TBE virus (FSME) IgG ELISA
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- Antonella Stella
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1 Istruzioni per l Uso TBE virus (FSME) IgG ELISA Test immunoenzimatico per la determinazione degli anticorpi IgG contro il virus della TBE nel siero e nel plasma umano. RE C I B L I N T E R N A T I O N A L G M B H Flughafenstrasse 52a Phone: +49 (0) IBL@IBL-International.com D Hamburg, Germany Fax: +49 (0)
2 1. USO PREVISTO Test immunoenzimatico per la determinazione degli anticorpi IgG contro il virus della TBE nel siero e nel plasma umano. Controllo dello stato immunologico umorale e conferma della sieroconversione dopo vaccinazione ( Gestione della vaccinazione!). Identificazione di infezione da TBE manifesta o latente, in genere con un ulteriore determinazione di IgM anti-tbe. Controllo anticorpale dopo infezione da TBE. Conferma di TBE vs. Borreliosi dopo puntura di zecca. Diagnosi differenziale di altri disordini del sistema nervoso centrale. 2. SOMMARIO E SPIEGAZIONI In Europa, lafsme (encefalite da zecca, denominata TBE) ed il morbo di Lyme (Borreliosi) sono le infezioni da zecca più frequenti. La Borreliosi è molto diffusa, ma la TBE è limitata a speciali regioni endemiche (nel Sud della Germania, Turingia, Austria, Svizzera, Ungheria, Svezia, Repubblica Ceca, Repubblica Slovacca, Croazia, Slovenia oltre che in alcuni regioni della ex Unione Sovietica, etc.). Entrambe le infezioni sono simili per il loro sviluppo, che consiste in due o più fasi. La fase viremica della TBE ha un periodo di incubazione di 3-14 giorni con sintomi di tipo influenzale nella prima fase (1-8 giorni). Dopo un intervallo non febbrile di circa una settimana l infezione può entrare in una seconda fase, caratterizzata da sintomi neurologici di intensità variabile. Questa fase può durare molte settimane. All inizio della seconda fase della malattia, generalmente gli anticorpi IgM anti-tbe divengono rilevabili. I livelli anticorpali raggiungono il loro picco dopo 26 settimane. Possono passare 10 mesi prima che gli anticorpi scendano al di sotto del livello di rilevamento. Gli anticorpi IgG anti-tbe sono rilevabili simultaneamente o alcuni giorni dopo la comparsa degli anticorpi IgM. Infezione significa immunità che quasi sempre dura per tutta la vita. Anche la vaccinazione è in grado di prevenire la malattia. Regolari controlli sierologici servono a stabilire se siano o meno necessarie dosi di richiamo (gestione delle vaccinazioni!). Gli anticorpi specifici anti-tbe contenuti nel liquido cerebrospinale (CSF) possono essere causati da una disfunzione della barriera ematoencefalica prima o durante una risposta immunologica verso gli antigeni della TBE oppure possono essere il risultato di una risposta immunologica locale. Le fluttuazioni nei livelli anticorpali nel CSF possono differire da quelle prevalenti nel siero o nel plasma. 3. PRINCIPIO DEL TEST FSME IgG è un metodo ELISA a due fasi. I pozzetti delle strisce ELISA sono rivestiti con virus TBE inattivato. Campioni di siero diluito o di plasma vengono incubati nei pozzetti delle strisce (incubazione dei campioni). Durante il periodo di incubazione specifici anticorpi verso il virus della TBE si legano alla fase solida. I componenti non specifici vengono eliminati con il lavaggio. La reazione del coniugato avviene durante la seconda fase di incubazione (incubazione del coniugato). Il coniugato perossidasi delle IgG anti-umane agisce come marker per gli anticorpi IgG anti-tbe legati. Il coniugato non legato viene rimosso con una seconda fase di lavaggio. Nella terza fase di incubazione avviene la reazione del substrato. La perossidasi del coniugato ossida il substrato tetrametilbenzidina (TMB) in una sostanza di colore blu. Per interrompere la reazione viene aggiunto acido solforico ed il colore diventa giallo. L intensità del colore è direttamente proporzionale alla concentrazione degli anticorpi IgG anti-tbe. La densità ottica viene misurata ad una lunghezza d onda di 450 nm usando un lettore ELISA. Per mezzo della curva di standard è possibile valutare quantitativamente gli anticorpi IgG anti-tbe. 4. AVVERTENZE E PRECAUZIONI 1. Solo per uso diagnostico in-vitro. Solo per uso professionale. 2. Leggere attentamente le istruzioni prima di iniziare il test. Utilizzare il manuale fornito nel kit. Assicurarsi di aver compreso tutte le indicazioni. 3. In caso di danneggiamento del kit contattare IBL o il Vostro fornitore entro 1 settimana dal ricevimento della merce. Non utilizzare i componenti danneggiati ma conservarli per fornire prove del danno assieme al reclamo che inoltrerete al produttore/fornitore. 4. Rispettare lotto e scadenze. Non scambiare o mescolare tra loro reagenti di lotti diversi. Non usare i reagenti scaduti. 5. Attenersi alle Buone Pratiche di Laboratorio e alle direttive di sicurezza. Indossare camici, guanti in lattice e occhiali protettivi se necessario. 6. Alcuni reagenti del kit contengono sostanze pericolose che potrebbero causare irritazioni a pelle ed occhi. Consultare la sezione MATERIALE FORNITO e le etichette per i dettagli precisi. Schede di sicurezza del prodotto sono disponibili sul sito web IBL o su richiesta specifica ad IBL/fornitore. Version / 6
3 7. I reagenti preparati e usati e le sostanze chimiche del kit devono essere trattati come rifiuti pericolosi secondo le normative di sicurezza e la legislazione vigente nel Paese in cui il prodotto viene usato. 8. Il personale delle pulizie dev essere informato dal personale specializzato sui possibili rischi e sulle procedure da adottare. 9. Evitare il contatto con la soluzione stop. Può causare irritazioni e ustioni della pelle. 10. Tutti i reagenti del kit contenenti siero umano o plasma sono risultati negativi rispetto a HIV I/II, HBsAg e HCV. Si raccomanda tuttavia di trattarli come potenzialmente pericolosi poiché non si può escludere in maniera assoluta la presenza di questi o di altri agenti infettivi. 5. CONSERVAZIONE E STABILITÀ Il kit viene spedito e trasportato a temperatura ambiente e deve essere conservato a 2-8 C. Non esporre a luce solare diretta e ad alte temperature. I reagenti non aperti sono stabili fino alla data di scadenza indicata La piastra microtitrata aperta è stabile fino a scadenza del kit se conservata nel suo involucro ben chiuso riposta a 2 8 C. Le informazioni relative a conservazione e stabilità di tutti i reagenti e dei campioni sono riportate nel capitolo corrispondente. 6. PRELIEVO E CONSERVAZIONE DEI CAMPIONI Siero, Plasma Osservare le classiche precauzioni durante il prelievo venoso. Conservare l integrità del campione di sangue dal momento del prelievo al momento dell esecuzione del test. Non usare campioni emolizzati, itterici o lipemici. I campioni torbidi devono essere centrifugati per rimuovere il materiale particolato al loro interno. Conservazione: 2-8 C -20 C (Aliquote) Non esporre alla luce solare diretta e al calore. Stabilità: 5 giorni 12 mesi Evitare la ripetizione di cicli di congelamento/scongelamento. 7. MATERIALE FORNITO Quantità Simbolo Componente 1 x 12 x 8 MTP 1 x 0.6 ml ENZCONJ CONC 1 x 5 x 0.35 ml CAL x 0.35 ml Control LL Control HL 2 x 75 ml DILBUF 1 x 100 ml WASHBUF CONC 2 x 15 ml TMB SUBS 1 x 15 ml TMB STOP 2 x FOIL Pellicola Adesiva Micropiastra Pronto/a all uso. Strisce separabili. Rivestito con virus TBE inattivato. Coniugato Enzimatico Concentrato Di colore blu. antiumano IgG coniugato a perossidase. CAL 1-5 Concentrato Contiene: Siero umano, stabilizzatori, conservativos. Le concentrazioni sono lotto-specifiche come indicato sulle etichette del flacone. Control LL+HL Concentrato Controllo Positivo Siero, LL, Low Level, HL, High Level. Contiene: Siero umano, stabilizzatori, conservativos. Le concentrazioni sono lotto-specifiche come indicato sulle etichette del flacone. Tampone Diluente Pronto/a all uso. Di colore rosso. Contiene: detergenti, % (w/v) Thimerosal, 0.01 M Tris/HCl; ph 7.4. Tampone Lavaggio, Concentrato (10x) Contiene: tampone fosfato. Soluzione Substrato TMB Pronto/a all uso. Contiene: TMB (tetramethylbenzidine). Soluzione Stop TMB Pronto/a all uso. Contiene: 0.5 M H 2SO 4. Version / 6
4 8. MATERIALI NECESSARI MA NON FORNITI 1. Micropipette (Multipette Eppendorf o similari, < 3 % CV). Volumi: 5; 25; 50; 100; 500 µl 2. Vortex mixer 3. Tubi per diluizione dei campioni 4. Agitatore orbitale ( rpm) (p.e. EAS 2/4, SLT) 5. Micropipetta 8-Canali con contenitori per reagenti 6. Spruzzetta per lavaggi, lavatore per micropiastre automatico o semi automatico 7. Lettore per micropiastre in grado di leggere ad assorbanza di 450 nm (lunghezza d onda di riferimento nm) 8. Acqua bidistillata o deionizzata 9. Carta assorbente, puntali per pipette e timer 9. NOTE PER LA PROCEDURA 1. Qualsiasi manipolazione impropria dei campioni o modifica alla procedura può compromettere i risultati. Rispettare rigorosamente i volumi, i tempi e le temperature di incubazione e i passaggi di pretrattamento dei campioni indicati in metodica. Utilizzare pipette calibrate. 2. Una volta iniziato il test completare tutti i passaggi senza interruzioni. Assicurarsi che tutti i reagenti siano stati precedentemente preparati in tempo utile. Far raggiungere la temperatura ambiente ai campioni e ai componenti del kit (18-25 C) e mescolare delicatamente ciascun reattivo liquido e campione prima dell uso. Non creare schiuma durante il mescolamento. 3. Evitare la contaminazione di reagenti, pipette, pozzetti o provette. Usare puntali di plastica nuovi per ogni reagente, standard e campione. Non scambiare i tappi tra loro. Tappare sempre i flaconi non utilizzati. Non riutilizzare pozzetti/provette o reagenti. 4. Si consiglia di saggiare i campioni in doppio per poter identificare eventuali errori di pipettamento. 5. Usare uno schema di pipettamento per realizzare un appropriata distribuzione sulla piastra. 6. Il tempo di incubazione influisce sui risultati. Tutti i pozzetti dovrebbero essere dispensati nello stesso ordine e sequenza temporale. Si raccomanda una pipetta multicanale a 8 canali per pipettare le soluzioni in tutti i pozzetti. 7. Il lavaggio della micropiastra è importante. Pozzetti lavati in modo inappropriato possono portare a risultati erronei. Si raccomanda una pipetta multicanale o un lavatore automatico per piastre. Non far asciugare i pozzetti tra le varie incubazioni. Non graffiare i pozzetti rivestiti durante risciacqui e aspirazioni. Risciacquare e versare i reagenti con cura. Durante i risciacqui assicurarsi che i pozzetti siano ben riempiti con la soluzione di lavaggio e che non ci siano residui nei pozzetti. 8. L umidità influisce sui pozzetti/tubi rivestiti. Non aprire l involucro finché non ha raggiunto la temperatura ambiente. Riporre immediatamente i tubi/pozzetti non utilizzati nell involucro con il disseccante. 10. ISTRUZIONI PRE-TEST Preparazione di componenti concentrati (Esempio per 32 pozzetti) Diluire / dissolvere Componente con Diluente Rapporto Note Conservazione Stabilità 80 µl ENZCONJ CONC 8 ml DILBUF 1:101 Mischiare delicatamente C 1 ora 10 ml WASHBUF CONC 90 ml acqua bidist. 1:10 Mischiare delicatamente. 2-8 C 2 mesi Diluizione dei Standard, Controlli e Campioni da diluire con Rapporto Note CAL 1-5 Control LL Control HL sempre DILBUF 1:101 p.e. 10 µl CAL/Control µl Siero, Plasma sempre DILBUF 1:101 p.e. 10 µl Campione µl CSF sempre DILBUF 1:9 p.e. 50 µl Campione µl Per la determinazione con curva standard calibratori 1-5 e sieri di controllo sono necessari. Campioni con concentrazioni superiori allo standard più alto devono essere ulteriormente diluiti. Version / 6
5 11. PROCEDURA DEL TEST 1. Pipetare 200 µl di Calibratore, Controllo e campione diluito nei respettivi pozzetti della micropiastra. 2. Coprire la piastra con pellicola adesiva. Incubare 1 h a TA (18-25 C). 3. Rimuovere la pellicola adesiva. Eliminare la soluzione d incubazione. Lavare la piastra 3 x con 250 µl di Tampone Lavaggio diluito. Rimuovere l eccesso di soluzione picchiettando la piastra capovolta su una salvietta di carta. 4. Pipettare in ogni pozzetto 200 µl di Coniugato Enzimatico. 5. Coprire la piastra con pellicola adesiva. Incubare 1 h a TA (18-25 C). 6. Rimuovere la pellicola adesiva. Eliminare la soluzione d incubazione. Lavare la piastra 3 x con 250 µl di Tampone Lavaggio diluito. Rimuovere l eccesso di soluzione picchiettando la piastra capovolta su una salvietta di carta. 7. Per aggiungere le Soluzioni Substrato e Stop usare, possibilmente, una micropipetta 8-canali. Pipettare con intervalli di tempo costanti per le Soluzioni Stop e Substrato. Usare uno spostamento positivo ed evitare la formazione di bolle d aria. 8. Pipettare 200 µl di Soluzione Substrato TMB in ogni pozzetto. 9. Incubare 30 min a TA (18-25 C). 10. Fermare la reazione substrato aggiungendo 50 µl di Soluzione Stop TMB in ogni pozzetto. Mescolare delicatamente il contenuto agitando leggermente la piastra. 11. Misurare la densità ottica con un fotometro a 450 nm +/- 10 min (Lunghezza d onda di riferimento: nm) 10 min dopo aver pipettato la Soluzione Stop. 12. CONTROLLO DI QUALITA I risultati del test sono validi solo se il test è stato eseguito seguendo le istruzioni per l uso. L utente deve inoltre attenersi rigorosamente ai principi della BPL (Buona Pratica di Laboratorio) o a norme equivalenti. Gli utenti e il laboratorio devono avere un sistema di formulazione della diagnosi conforme alle Buone Pratiche di Laboratorio. Tutti i controlli devono risultare compresi entro gli intervalli accettabili indicati sulle etichette e il Certificato QC. Se i criteri non sono soddisfatti il test non è valido e dovrebbe essere ripetuto. Ogni laboratorio dovrebbe usare campioni noti come ulteriori controlli. Si consiglia la partecipazione a programmi di controllo qualità periodici. In caso di deviazioni devono essere forniti i seguenti dati: Scadenza dei reagenti (preparati), condizioni di conservazione, pipette, strumenti, condizioni d incubazione e metodi di lavaggio. 13. CALCOLO DEI RISULTATI TRACCIARERE LA CURVA DI STANDARD Use enclosed (linear/linear) evaluation sheet x-axis (log): Concentrazioni in [µg/ml] y-axis (lin): Assorbanza (densità ottica) *VIENNA UNITS (Prof. Ch. Kunz/Vienna) Le DO ottenute per gli standards (asse y, lineare) sono messe in grafico rispetto alla loro concentrazione (asse x, logaritmico) sia su carta per grafico semilogaritmico che con metodo automatico. Buoni risultati si ottengono con grafici cubic spline, 4 Parametri Logistica o Logit-Log (p.e. 4 Parametri equazione 1). Equazione 1: Y = d+(a-d)/(1+(x/c) b ) Per il calcolo della curva standard utilizzare ogni segnale degli standard (omettere ovviamente i valori dei duplicati molto al di fuori dei risultati attesi e impiegare il valore singolo più plausibile). La concentrazione dei campioni può essere ricavata dalla curva standard. I campioni con concentrazioni superiori al più alto degli standards devono essere diluiti come descritto nel paragrafo ISTRUZIONI PRE-TEST e ritestati. Criteri di Evaluazione: Vedere le etichette sulle provette. Version / 6
6 13.2. INTERPRETAZIONE DEL CAMPIONI DI SIERO/PLASMA I campioni con un assorbanza che supera quella del calibratore 5 della curva di standard, devono essere pre-diluiti (1+1) con il tampone per incubazione. Le concentrazioni così ottenute devono essere moltiplicate per il fattore 2. La conversione del plasma citrato in valori di siero si ottiene moltiplicando le concentrazioni registrate per il fattore 1.1. Valutazioni degli anticorpi IgG anti-tbe: < 63 VIEU/mL negativa VIEU/mL borderline > 126 VIEU/mL positiva 14. INTERPRETAZIONE DEI RISULTATI Vaccinazione L avvenuta sieroconversione ( immunizzazione riuscita gestione della immunizzazione ) viene determinata misurando gli anticorpi IgG anti-tbe nei sieri o nel plasma. 1. Anticorpi IgG anti-tbe negativi Nessuna immunizzazione latente prima della vaccinazione. Nessuna sieroconversione dopo la vaccinazione. Questo può essere il caso dopo la prima vaccinazione e, come eccezione, anche dopo la seconda e la terza vaccinazione o dopo la dose di richiamo (risposta nulla o scarsa). Se necessario, completare l immunizzazione di base. Se la vaccinazione è andata o meno a buon fine deve essere stabilito per mezzo di test sierologici. 2. Livello borderline degli anticorpi IgG anti-tbe Questo può essere un caso di sieroconversione. Continuare con l immunizzazione di base o con una dose di richiamo. Ripetere il test sulle IgG anti-tbe entro 2-4 settimane. Questa può essere una reazione non specifica. 3. Anticorpi IgG anti-tbe positivi Questo è un caso di sieroconversione. Controllare i dati storici della vaccinazione e, se necessario, completare l immunizzazione di base o somministrare una dose di richiamo Infezione Per poter confermare un infezione è necessario determinare gli anticorpi IgM anti-tbe. Per assicurare una corretta diagnosi è necessario anche misurare gli anticorpi IgG anti-tbe. Se sono disponibili campioni di CSF, è possibile verificare la presenza sia degli anticorpi IgM anti-tbe che di quelli IgG anti-tbe. Per l interpretazione dei risultati sierologici, deve essere presa in considerazione la storia del paziente (soggiorno in aree boschive, puntura di zecca, vaccinazione recente, etc.). 1. Anticorpi IgM anti-tbe e anticorpi IgG anti-tbe negativi. Con ogni probabilità non vi è infezione con il virus della TBE. In caso di sospetta infezione, ripetere il test entro 7-10 giorni con un nuovo campione di sangue. Un infezione da TBE può essere esclusa o confermata con un alto grado di probabilità. Una diagnosi differenziale per altre infezioni del CNS e la borreliosi, in caso di puntura di zecca, dovrebbe essere presa in considerazione. 2. Anticorpi IgM anti-tbe negativi e anticorpi IgG anti-tbe positivi. Immunizzazione latente oppure l infezione è avvenuta settimane o mesi prima. In caso di sospetta infezione, è necessario effettuare un test per la determinazione delle IgM anti-tbe. E possibile escludere una infezione recente da TBE oppure confermarla con un alto grado di probabilità. 3. Anticorpi IgM anti-tbe positivi e anticorpi IgG anti-tbe negativi. E probabile un infezione da virus della TBE. Dopo una tale infezione gli anticorpi IgM e successivamente quelli IgG compaiono nel plasma. Nella fase iniziale dell infezione la determinazione delle IgG anti-tbe può essere dapprima negativa o raggiungere i livelli borderline. Si raccomanda di ripetere il test per le IgG anti-tbe (siero/plasma) entro 7-10 giorni per rilevare eventuali cambiamenti nelle concentrazioni anticorpali. Version / 6
7 4. Anticorpi IgM anti-tbe e anticorpi IgG anti-tbe positivi. Molto probabilmente si tratta di un caso di infezione da virus della TBE, ammesso che non vi sia stata alcuna vaccinazione. Il paziente mostra i tipici sintomi della TBE ma l intensità può variare. In caso di livelli borderline è necessario effettuare un altro campione di sangue e ripetere il test entro 7-10 giorni. Qualsiasi cambiamento nelle concentrazioni anticorpali deve essere monitorato. Una diagnosi sierologia con CSF è indicata soltanto se i test anticorpali con IgM anti-tbe e IgG anti-tbe con siero / plasma sono positivi. 15. PERFORMANCE Recupero di campioni di siero infettati: la variazione del valore teorico prevista è di 8 %. Per la imprecisione intraserie (n = 6-12) è stato determinato un coefficiente di variazione (CV) < 8 % sulla base delle concentrazioni e < 7 % sulla base della densità ottica. Per l imprecisione intraserie (n = 5) è stato determinato un VK < 17 %. Specificità: 235 pazienti sani senza infezione recente da TBE né immunizzati di recente sono stati testati con lo stesso lotto in misurazioni in doppio. Due pazienti sono stati classificati come falsi positivi. La specificità come frazione di individui senza la malattia risultati negativi al test è stata del 99 %. Sensibilità: 151 pazienti infettati naturalmente sono stati testati con lo stesso lotto in misurazioni in doppio. Un paziente ha dato un risultato falso-negativo. La sensibilità come frazione di pazienti con la malattia risultati positivi al test è stata del 94 %. Stabilire livelli cut-off: Valutando una serie di campioni differenti selezionati a casuale (negativi n = 91, immunizzati n = 68, infettati n = 107) con un analisi stratificata, i valori empirici di cut-off (Prof. Ch. Kunz/Vienna) per gli anticorpi IgG anti-tbe sono stati confrontati con quelli basati sull indice Youden bilanciato [8]. Applicando questa procedura sono stati confermati i valori empirici di 63 VIEU/mL come limite inferiore e 126 VIEU/mL come limite superiore di una zona grigia. La sensibilità o specificità del test fuori dai limiti della zona grigia è stata del 97 o del 99 % [8]. Interferenze: I campioni emolitici e lipemici non interferiscono con il test. Possono essere osservate reazioni crociate degli anticorpi contro altri flaviviridae (es. virus Dengue, virus della febbre gialla, virus del Nilo Occidentale). 16. RIFERIMENTI BIBLIOGRAFICI SUL PRODOTTO 1. Berater FSME-Prophylaxe, IMMUNO GMBH, Heidelberg (1993) Die Frühsommer-Meningoenzephalitis und ihre Immunprophylaxe, IMMUNO GMBH, Heidelberg (1992) 2. Roggendorf, M., Frühsommer-Meningoenze-phalitis Wer soll geimpft werden? Therapiewoche, 40, 1173 (1990) 3. Roggendorf, M. et al., Serological Diagnosis of Acute Tick-Borne Encephalitis by Demonstration of Antibodies of the IgM Class. J. Med. Virol., 7, 41 (1981) 4. Hofmann, H. et al., Rapid Diagnosis of Tick-Borne Encephalitis by Means of Enzyme Linked Immunosorbent Assay, J. Gen. Virol., 42, 505 (1979) 5. Hofmann, H. et al., Immunoglobulins of Tick-Borne Encephalitis in Cerebrospinal Fluid of Men. J. Med. Virol., 4, 241 (1979) 6. Hofmann, H. et al., ELISA for IgM Antibodies against Tick-Borne-Encephalitis Virus: Quantification and Standardization of Results, Zbl. Bakt. I. Orig., 255, 448 (1983) 7. Kießig, S. T. et al., Bestimmung von Schwellenwerten (Cut-off) bei Enzymimmunoassays am Beispiel des FSME ELISA [Problems of Cut-Off Level Determination in Enzyme Immunoassays: The Case of TBE-ELISA], Klin. Lab., 39, 877 (1993) 8. Tick-Borne Encephalitis (TBE) and its Immunprophylaxis, IMMUNO AG, Wien (1997) 9. Togni, G. u. a.: Präanalytik. Schweiz. Med. Forum (2002) Version / 6
8 Symbols / Symbole / Symbôles / Símbolos / Símbolos / Σύμβολα REF LOT CONC LYO IVD Cat.-No.: / Kat.-Nr.: / No.- Cat.: / Cat.-No.: / N.º Cat.: / N. Cat.: / Αριθμός-Κατ.: Lot-No.: / Chargen-Bez.: / No. Lot: / Lot-No.: / Lote N.º: / Lotto n.: / Αριθμός -Παραγωγή: Use by: / Verwendbar bis: / Utiliser à: / Usado por: / Usar até: / Da utilizzare entro: / Χρησιμοποιείται από: No. of Tests: / Kitgröße: / Nb. de Tests: / No. de Determ.: / N.º de Testes: / Quantità dei tests: / Αριθμός εξετάσεων: Concentrate / Konzentrat / Concentré / Concentrar / Concentrado / Concentrato / Συμπύκνωμα Lyophilized / Lyophilisat / Lyophilisé / Liofilizado / Liofilizado / Liofilizzato / Λυοφιλιασμένο In Vitro Diagnostic Medical Device. / In-vitro-Diagnostikum. / Appareil Médical pour Diagnostics In Vitro. / Dispositivo Médico para Diagnóstico In Vitro. / Equipamento Médico de Diagnóstico In Vitro. / Dispositivo Medico Diagnostico In vitro. / Ιατρική συσκευή για In-Vitro ιάγνωση. Evaluation kit. / Nur für Leistungsbewertungszwecke. / Kit pour évaluation. / Juego de Reactivos para Evaluació. / Kit de avaliação. / Kit di evaluazione. / Κιτ Αξιολόγησης. Read instructions before use. / Arbeitsanleitung lesen. / Lire la fiche technique avant emploi. / Lea las instrucciones antes de usar. / Ler as instruções antes de usar. / Leggere le istruzioni prima dell uso. / ιαβάστε τις οδηγίες πριν την χρήση. Keep away from heat or direct sun light. / Vor Hitze und direkter Sonneneinstrahlung schützen. / Garder à l abri de la chaleur et de toute exposition lumineuse. / Manténgase alejado del calor o la luz solar directa. / Manter longe do calor ou luz solar directa. / Non esporre ai raggi solari. / Να φυλάσσεται μακριά από θερμότητα και άμεση επαφή με το φως του ηλίου. Store at: / Lagern bei: / Stocker à: / Almacene a: / Armazenar a: / Conservare a: / Αποθήκευση στους: Manufacturer: / Hersteller: / Fabricant: / Productor: / Fabricante: / Fabbricante: / Παραγωγός: Caution! / Vorsicht! / Attention! / Precaución! / Cuidado! / Attenzione! / Προσοχή! Symbols of the kit components see MATERIALS SUPPLIED. Die Symbole der Komponenten sind im Kapitel KOMPONENTEN DES KITS beschrieben. Voir MATERIEL FOURNI pour les symbôles des composants du kit. Símbolos de los componentes del juego de reactivos, vea MATERIALES SUMINISTRADOS. Para símbolos dos componentes do kit ver MATERIAIS FORNECIDOS. Per i simboli dei componenti del kit si veda COMPONENTI DEL KIT. Για τα σύμβολα των συστατικών του κιτ συμβουλευτείτε το ΠΑΡΕΧΟΜΕΝΑ ΥΛΙΚΑ. COMPLAINTS: Complaints may be submitted initially written or vocal. Subsequently they need to be filed including the test performance and results in writing in case of analytical reasons. WARRANTY: The product is warranted to be free from material defects within the specific shelf life and to comply with product specifications delivered with the product. The product must be used according to the Intended use, all instructions given in the instructions for use and within the product specific shelf life. Any modification of the test procedure or exchange or mixing of components of different lots could negatively affect the results. These cases invalidate any claim for replacement. LIMITATION OF LIABILITY: IN ALL CIRCUMSTANCES THE EXTENT OF MANUFACTURER S LIABILITY IS LIMITED TO THE PURCHASE PRICE OF THE KIT(S) IN QUESTION. IN NO EVENT SHALL MANUFACTURER BE LIABLE FOR ANY INCIDENTAL OR CONSEQUENTIAL DAMAGES, INCLUDING DAMAGES FOR LOST PROFITS, LOST SALES, INJURY TO PERSON OR PROPERTY OR ANY OTHER INCIDENTAL OR CONSEQUENTIAL LOSS. IBL International GmbH Flughafenstr. 52A, Hamburg, Germany Tel.: + 49 (0) Fax: IBL@IBL-International.com WEB: Symbols Version 4.5 /
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