei batteri anaerobi lattosio-fermentanti (Clostridium perfringens) non ottenendosi falsi positivi; il verde brillante ed i sali biliari inibiscono la crescita dei microrganismi Gram-positivi. TECNICA La norma UNI ISO 4831 raccomanda la seguente tecnica per la determinazione dei coliformi con metodo MPN: 1. Seminare 3 provette con 10 ml di terreno a doppia concentrazione con 10 ml del campione da esaminare, se è liquido o 10 ml della sospensione madre se solido. 2. Seminare 3 provette con 10 ml di terreno a concentrazione semplice con 1 ml del campione da esaminare, se è liquido o 1 ml della sospensione madre se solido. 3. Per ciascuna delle diluizioni seguenti (a partire da 1/10 o 1/100 a seconda dei casi) seminare 3 provette di terreno a concentrazione semplice con 1 ml di ciascuna diluizione. 4. Incubare le provette a doppia concentrazione in termostato a 30 +/- 1 C per 24 +/- 2 ore. 5. Incubare le provette di terreno a concentrazione semplice in termostato a 30 +/- 1 C per 24 +/- 2 ore, oppure, se a questo stadio non si osserva formazione di gas né intorbidimento, per 48 +/- 2 ore. 6. A partire da ciascuna provetta di terreno a concentrazione doppia, trapiantare un ansata di brodocoltura in nuove provette di terreno a concentrazione semplice ed incubare a 30 +/- 1 C per 24 +/- 2 ore, oppure, se a questo stadio non si osserva formazione di gas né intorbidimento, per 48 +/- 2 ore. 7. Operare nello stesso modo per le provette a concentrazione semplice trapiantando solo nel caso si osservi formazione di gas o intorbidimento, dal momento che si osserva uno di questi fenomeni. 8. Per ogni diluizione, contare il numero di provette dove si nota formazione di gas. INTERPRETAZIONE DEI RISULTATI Esprimere i risultati facendo uso delle apposite tabelle MPN. Per eseguire il test di conferma dei coliformi fecali a 44 C operare come segue: 1. Trasferire un ansata di crescita dai tubi positivi di Mac Conkey Broth in provette di Brilliant Green Bile Broth 2% e di Peptone Water ed incubare a 44 +/- 1 C. 2. Osservare lo sviluppo di gas nelle provette di Brilliant Green Bile Broth 2% dopo 24 e 48 ore di incubazione ed eseguire il test dell indolo sulla crescita di 24 ore in Peptone Water. 3. Le colture che producono gas e sono indolo positive sono da considerarsi coliformi di origine fecale. CONDIZIONI DI CONSERVAZIONE C al riparo dalla luce, fino alla data di scadenza indicata in etichetta. Eliminare se vi sono segni evidenti di deterioramento. AVVERTENZE E PRECAUZIONI Il prodotto non è classificato come pericoloso ai sensi della legislazione vigente, né contiene sostanze nocive in concentrazioni 1%. Il prodotto deve essere utilizzato da parte di personale qualificato. Prima dell uso assicurarsi che il prodotto non presenti segni di deterioramento ed inquinamento. SMALTIMENTO DEI RIFIUTI Lo smaltimento del prodotto deve essere effettuato secondo le vigenti regolamentazioni nazionali e locali.

4 Pag. 2 di 3 RIFERIMENTI BIBLIOGRAFICI 1. Clesceri, Greenberg and Eaton (ed.) Standard methods for the examination of water and wastewater, 20 th ed. American Public Health Association, Washington, D.C. 2. Marshall (ed.)1993. Standard methods for the examination of dairy products, 16 th ed. American Public Health Association, Washington, D.C. 3. Horwitz (ed.) Official methods of analysis of AOAC International, 17 th ed. Vol. 1. AOAC International, Gaithersburg, Md. 4. ISO 4832 Microbiology of food and animal feeding stuffs_horizontal method for the enumeration of coliforms_colony Count technique. 5. ISO Milk and Milk products- Enumeration of coliforms- Part 2 Most probable number technique at 30 C

5 Pag. 3 di 3 SPECIFICHE DI PRODOTTO DENOMINAZIONE PRESENTAZIONE Provette in vetro pronte all'uso contenenti 10+/-1 ml di terreno ed una provetta di Durham. CONFEZIONAMENTO Codice Contenuto Confezionamento provette x 10 ml 10 provette in scatola di cartone ph DEL TERRENO 7.2 ± 0.2 IMPIEGO è un terreno selettivo per la ricerca di coliformi e coliformi fecali secondo la ISO TECNICA Fare riferimento alla scheda tecnica del prodotto. ASPETTO DEL TERRENO Terreno verde smeraldo. VALIDITA DALLA DATA DI PRODUZIONE 2 anni CONTROLLO DI QUALITA 1. Controllo caratteristiche generali, etichettatura e stampa 2. Controllo sterilità 2 giorni a 20 ± 2 C, in aerobiosi 1giorni a 36 ± 1 C, in aerobiosi 3. Controllo microbiologico Dimensione dell inoculo per produttività: UFC/ml Dimensione dell inoculo per selettività: UFC/ml Condizioni di incubazione:24 ore a 36+/-1 C Microrganismo Crescita Gas Klebsiella pneumoniae ATCC Buona + Proteus mirabilis ATCC25933 Buona - Escherichia coli ATCC Buona + Pseudomonas aeruginosa ATCC Buona - TABELLA DEI SIMBOLI Codice del lotto Attenzione, consultare le istruzioni per l' uso Fabbricante Contenuto sufficiente per <n> saggi Numero di catalogo Limiti di temperatura Utilizzare entro