MULLER HINTON AGAR Medium for susceptibility test (Kirby-Bauer method)

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1 TECHNICAL SHEET TS Rev. 0 of Pag.1 of 2 MULLER HINTON AGAR Medium for susceptibility test (Kirby-Bauer method) TIPICAL FORMULA (g/l) Meat Extract Casamino Acids, Technical Starch Agar 15.0 Final ph 7.3 ± 0.1 DESCRIPTION MUELLER HINTON AGAR is used for antimicrobial susceptibility testing of rapidly growing aerobic microorganisms by the disk diffusion technique. PRINCIPLE Casamino acids and meat extract are a source of amino acids, nitrogen, minerals, vitamins, carbon and other factors which increase the growth of microorganisms. Starch acts as a protective substance against toxic molecules which can be present in the medium. Hydrolysis of starch during sterilization supplies a little amount of glucose which represents a source of energy. Agar is the solidifying agent. Kirby-Bauer method is based on the diffusion, through the agar, of antimicrobial substances which soaks paper disks: microrganism growth shows an inhibition halo around the disk and the diameter of the halo is correlated to the Minimal Inhibiting Concentration (MIC). PREPARATION Melt the content of one bottle in a boiling water-bath at 100 C (with cap partially unscrewed) until completely dissolved. After molten, verify the proper homogeneity of medium, turning upside down the bottle after screwing cap. If necessary, put the bottle in the water-bath to reach the total melting. Cool to C, carefully mix avoiding bubbles formation. Aseptically distribute into Petri dishes. Carefully allow the plates to dry in order to avoid condensation formation that may cause medium contamination. Store the plates upside-down in tightly closed containers or polyethylene envelopes. TECHNIQUE To prepare inoculum, suspend 4-5 colonies grown in a primary isolation medium in 4-5 ml of Tryptic Soy Broth (code 21104) and incubate for 2-6 hours until the broth culture reaches the same density of the standard 0.5 Mc Farland. Dip a steril swab into the broth culture, squeeze it against the wall of the tubes to remove excess liquid, then streak it over the surface of the agar plates to obtain a uniform distribution of the inoculum. Leave the plates to dry then lay the paper disc pressing them onto the surface of the agar. Within 15 minutes of disc positioning, turn upside-down the plates and incubate at 36+/-1 C for 18 hours in aerobic atmosphere. INTERPRETATION OF RESULTS At the end of incubation, measure inhibition halo diameter using a decimetre. By taking into consideration the zone, which are completely free of microbila growth and which have distinct border. Colonies that may grow inside the halo, have to be re-isolated and re-tested. Some strains of Proteus mirabilis and Proteus vulgaris may swarm inside the inhibition zones. Do not consider this natural phenomenon when measure these halos. Compare obtained values of inhibition halo diameter with the values reported on NCCLS M100(M2) document. STORAGE C away from light, until the expiry date on the label or until signs of deterioration or contamination are evident. WARNING and PRECAUTIONS The product is not classified as hazardous by current legislation and does not contain harmful substances in concentrations of 1%. The product is designed for In vitro diagnostic use and must be used only by properly trained operators. DISPOSAL of WASTE Disposal of waste must be carried out according to national and local regulations in force. REFERENCES 1. Bauer et al. (1966). J. Clin. Pathol. 45: Mueller, J.H., and Hinton Proc. Soc. Exp. Biol. Med. 48: NCCLS. Performance standards for susceptibility testing; Twelve Informational Supplement. NCCLS Document M100-S12, January LIOFILCHEM Bacteriology Products

2 TECHNICAL SHEET TS Rev. 0 of Pag.1 of 2 PRODUCT SPECIFICATIONS NAME MUELLER HINTON AGAR PRESENTATION Code Glass bottles containing 100 ml of medium. Code Glass bottles containing 200 ml of medium. Code Glass bottles containing 500 ml of medium. STORAGE C PACKAGING Code Content Packaging bottles x 100mL 6 bottles in cardboard boxes bottles x 200mL 6 bottles in cardboard boxes bottles x 500mL 6 bottles in cardboard boxes ph OF THE MEDIUM 7.3 ± 0.1 USE MUELLER HINTON AGAR is used for antimicrobial susceptibility testing of rapidly growing aerobic microorganisms by the disk diffusion technique. TECHNIQUE Refer to technical sheet of the product. APPEARANCE OF THE MEDIUM Amber medium, slightly opalescent. SHELFLIFE 2 years QUALITY CONTROL 1. Control of general characteristics, label and print 2. Sterility control 7 days at 25 ± 1 C, in aerobiosis 7 days at 36 ± 1 C, in aerobiosis 3. Microbiological control Incubation conditions:18-24 h at 36 ± 1 C Microorganism Growth Characteristics Enterococcus faecalis ATCC Good White colonies Escherichia coli ATCC Good Colorless colonies Proteus mirabilis ATCC Good Colorless colonies Staphylococcus aureus ATCC Good White colonies TABLE OF SYMBOLS Symbol Meanings Catalogue number Manufacturer Temperature limitation Contains sufficient for <n> tests Use by Batch code Consult accompanying documents Do not reuse Fragile, handle with care LIOFILCHEM Bacteriology Products

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4 SCHEDA TECNICA ST Rev. 0 del Pag.1 di 2 MULLER HINTON AGAR Terreno per il test antibiogramma (metodo Kirby-Bauer). COMPOSIZIONE TIPICA (g/l) Estratto di carne. 2.0 Idrolizzato acido di caseina Amido Agar 15.0 ph finale 7.3 ± 0.1 DESCRIZIONE MUELLER HINTON AGAR è utilizzato per il test di sensibilità agli antibiotici di microrganismi aerobi a rapida crescita con il metodo Kirby-Bauer. PRINCIPIO L idrolizzato acido di caseina e l estratto di carne sono una fonte di amminoacidi, azoto, minerali, vitamine, carbonio ed altri nutrienti che sostengono la crescita dei microrganismi. L amido agisce da sostanza protettiva contro eventuali molecole tossiche che possono essere presenti nel terreno. L idrolisi dell amido nel corso della sterilizzazione fornisce un piccolo quantitativo di glucosio che costituisce una fonte di energia. L agar è l agente solidificante. Il metodo Kirby-Bauer si basa sulla diffusione attraverso l agar di sostanze antimicrobiche con cui sono impregnati dischetti di carta: il diametro dell alone d inibizione della crescita del microrganismo, che si forma intorno al dischetto, è correlato con la minima concentrazione inibente (MIC). PREPARAZIONE Far sciogliere il contenuto di una flacone in bagnomaria a 100 C (lasciando i tappi parzialmente svitati) fino a completa dissoluzione. Verificare l' omogeneità del terreno capovolgendo il flacone dopo aver avvitato il tappo. Se necessario porre il flacone in un bagno maria per raggiungere il completo scioglimento del terreno. Raffreddare a C. Agitare bene evitando la formazione di bolle e distribuire asetticamente in Piastre Petri. Lasciar solidificare il terreno. Conservare le piastre in contenitori chiusi ermeticamente. TECNICA Trasferire 4-5 colonie in un terreno di crescita liquido ed incubare a 36+/-1 C fino ad ottenere un opacità equivalente allo 0.5 della scala MacFarland. Introdurre un tampone sterile all interno del brodo di coltura ed inoculare il terreno solido strisciando il tampone 2 o 3 volte sull intera superficie. Premere il disco contenente l antibiotico sulla superficie dell agar. Incubare a 36+/-1 C per 18 ore e successivamente misurare il diametro dell alone d inibizione utilizzando un compasso. LETTURA ED INTERPRETAZIONE Confrontare i valori ottenuti per il diametro dell alone d inibizione con quelli riportati nel documento NCCLS M100(M2). CONDIZIONI DI CONSERVAZIONE C al riparo dalla luce, fino alla data di scadenza indicata in etichetta. Eliminare se vi sono segni evidenti di deterioramento o contaminazione. AVVERTENZE E PRECAUZIONI Il prodotto non è classificato come pericoloso ai sensi della legislazione vigente, né contiene sostanze nocive in concentrazioni 1%. Il prodotto è destinato esclusivamente per Uso Diagnostico in vitro e deve essere utilizzato da parte di personale qualificato. SMALTIMENTO DEI RIFIUTI Lo smaltimento del prodotto deve essere effettuato secondo le vigenti regolamentazioni nazionali e locali. RIFERIMENTI BIBLIOGRAFICI 1. Bauer et al. (1966). J. Clin. Pathol. 45: Mueller, J.H., and Hinton Proc. Soc. Exp. Biol. Med. 48: NCCLS. Performance standards for susceptibility testing; Twelve Informational Supplement. NCCLS Document M100-S12, January Liofilchem s.r.l Bacteriology Products Via Scozia-Zona industriale Roseto degli Abruzzi Tel Fax Web site: liofilchem@liofilchem.net

5 ST Rev. 0 del Pag.2 di 2 SPECIFICHE DI PRODOTTO DENOMINAZIONE MUELLER HINTON AGAR PRESENTAZIONE Codice Flaconi in vetro contenenti 100mL di terreno. Codice Flaconi in vetro contenenti 200mL di terreno. Codice Flaconi in vetro contenenti 500mL di terreno. CONSERVAZIONE C CONFEZIONE Codice Contenuto Confezionamento flaconi x 100mL 6 flaconi in scatola di cartone flaconi x 200mL 6 flaconi in scatola di cartone flaconi x 500mL 6 flaconi in scatola di cartone ph DEL TERRENO 7.3 ± 0.1 IMPIEGO MUELLER HINTON AGAR è utilizzato per il test di sensibilità agli antibiotici di microrganismi aerobi a rapida crescita con il metodo Kirby-Bauer. TECNICA Fare riferimento alla scheda tecnica del prodotto. ASPETTO DEL TERRENO Terreno ambrato, leggermente opalescente. VALIDITA DALLA DATA DI PRODUZIONE 2 anni CONTROLLO DI QUALITA Controllo caratteristiche generali, etichettatura e stampa Controllo sterilità 7 giorni a 25 ± 1 C, in aerobiosi 7 giorni a 36 ± 1 C, in aerobiosi Controllo microbiologico Condizioni di incubazione:18-24 h a 36 ± 1 C, in aerobiosi Microrganismo Crescita Caratteristiche Enterococcus faecalis ATCC Buona Colonie bianche Escherichia coli ATCC Buona Colonie incolori Proteus mirabilis ATCC Buona Colonie incolori Staphylococcus aureus ATCC Buona Colonie bianche TABELLA DEI SIMBOLI Simbolo Significato Numero di codice Per uso diagnostico in vitro Prodotto da Conservare Contenuto della confezione Data scadenza Numero di lotto Consultare le istruzioni per l'uso Liofilchem s.r.l Bacteriology Products Via Scozia-Zona industriale Roseto degli Abruzzi Tel Fax Web site: liofilchem@liofilchem.net