Venturia inaequalis (Cooke) G. Wint. Ospiti: melo, melo selvatico (Malus spp.), biancospino (Crataegus spp.), sorbo (Sorbus spp.
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- Giulia Bianco
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1 Venturia inaequalis (Cooke) G. Wint. Ospiti: melo, melo selvatico (Malus spp.), biancospino (Crataegus spp.), sorbo (Sorbus spp.), piracanta (Pyracantha spp.), e nespolo del Giappone (Eriobotrya japonica). Maggiori cultivar di melo suscettibili. Il pero (Pyrus spp.) è attaccato da Venturia pirina.
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3 Due tipi sessuali: anteridio e tricogino. Pseudotecio su tessuti fogliare Pseudotecio In primavera, quando le foglie al suolo diventano umidi, gli pesudoteci maturi si rigonfiano e sporgono dalla supericie fogliare.
4 Pseudotecio e aschi Stroma, una singola cavità File di 8 ascospore per asco
5 Ascospore e conidi inaequalis Impronta di scarpa Infezioni primarie Anamorfo: Spilocaea pomi. Conidi unicellulari, marroni o oliva. Infezioni secondarie
6 Ascospore e conidi Cuticola fogliare: rottura e fuoriuscita di conidi e conidiofori Apparenza vellutata Conidi dispersi da vento e acqua Conidio germina, penetra cuticola e dà origine a infezione secondaria
7 Fungicidi trattamenti a stagione Fungicidi di copertura preventivi, prima delle infezioni Fungicidi sistemici curativi, dopo le infezioni
8 Captaspore Campione di superficie Campione da tampone Campione da nastro adesivo
9 Obiettivi del progetto FRUITSENSOR Il principale obiettivo del progetto è lo sviluppo di strumenti diagnostici per il rivelamento rapido e preciso di Venturia inaequalis a basse concentrazioni nei frutteti. Il progetto propone l'integrazione di un trasduttore nanomeccanico altamente sensibile e label-free (MCs o microcanale sospeso oscillante), con recettori sintetici (sonde) e micro/nano-beads come vettori.
10 T1.1. Collezione di isolati di V. inaequalis e sequenziamento di geni chiave Collezione di isolati di Venturia inaequalis: Variabilità genetica Resistenza a fungicidi Sequenziamento di geni chiave
11 qpcr e sonda molecolare: T1.2. e T1.3. qpcr con sonda Taqman su regione ITS (Daniels et al 2012) qpcr con sonda Taqman su gene ABC2 (Gusberti et al 2012) R Q 3 5 Primer TaqMan probe R Q 3 5 Emissione di fluorescenza
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13 qpcr e sonda molecolare: T1.2. e T1.3. T1.2. A. Disegnare primer e sonde per l identificazione di V. inaequalis tramite qpcr. B. I primer/sonde saranno ottimizzati secondo le esigenze del nanobiosensore per l identificazione fungina. T1.3. A. Retta di taratura per quantificare il patogeno fungino. B. Verifica su campioni provenienti da diverse varietà di melo, suscettibili e resistenti a ticchiolatura, e su campioni di residui colturali e di terreno presenti in frutteto.
14 T1.4 Prestazioni del nanosensore 1. Valutazione della funzionalizzazione chimica per legare covalentemente le sonde al sensore. Le strategie di immobilizzazione delle sonde alla superficie del cantilever possono essere molteplici. Si confronteranno tre tipi di attivazione superficiale per sfruttare la chimica oro-tiolo, anidride succinica o copolimero legare sonde amminate. Esempio di funzionalizzazione del sensore 2. Valutazione delle prestazioni del nanobiosensore con soluzioni buffer a concentrazioni note di DNA fungino.
15 T1.5 Ottimizzazione del nanosensore Il nanobiosensore per l identificazione fungina miniaturizzato verrà saggiato su diverse matrici vegetali e su strip provenienti da captaspore piazzati in campo. DNA. Verranno eseguite real time PCR. I risultati del nanobiosensore e della qpcr verranno confrontati. Retta di taratura per correlare al numero di ufc i dati ottenuti mediante real time PCR o nanobiosensore per l identificazione fungina.
16 T1.6. Integrazione del nanosensore con il captaspore Studio di fattibilità: Progetto di un sistema microfluidico che consenta tramite una componente fluida (liquida o eventualmente gassosa) di estrarre le spore dalla strip del captaspore, estrarre e amplificare il DNA e di convogliarlo nella zona attiva del nanosensore. Simulazioni agli elementi finiti per valutare le condizioni ottimali di trasporto e predire il comportamento nanomeccanico del sensore. Ricerca brevettuale
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