Normetanephrine ELISA

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1 Istruzioni per l Uso Normetanephrine ELISA Saggio immunoenzimatico per la determinazione diagnostica in vitro quantitativa di normetanefrina in urina umana. RE C I B L I N T E R N A T I O N A L G M B H Flughafenstrasse 52a Phone: +49 (0) IBL@IBL-International.com D Hamburg, Germany Fax: +49 (0)

2 1. USO PREVISTO Saggio immunoenzimatico per la determinazione diagnostica in vitro quantitativa di normetanefrina in urina umana. 2. SOMMARIO E SPIEGAZIONI Le catecolamine adrenalina, noradrenalina e dopamina sono sintetizzate nella midollare adrenergica, nel sistema nervoso simpatico e nel cervello. Esse influenzano virtualmente tutti i tessuti e sono coinvolte assieme ad altri sistemi ormonali e neuronali nella regolazione di una gran varietà di processi fisiologici. Poiché le catecolamine ed i loro metaboliti, metanefrina e normetanefrina, sono secreti in quantità in eccesso in un certo numero di patologie, possono essere utilizzate a scopo diagnostico. In tale contesto la diagnosi ed il monitoraggio di tumori del sistema nervoso hanno notevole importanza. Ciò vale in primo luogo per il feocromocitoma, ma anche per il neuroblastoma e per il ganglioneuroma. Una riproduzione maligna è descritta del 10% dei casi di feocromocitoma. Inoltre un incremento dei livelli di catecolamine e dei loro metaboliti metanefrina e normetanefrina è osservato in caso di carcinoide. 3. PRINCIPIO DEL TEST La procedura del dosaggio ricalca il principio di base dell ELISA per competizione, con competizione in questo caso di antigeni biotinilati verso antigeni non biotinilati per un numero fisso di siti anticorpali di legame. La quantità di antigene biotinilato legato all anticorpo è inversamente proporzionale alla concentrazione dell analita nel campione. Quando il sistema è in equilibrio, l antigene libero biotinilato viene lavato via e il complesso antigene biotinilato ed anticorpo viene rilevato usando streptavidina alcalinfosfatasi come marker e p-nitrofenilfosfato come substrato. La quantificazione dei campioni viene raggiunta paragonando l attività enzimatica dei campioni rispetto alla curva preparata usando standard noti. 4. AVVERTENZE E PRECAUZIONI 1. Solo per uso diagnostico in-vitro. Solo per uso professionale. 2. Leggere attentamente le istruzioni prima di iniziare il test. Utilizzare il manuale fornito nel kit. Assicurarsi di aver compreso tutte le indicazioni. 3. In caso di danneggiamento del kit contattare IBL o il Vostro fornitore entro 1 settimana dal ricevimento della merce. Non utilizzare i componenti danneggiati ma conservarli per fornire prove del danno assieme al reclamo che inoltrerete al produttore/fornitore. 4. Rispettare lotto e scadenze. Non scambiare o mescolare tra loro reagenti di lotti diversi. Non usare i reagenti scaduti. 5. Attenersi alle Buone Pratiche di Laboratorio e alle direttive di sicurezza. Indossare camici, guanti in lattice e occhiali protettivi se necessario. 6. Alcuni reagenti del kit contengono sostanze pericolose che potrebbero causare irritazioni a pelle ed occhi. Consultare la sezione MATERIALE FORNITO e le etichette per i dettagli precisi. Schede di sicurezza del prodotto sono disponibili sul sito web IBL o su richiesta specifica ad IBL/fornitore. 7. I reagenti preparati e usati e le sostanze chimiche del kit devono essere trattati come rifiuti pericolosi secondo le normative di sicurezza e la legislazione vigente nel Paese in cui il prodotto viene usato. 8. Il personale delle pulizie dev essere informato dal personale specializzato sui possibili rischi e sulle procedure da adottare. 9. Evitare il contatto con la soluzione stop. Può causare irritazioni e ustioni della pelle. 5. CONSERVAZIONE E STABILITÀ Il kit è spedito e trasportato a temperatura ambiente e deve essere conservato a 2-8 C. Non esporre a luce solare diretta e ad alte temperature. L informazioni relative a conservazione e stabilità di tutti i reagenti e dei campioni sono riportate nel capitolo corrispondente. La piastra microtitrata aperta è stabile fino a scadenza del kit se conservata nel suo involucro ben chiuso riposta a 2 8 C. Version / 6

3 6. PRELIEVO E CONSERVAZIONE DEI CAMPIONI Il rilascio in-vivo di catecolamine e metanefrine è influenzato da diversi cibi e farmaci. Vitamina B, caffè e banane, alfa-metildopa, MAO e COMT inibitori e la somministrazione di tutti i farmaci collegati all ipertensione dovrebbero essere interrotta per almeno 72 ore prima della raccolta del campione dal paziente. Urina È possibile usare campioni freschi e campioni delle 24 ore. Il volume totale delle urine delle 24 ore deve essere raccolto in un unico recipiente con aggiunta di ml di HCl 6 N come conservante. Segnare il volume totale per il calcolo dei risultati. Mescolare e centrifugare i campioni prima di usare nel saggio. Conservazione: -20 C (Aliquote) Non esporre alla luce solare diretta e al calore. Stabilità: 6 mesi Evitare la ripetizione di cicli di congelamento/scongelamento. 7. MATERIALE FORNITO I reagenti forniti con questo kit bastano fino a 96 determinazioni singole o fino a 48 duplicati, risp.con Metanefrina o Normetanefrina. Quantità Simbolo Componente 1 x 12 x 8 MTP 1 x 8 ml ANTISERUM 1 x 8 ml BIOTIN 1 x 400 µl ENZCONJ CONC 1 x 7 x 0.35 ml 1 x 2 x 0.5 ml CAL A-G CONTROL x 2.25 ml ACYLREAG 2 x 50 x HYDRTUB 1 x 20 ml HCL 1 x 50 ml ASSAYBUF CONC 1 x 11 ml INDICATORBUF 2 x 100 ml WASHBUF CONC 1 x 13 ml PNPP SUBS 1 x 15 ml PNPP STOP Micropiastra Strisce separabili. Coniugato con anti-coniglio IgG. (capra, policlonale). Normetanefrina Antisiero Di colore blu. Pronto/a all uso. Contiene: Antisiero (coniglio), tampone fosfato, 0.1 % NaN 3. Normetanefrina Biotina, Pronto/a all uso. Contiene: Normetanefrina Biotina, tampone fosfato, BSA, < 0.1 % NaN 3 Coniugato Enzimatico, Concentrato (50x) Contiene: streptavidina fosfatase alcalina, Tampone Tris, 0.01 % NaN 3. Standard A-G 0; 77; 192; 480; 1200; 3000; 7500 µg/l 0; 0.42; 1.05; 2.63; 6.56; 16.4; 41.0 µmol/l Pronto/a all uso. Contiene: Normetanefrina, 0.1 M HCl. Controllo 1+2 Pronto/a all uso. Per le concentrazioni /gli intervalli accettabili vedere le etichette sulle provette. Reagente di Acilazione Pronto/a all uso. Contiene: dimetilformamide. Provette di Idrolizzazione Provette di polistirene monouso (non rivestiti). Provette aggiuntive per idrolizzazione sono disponibili al REF KEZZ661. HCl Pronto/a all uso. 0.1 M HCl. 3 x FOIL Pellicola Adesiva Tampone Saggio, Concentrato (10x) Contiene: tampone fosfato, BSA, 1 % NaN 3. Tampone Indicatore Di colore viola. Pronto/a all uso. Contiene: Tampone Tris, rosso fenolo (il colore cambia a ph < 7.5). Tampone Lavaggio, Concentrato (10x) Contiene: Tampone Tris, HCl, Tween, 0.2 % NaN 3. Soluzione Substrato PNPP Pronto/a all uso. Contiene: p-nitrofenil fosfato (PNPP). Soluzione Stop PNPP Pronto/a all uso. Contiene: 1 M NaOH, 0.25 M EDTA. Version / 6

4 8. MATERIALI NECESSARI MA NON FORNITI 1. Micropipette (Multipette Eppendorf o similari, < 3 % CV). Volumi: 10; 50; 100; 1000 µl 2. Provette di vetro monouso (12 x 75 mm) 3. Agitatore orbitale ( rpm) (p.e. EAS 2/4, SLT) 4. Vortex mixer 5. Bagno termostatato ad acqua, 90 C, 37 C 6. Micropipetta 8-Canali con contenitori per reagenti 7. Spruzzetta per lavaggi, lavatore per micropiastre automatico o semi automatico 8. Lettore per micropiastre in grado di leggere ad assorbanza di 405 nm (lunghezza d onda di riferimento nm) 9. Acqua bidistillata o deionizzata 10. Carta assorbente, puntali per pipette e timer 9. NOTE PER LA PROCEDURA 1. Qualsiasi manipolazione impropria dei campioni o modifica alla procedura può compromettere i risultati. Rispettare rigorosamente i volumi, i tempi e le temperature di incubazione e i passaggi di pretrattamento dei campioni indicati in metodica. Utilizzare pipette calibrate. 2. Una volta iniziato il test completare tutti i passaggi senza interruzioni. Assicurarsi che tutti i reagenti siano stati precedentemente preparati in tempo utile. Far raggiungere la temperatura ambiente ai campioni e ai componenti del kit (18-25 C) e mescolare delicatamente ciascun reattivo liquido e campione prima dell uso. Non creare schiuma durante il mescolamento. 3. Evitare la contaminazione di reagenti, pipette, pozzetti o provette. Usare puntali di plastica nuovi per ogni reagente, standard e campione. Non scambiare i tappi tra loro. Tappare sempre i flaconi non utilizzati. Non riutilizzare pozzetti/provette o reagenti. 4. Si consiglia di saggiare i campioni in doppio per poter identificare eventuali errori di pipettamento. 5. Usare uno schema di pipettamento per realizzare un appropriata distribuzione sulla piastra. 6. Il tempo di incubazione influisce sui risultati. Tutti i pozzetti dovrebbero essere dispensati nello stesso ordine e sequenza temporale. Si raccomanda una pipetta multicanale a 8 canali per pipettare le soluzioni in tutti i pozzetti. 7. Il lavaggio della micropiastra è importante. Pozzetti lavati in modo inappropriato possono portare a risultati erronei. Si raccomanda una pipetta multicanale o un lavatore automatico per piastre. Non far asciugare i pozzetti tra le varie incubazioni. Non graffiare i pozzetti rivestiti durante risciacqui e aspirazioni. Risciacquare e versare i reagenti con cura. Durante i risciacqui assicurarsi che i pozzetti siano ben riempiti con la soluzione di lavaggio e che non ci siano residui nei pozzetti. 8. L umidità influisce sui pozzetti/tubi rivestiti. Non aprire l involucro finché non ha raggiunto la temperatura ambiente. Riporre immediatamente i tubi/pozzetti non utilizzati nell involucro con il disseccante. 10. ISTRUZIONI PRE-TEST Per la versione manuale ed automatizzata Il contenuto del kit per 96 determinazioni può essere diviso per 3 esecuzioni separate. I volumi indicati di seguito si riferiscono a un'esecuzione con 4 strisce (32 determinazioni). Il numero degli standard può essere ridotto da 7 a sei eliminando lo standard G. In questo caso la portata di misurazione si riduce a 3000 µg/l. Se si usa un numero elevato di strips è necessario cambiare i volumi in misura corrispondente. Version / 6

5 10.1. Preparazione di componenti liofilizzati o concentrati Non mischiare il Coniugato Enzimatico di Metanefrine e Normetanefrine in caso si usi la Metanefrina ELISA in parallelo. Diluire / Componente Diluente Rapporto Note Conservazione Stabilità dissolvere 15 ml ASSAYBUF CONC fino a acqua bidist. 1: C 2 settimane 150 ml fino a 50 ml WASHBUF CONC acqua bidist. 1: C 4 settimane 500 ml 120 µl ENZCONJ CONC con 6 ml Soluzione Tampone diluita 1:51 Preparare freschi ed utilizzare solo una volta C Idrolizzazione dei Campioni di Urina, Standard e Controlli per la Normetanefrina totale (in Fiale di Idrolizzazione) Il processo d idrolizzazione è necessario per la determinazione di normetanefrina totale e metanefrina totale. L'idrolizzazione non è richiesta quando di testano normetanefrina e metanefrina libere. Campioni sospettati di contenere concentrazioni maggiori dello standard più elevato vanno diluiti con 0.1 M HCl prima del processo d idrolizzazione Preparazione completa dei campioni nelle provette d idrolizzazione 1. Pipettare 10 µl di Standard, Controlli e campioni di urina nelle provette d idrolizzazione rispettivamente etichettati. 2. Pipettare 40 µl di 0.1 M HCl in ogni provetta. 3. Chiudere le provette. Idrolizzare per 1 h a 90 C (controllare la temperatura con un termometro). Dopo è possibile ridurre la temperatura. Mescolare sul Vortex mixer. 4. Pipettare 100 µl di Tampone Indicatore in ogni provetta. Mescolare sul Vortex mixer. 5. Pipettare 20 µl di Reagente di Acilazione in ogni provetta. Agitare ogni provetta nel Vortex immediatamente dopo aver pipettato. Assicurarsi che l aggiunta del reagente di acilazione nel contenuto delle provette sia completa. 6. Chiudere le provette. Incubare per 15 min a TA (18-25 C). 7. Pipettare 1 ml di Tampone Saggio diluito in ogni provetta. Mescolare sul Vortex mixer. 11. PROCEDURA DEL TEST Per la versione manuale ed automatizzata 1. Pipettare 50 µl di Standard acilato, Controllo acilato e campione del paziente acilato nei rispettivi pozzetti della Piastra microtiter. 2. Pipettare 50 µl di Biotin Normetanefrina in ogni pozzetto. 3. Pipettare 50 µl di Antisiero Normetanefrina in ogni pozzetto. 4. Coprire la piastra con pellicola adesiva. Agitare delicatamente la piastra. Incubare 1 h a TA (18-25 C) su un oscillatore orbitale (500 rpm). 5. Rimuovere la pellicola adesiva. Eliminare la soluzione d incubazione. Lavare la piastra 6 volte con 250 µl di Tampone Lavaggio diluito. Rimuovere l eccesso di soluzione picchiettando la piastra capovolta su una salvietta di carta. 6. Pipettare in ogni pozzetto 150 µl di Coniugato Enzimatico preparato sul momento. 7. Coprire la piastra con una nuova pellicola adesiva. Incubare 30 min a TA (18-25 C) su un oscillatore orbitale (500 rpm). 8. Rimuovere la pellicola adesiva. Eliminare la soluzione d incubazione. Lavare la piastra 6 volte con 250 µl di Tampone Lavaggio diluito (3 x manuale). Rimuovere l eccesso di soluzione picchiettando la piastra capovolta su una salvietta di carta. 9. Per aggiungere le Soluzioni Substrato e Stop usare, possibilmente, una micropipetta 8-canali. Pipettare con intervalli di tempo costanti per le Soluzioni Stop e Substrato. Usare uno spostamento positivo ed evitare la formazione di bolle d aria. 5 ore Version / 6

6 10. Pipettare in ogni pozzetto 100 µl di Soluzione Substrato PNPP. 11. Incubare 20 min a TA (18-25 C) su un oscillatore orbitale (500 rpm). 12. Fermare la reazione substrato aggiungendo 100 µl di Soluzione Stop PNPP in ogni pozzetto. Mescolare delicatamente il contenuto agitando leggermente la piastra. 13. Misurare la densità ottica con un fotometro a 405 nm (Lunghezza d onda di riferimento: nm) entro 60 min dopo aver pipettato la Soluzione Stop. 12. CONTROLLO DI QUALITA I risultati del test sono validi solo se il test è stato eseguito seguendo le istruzioni per l uso. L utente deve inoltre attenersi rigorosamente ai principi della BPL (Buona Pratica di Laboratorio) o a norme equivalenti. Gli utenti e il laboratorio devono avere un sistema di formulazione della diagnosi conforme alle Buone Pratiche di Laboratorio. Tutti i controlli devono risultare compresi entro gli intervalli accettabili indicati sulle etichette e il Certificato QC. Se i criteri non sono soddisfatti il test non è valido e dovrebbe essere ripetuto. Ogni laboratorio dovrebbe usare campioni noti come ulteriori controlli. Si consiglia la partecipazione a programmi di controllo qualità periodici. In caso di deviazioni devono essere forniti i seguenti dati: Scadenza dei reagenti (preparati), condizioni di conservazione, pipette, strumenti, condizioni d incubazione e metodi di lavaggio. Annotazioni per i partecipanti ai programmi per la valutazione del controllo di qualità IBL prende parte regolarmente a programmi per la valutazione del controllo di qualità con il saggio immunologico della normetanefrina. In accordo con gli organizzatori dei programmi QC, IBL usa normetanefrina racemica (+/-) per fissare i suoi campioni e non la forma biologicamente attiva della normetanefrina. Di conseguenza, quando si misurano i campioni fissati ad alte concentrazioni, con il saggio immunologico per la normetanefrina il cliente avrà dei risultati di circa il 30-40% più bassi in confronto all HPLC. Se gli organizzatori usano i campioni nativi dei pazienti con elevate concentrazioni di normetanefrina, questo problema non si presenterà. La ragione di ciò è che l anticorpo usato nel kit riconosce la forma di normetanefrina attiva biologicamente. Quindi per l interpretazione dei risultati per favore controllare la preparazione dei campioni usata nel programma QC. 13. CALCOLO DEI RISULTATI La DO ottenute per gli standard (asse y, lineare) sono messe in grafico rispetto alla loro concentrazione (asse x, logaritmico) sia su carta per grafico semilogaritmico che con metodo automatico. Buoni risultati si ottengono con grafici cubic spline, 4 Parametri Logistica o Logit-Log. Per il calcolo della curva standard utilizzare ogni segnale degli standard (omettere ovviamente i valori dei duplicati molto al di fuori dei risultati attesi e impiegare il valore singolo più plausibile). La concentrazione dei campioni può essere ricavata dalla curva standard. In caso di campioni diluiti i valori devono essere moltiplicati per il corrispondente fattore di diluizione. I campioni con concentrazioni superiori al più alto degli standards devono essere diluiti come descritto nel paragrafo ISTRUZIONI PRE-TEST e ritestati. Calcolare l escrezione a 24 ore per ciascun campione: µg/24 h = µg/l x L/24 h Conversione: 1 ng/ml = 1 µg/l Normetanefrina (µg/l) x 5.46 x 10-3 = µmol/l Version / 6

7 Tipica Curva di Calibrazione (Esempio. Non usare per il calcolo!) Standard Normetanefrina (µg/l) DO Media DO/DO max (%) A B C D E F G OD 405 nm 2,500 2,000 1,500 1,000 0,500 0, Normetanephrine (µg/l) 14. VALORI ATTESI I soli risultati non dovrebbero essere l unica motivazione alla base di una scelta terapeutica. Devono essere correlati ad altre osservazioni cliniche e test diagnostici. Soggetti apparentemente sani mostrano i seguenti valori: Media: 230 µg/giorni Intervallo: µg/giorni (95 % percentile) Si consiglia ad ogni laboratorio di calcolare i propri valori di riferimento. 15. LIMITI DELLA PROCEDURA La raccolta e conservazione dei campioni ha influenza significativa sui risultati del test. Vedere la sezione PRELIEVO E CONSERVAZIONE DEI CAMPIONI per maggiori dettagli. Per le reazioni crociate vedere la sezione PERFORMANCE. 16. PERFORMANCE Specificità Analitica (Reattività Crociate) Sostanza Reattività Crociate (%) Metanefrina 0.02 Noradrenalina 0.12 Acido caffeico 0.00 Sensibilità Analitica (Limite di Rilevazione) Precisione Intervallo (µg/l) CV (%) Intra-Saggio Inter-Saggio µg/l Media (Zero-Standard) - 2SD Cross-reattività di altre sostanze esaminate < 0.05 % Linearità Intervallo (µg/l) Diluizioni Seriali fino a Intervallo (%) : Recupero Media (%) Intervallo (%) % Recupero dopo i picchi Metodo di Paragone verso GCMS GCMS = 1.14 x Test IBL r = 0.94; n = 47 Manuale di comparazione del metodo manuale/automatizzato Manual version = Triturus r = 0.99; n = RIFERIMENTI BIBLIOGRAFICI SUL PRODOTTO 1. Creces J., Appleton Ch.: Catecholamines and their Metabolites: Evaluation of a commercial ELISA. Clin. Biochem., QML Pathology, Brisbane QLD (2004) 2. Wassell J et al. Freedom from drug interference in new immunoassays for urinary catecholamines and metanephrines. Clin Chem 45: (1999) Address: Wassell Julie, Wythenshawe hospital, Manchester, UK. 3. Wolthers BG, Kema IP, Volmer M, Wesemann R, Westermann J and Manz B. Evaluation of urinary metanephrine and normetanephrine enzyme immunoassay (ELISA) kits by comparison with isotope dilution mass spectrometry. Clin. Chem., 43: (1997). Address: Bert G. Wolthers, Central Laboratory for Clinical Chemistry, University Hospital, P.O. Box , 9700 RB Groningen, The Netherlands Version / 6

8 Symbols / Symbole / Symbôles / Símbolos / Símbolos / Σύµβολα REF LOT Cat.-No.: / Kat.-Nr.: / No.- Cat.: / Cat.-No.: / N.º Cat.: / N. Cat.: / Αριθµός-Κατ.: Lot-No.: / Chargen-Bez.: / No. Lot: / Lot-No.: / Lote N.º: / Lotto n.: / Αριθµός -Παραγωγή: Use by: / Verwendbar bis: / Utiliser à: / Usado por: / Usar até: / Da utilizzare entro: / Χρησιµοποιείται από: No. of Tests: / Kitgröße: / Nb. de Tests: / No. de Determ.: / N.º de Testes: / Quantità dei tests: / Αριθµός εξετάσεων: CONC Concentrate / Konzentrat / Concentré / Concentrar / Concentrado / Concentrato / Συµπύκνωµα LYO IVD Lyophilized / Lyophilisat / Lyophilisé / Liofilizado / Liofilizado / Liofilizzato / Λυοφιλιασµένο In Vitro Diagnostic Medical Device. / In-vitro-Diagnostikum. / Appareil Médical pour Diagnostics In Vitro. / Dispositivo Médico para Diagnóstico In Vitro. / Equipamento Médico de Diagnóstico In Vitro. / Dispositivo Medico Diagnostico In vitro. / Ιατρική συσκευή για In-Vitro ιάγνωση. Evaluation kit. / Nur für Leistungsbewertungszwecke. / Kit pour évaluation. / Juego de Reactivos para Evaluació. / Kit de avaliação. / Kit di evaluazione. / Κιτ Αξιολόγησης. Read instructions before use. / Arbeitsanleitung lesen. / Lire la fiche technique avant emploi. / Lea las instrucciones antes de usar. / Ler as instruções antes de usar. / Leggere le istruzioni prima dell uso. / ιαβάστε τις οδηγίες πριν την χρήση. Keep away from heat or direct sun light. / Vor Hitze und direkter Sonneneinstrahlung schützen. / Garder à l abri de la chaleur et de toute exposition lumineuse. / Manténgase alejado del calor o la luz solar directa. / Manter longe do calor ou luz solar directa. / Non esporre ai raggi solari. / Να φυλάσσεται µακριά από θερµότητα και άµεση επαφή µε το φως του ηλίου. Store at: / Lagern bei: / Stocker à: / Almacene a: / Armazenar a: / Conservare a: / Αποθήκευση στους: Manufacturer: / Hersteller: / Fabricant: / Productor: / Fabricante: / Fabbricante: / Παραγωγός: Caution! / Vorsicht! / Attention! / Precaución! / Cuidado! / Attenzione! / Προσοχή! Symbols of the kit components see MATERIALS SUPPLIED. Die Symbole der Komponenten sind im Kapitel KOMPONENTEN DES KITS beschrieben. Voir MATERIEL FOURNI pour les symbôles des composants du kit. Símbolos de los componentes del juego de reactivos, vea MATERIALES SUMINISTRADOS. Para símbolos dos componentes do kit ver MATERIAIS FORNECIDOS. Per i simboli dei componenti del kit si veda COMPONENTI DEL KIT. Για τα σύµβολα των συστατικών του κιτ συµβουλευτείτε το ΠΑΡΕΧΟΜΕΝΑ ΥΛΙΚΑ. IBL AFFILIATES WORLDWIDE IBL International GmbH Flughafenstr. 52A, Hamburg, Germany IBL International Corp. 194 Wildcat Road, Toronto, Ontario M3J 2N5, Canada Tel.: + 49 (0) Fax: IBL@IBL-International.com WEB: Tel.: +1 (416) Fax: Sales@IBL-International.com WEB: LIABILITY: Complaints will be accepted in each mode written or vocal. Preferred is that the complaint is accompanied with the test performance and results. Any modification of the test procedure or exchange or mixing of components of different lots could negatively affect the results. These cases invalidate any claim for replacement. Regardless, in the event of any claim, the manufacturer s liability is not to exceed the value of the test kit. Any damage caused to the kit during transportation is not subject to the liability of the manufacturer Symbols Version 3.5 /