AGGIORNAMENTI SULL ANALISI DEI RESIDUI DI PESTICIDI MEDIANTE METODI A SINGOLO RESIDUO NELL AMBITO DEI PROFICIENCY TEST EUROPEI E NAZIONALI Workshop «Laboratori Nazionali di Riferimento AO/CF/FV/SRM e Laboratori Ufficiali per l analisi di residui di antiparassitari in alimenti» Angela Santilio Laboratorio Nazionale di Riferimento per i residui di pesticidi metodi a singolo residuo Istituto Superiore di Sanità Dipartimento Ambiente e Salute E-mail: angela.santilio@iss.it
INTRODUZIONE EUPTSRM11-2016 spinaci Metodi di analisi nei proficiency test
I risultati del PT Europeo su spinaci EUPT-SRM11 è stato condotto tra Aprile e Giugno 2016. Il test è stato condotto su omogenato di spinaci.
I risultati del PT Europeo su spinaci Composti obbligatori da ricercare 2,4-D Cyromazine BAC-C14 DTC Dodine Ethefon Fluazifop Glyfosate Haloxyfop TFNA (metabolita flonicamid) TFNG (metabolita flonicamid) Tolylfluanide Composti facoltativi da ricercare BAC-C10-C18 Chlorate DDAC Dithianon Fosetyl Phosphinc acid MCPA MCPB Perchlorate Pymetrozine Quizalofop Triclopyr
I risultati del PT Europeo su spinaci 6 composti obbligatori presenti: Cyromazine, DTC, Dodine, TFNA e TFNG (metaboliti Flonicamid), Tolylfluanide 8 composti opzionali presenti : BAC-C14, Chlorate, Dithianon, Perchlorate, Pymetrozine, Quizalofop, Triclopyr.
I risultati del PT Europeo spinaci Campione addizionato (350 g) Campione non addizionato (350 g) (bianco). I campioni furono inviati ai laboratori partecipanti in ghiaccio secco.
I risultati del PT Europeo spinaci 13 laboratori partecipanti di cui 2 privati 5 laboratori al Nord 5 laboratori al Centro 3 laboratori al SUD 1 privato e 1 laboratorio ufficiale non hanno presentato i risultati 2 laboratori hanno analizzato tutte le sostanze 1 laboratorio ha analizzato 3 sostanze 5 laboratori hanno analizzato 2 sostanze 2 laboratori hanno analizzato 1 sostanza
I risultati per i composti obbligatori Analita Cyromazina DTC Dodina TFNA TFNG Tolylfluanide Valore assegnato (mg/kg) 1,514 1,298 1,243 0,758 0.448 0.598 Lab no 4 2.120; 1.6 1.610; 1.0 1.430; 0.6 0.891; 0.7 0.473; 0.2 0.821;1.5 17 1.450;-0.2 1.340; 0.1 -- -- -- -- 27 0.948; -1.5 2.327; 3.2 0.146; -3.5 0.503; -1.3 0.363; -0.6 0.738; 0.9 37 1.584; 0.2 --- 1.454; 0.7 --- --- 0.524; -0.5 66 1.270; -0.60 --- --- --- --- 0.430; -1.1 82 0.483; -2.7 -- --- --- --- 0.160; -2.9 84 --- 1,400; 0,3 1,370; 0,4 -- -- -- 90 -- -- 2.4; 3.7 -- -- --- 92 -- 1.420; 0.4 -- -- -- -- 97 1,350; -0,4 1,050; -0,8 -- -- -- 0,299; -2,0 99 -- -- -- -- -- -- 110 -- --- 1.090; -0.5 -- -- -- 113 -- -- -- -- -- --
I risultati per i composti facoltativi Analita BAC-C14 Clorato Dithianon Phosphonic acid Perchorate Pymetrozine Quizalofop Triclopyr Valore Assegnato (mg/kg) 0.284 2.207 1.729 9.831 0.26 0.432 0.169 0.177 Lab no 4 0.352; 0.9 2.750; 1.0 2.09; 0.8 17.30; 3.0 0.361; 1.5 0.371;-0.6 FN; -3.8 0.097; -1.8 17 -- -- -- -- -- 0.306;-1.2 -- -- 27 -- 0.650; -2.8 -- 5.528; -1.8 0.326; 1.0 -- --- --- 37 0.358; 1.0 --- --- -- -- --- --- 0.195; 0.4 66 0.330; 0.6 --- --- --- --- --- --- --- 82 -- -- -- -- 0.070; -2.9 --- --- 84 -- -- -- -- -- -- -- -- 90 0.241; -0.6 -- -- -- -- -- -- --- 92 -- -- -- -- -- -- -- -- 97 -- -- -- -- -- 0,310; -1,1 -- -- 99 -- -- -- -- -- -- -- -- 110 0.223; -0.9 --- -- --- -- 1.310; 8.1 -- --- 113 -- -- -- -- -- -- -- --
I risultati del PT Europeo spinaci Composti obbligatori 70% 60% 50% 40% 30% 20% 10% 0% 70% 46% 46% 15% 15% 46% Serie1
I risultati del PT Europeo su spinaci Composti facoltativi 40% 35% 38% 31% 30% 25% 20% 15% 10% 15% 8% 15% 8% 15% 5% 0%
I risultati del PT Europeo su spinaci Per l Italia hanno partecipato 11 laboratori ufficiali e 2 laboratori privati. Due laboratori non hanno inviato risultati (1 laboratorio ufficiale e 1 laboratorio privato. I laboratori partecipanti hanno determinato pochi composti rispetto alla lista fornita da EURL-SRM. I valori di z-score sono inferiori a 2 ad eccezione dei valori di z-score >3 per Dodina e Ditiocarbammati e dei valori >2 per Cyromazina e Tolylfluanide.
I metodi di analisi fenossiacidi Due metodi: QuEChERS metodo (EN 15662) QuEChERS metodo acidificato (A-QuEChERS) QuEChERS estrazione con 10 ml acetonitrile contenente 1% acido formico e successiva ripartizione con 1g NaCl e 4g MgSO 4. Agitare per 15 minuti mediante agitator meccanico. Non viene condotta idrolisi alcalina poiché è necessario avere I composti nella forma acida. 22
I metodi di analisi fenossiacidi 1-Naphtyl acetic acid, 2,4,5-T, Fenopropo (2,4,5-TP), 2,4,6- Triclfhlorophenol, 2,4-D, 2,4-DB, 2,4-DP (dichlorprop), 2- Naphthoxyacetic acid, 4-CPA, Acifluorfen, Bentazone, Bromacil, Bromoxynil, BTS 9608 (metabolita Prochoraz) Clopyralid, Dalapon, Dicamba, Diflufenzopyr, Dikegulac, Fenoxaprop-p, Fluazifop, Fluroxypyr, acido Giberellico, Haloxyfop, Imazamox, Imazapyr, Imazethapyr, Inabenfide, Ioxynil, MCPA, MCPB, MCPP, Pentachlorophenol, Quizalofop, TFNA (metabolita flonicamid), TFNG (metabolita flonicamid), Triclopyr (IS= 2,4-D-D3, BNPH).
Metodo di analisi per la dodina Per la determinazione della Dodina utilizzando il QuEChERS e LC-MS/MS si osserva una sovrastima dei recuperi quando le soluzioni di calibrazione sono preparate in solvente. L effetto è attribuibile alla tendenza della Dodina a interagire con la superfice attiva, soprattutto in assenza di componenti della matrice competitive e può variare da strumento a strumento. Per eliminare tale effetto potrebbero essere utilizzate soluzioni di calibrazione in matrice. Alternativamente, l acidificazione delle soluzioni di calibrazione in solvente con acido formico può minimizzare queste interazioni.
Metodi di analisi QuPPe metodo per prodotti vegetali Version: V9.2 LC Method 1.1: Ethephon, HEPA, Glyphosate, AMPA, Glufosinate, MPPA, N-Acetylglufosinate LC Method 1.2: Ethephon, HEPA, Glyphosate, AMPA, Glufosinate, MPPA, N-Acetylglufosinate, Phosphonic acid, N-acetyl-AMPA, Fosetyl-aluminium LC Method 1.3: Ethephon, HEPA, Glyphosate, AMPA, Glufosinate, MPPA, N-Acetylglufosinate, Phosphonic acid, N-acetyl-AMPA, Fosetyl-aluminium, Maleic hydrazide, Perchlorate, Chlorate, Cyanuric acid, Bialaphos, N-Acetylglyphosate LC Method 1.4: Phosphonic acid, Perchlorate, Chlorate (better performing for these 3 compounds than method 1.3), Bromate, Bromide LC Method 2: Fosetyl-Al, Maleic hydrazide, Perchlorate LC Method 3: Amitrole, Chlormequat, Mepiquat, Difenzoquat, Daminozide, Trimesium, ETU, PTU, Cyromazine LC Method 4.1: Paraquat, Diquat, Chlormequat, Mepiquat, Difenzoquat, Daminozide, N,N- Dimethylhydrazine, Trimesium, Cyromazine, Nereistoxin, Melamine, Propamocarb LC Method 4.2: Amitrole, ETU, Chlormequat, Mepiquat, Daminozide, PTU, Cyromazine, Trimesium, Nereistoxin, Difenzoquat, Melamine, Propamocarb, Morpholine, Diethanolamine, Triethanolamine, Aminocyclopyrachlor, Choridazon-desphenyl, Mepiquat-4-hydroxy, Propamocarb-N-desmethyl, Propamocarb- N-oxide LC Method 5: Chlormequat, Mepiquat, Difenzoquat, ETU, PTU LC Method 6: Kasugamycin, Streptomycin LC Method 7: Morpholine, Diethanolamine, Triethanolamine (= wax additives present in extracts of waxtreated crops) LC Method 8: 1,2,4-Triazole (TRZ), Triazole-alanine (TA), Triazole-acetic acid (TAA), Triazole-lactic acid (TLA) and 1,2,3-Triazole (= Triazole Derivative Metabolites, TDMs) Last update of method: 14.10.2016
Metodi di analisi per Flonicamid e metaboliti Per la determinazione del Flonicamid e suoi metaboliti (TFNA, TFNG) si applica il metodo QuEChERS e il QuEcHERS modificato. Per aumentare i recuperi per TFNA e TFNG è consigliabile acidificare usando acetonitrile 1% con acido formico. Non è necessaria nessuna purificazione. Tale metodo permette di ottenere buoni recuperi. Usando la procedura del QuEChERS normale è possibile ottenere buoni recuperi per il flonicamid e il metabolita TFNA-AM.
Metodo di analisi per Pymetrozine Pymetrozine determinata mediante il QuEChERS mostra dei recuperi inferiori al 70% (45% - 60%). Questo comportamento è dovuto alle carattere amfillilico della molecola, comprende gruppi solubili e insolubili in acqua. In funzione dell ambiente in cui si estrae il valore dei recuperi varia. Nel caso del QuEChERS usando il tampone citrato il ph è circa 4, la presenza del MgSO4 provoca una diminuzione dl ph poiché lo ione Mg 2+ forma un complesso con il citrato che rilascia il protone. Di conseguenza i recuperi sono <70%.
Metodo di analisi per Pymetrozine Da uno studio fatto dal EURL SRM si è dedotto che il ph può essere incrementato sostituendo il citrato con l acetato e le miscele ottimali sono: 4 g MgSO 4 +1 g NaCl + 0.5 g sodium acetate (miscela A) 4 g MgSO 4 +1 g Mg-Acetate (miscela B) Recuperi con miscela A: 86% succo arancia; 89% cetriolo Recuperi con miscela B: 86% succo arancia e cetriolo Analisi cromatografica: Colonna: Aqua C18 Fase mobile: formiato d ammonio 5 mm in H 2 O; formiato d ammonio 5 mm in CH 3 OH ESI positivo IS: Chlorpyrifos-ethyl D10
Metodo di analisi per Bifenazate Bifenazate e il Bifenazate-diazene sono determinati applicando il QuEChERS. La particolarità è che l estratto grezzo o il purificato devono essere trattati con acido ascorbico per proteggere il Bifenazate dall ossidazione e per convertire il Bifenazate-diazene a Bifenazate. 1 ml di estratto grezzo o di purificato sono addizionati con 25 ml di soluzione di acido ascorbico (30%, w/w) e lasciati per una notte prima di iniettare.
Metodo di analisi per Bifenazate Cromatografia liquida LC/MS/MS ESI Positivo Colonna: Waters BEH C18 o equivalente 2.1x100 mm, 1.7 mm Fase mobile: 5 mm Formiato ammonio in H 2 0/CH 3 OH (95/5, v/v) 5 mm Formiato ammonio in CH 3 OH Temperatura colonna: 40 C IS: Chlorpyrifos D10 Recuperi ( 0,01 mg/kg) in diverse matrici (farina, succo arancia, cetriolo) 86%-101%