Innovazione in laboratorio: impiego della qpcr per il monitoraggio dei mastitogenicontagiosi

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Gustavo Napoli
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1 Associazione Regionale Allevatori della Lombardia Via Kennedy, 30 Crema CR Tel Dipartimento di Medicina Veterinaria Via Celoria, 10 Milano Mi Innovazione in laboratorio: impiego della qpcr per il monitoraggio dei mastitogenicontagiosi Nicoletta Rizzi -ARAL, Francesca Dell Orco -UniMI

2 Valorizzazione dei campioni dei controlli funzionali Controllo e prevenzione della mastite: utilizzo della tecnica PCR

3 PERCHE LA qpcr? LATTE DI MASSA CON CONSERVANTE 4 PATOGENI IN UN UNICA ANALISI

4 STAPHYLOCOCCUS AUREUS MASTITE qpcr STREPTOCOCCUS AGALACTIE PROTOTHECA MYCOPLASMA BOVIS

5 631 ALLEVAMENTI ALLEVAMENTI DELLE PROVINCIE DI MILANO, VARESE, COMO, PAVIA CIRCA 5 MESI 3 RIPETIZIONI 1841 ANALISI

7 ALTRI VANTAGGI DELLA qpcr TEMPI COSTI

8 BATTERIOLOGICO 3 GIORNI MYCOPLASMA TEMPI MICROBIOLOGIA SU TERRENO SPECIFICO AUREUS AGALACTIE 3 gg. PROTOTECA 2 gg. MYCOPLASMA 10 gg.

9 BATTERIOLOGICO COSTO 7,40 EURO A CAMPIONE MICROBIOLOGIA SU TERRENO SPECIFICO 11,60

10 qpcr LATTE DI MASSA TEMPI POCHE ORE COSTO BASSO

11 Mastit? PREVENT with LOW cost in LOW time

Associazione Regionale Allevatori della Lombardia Via Kennedy, 30 Crema CR www.aral.lom.it info@aral.lom.it Tel. 0373-897011 Dipartimento di Medicina Veterinaria Via Celoria, 10 Milano Mi www.

12 Associazione Regionale Allevatori della Lombardia Via Kennedy, 30 Crema CR Tel Dipartimento di Medicina Veterinaria Via Celoria, 10 Milano Mi Innovazione in laboratorio: impiego della qpcr per il monitoraggio dei mastitogenicontagiosi Nicoletta Rizzi -ARAL, Francesca Dell Orco -UniMI

13 Workflow Estrazione del DNA qpcr Analisi dei risultati Mastite qpcr

14 Estrazione del DNA 1h 45 min 500 µl di latte di massa Kit di Estrazione Mastite qpcr DNA

15 qpcr DNA 52 min Kit Mastite qpcr Strepctococcus agalactiae Staphylococcus aureus Prototheca Mycoplasma bovis

16 qpcr: Principio qpcr si divide in due passaggi: Sonda fluorescente: specifica per ogni patogeno Sonda Sonda Ripetuto per 40 cicli

17 qpcr: Principio

18 qpcr: Cicli Soglia Cicli Soglia Quantità di DNA Quantità DNA Milioni Cicl Soglia (Ct)

19 Analisi dei risultati

20 Analisi dei risultati

21 CAMPIONI POSITIVI Analisi dei risultati

22 Analisi dei risultati Staphylococcus aureus Streptococcus agalactiae

23 Analisi dei risultati Mycoplasma bovis Prototheca

24 Analisi dei risultati Il patogeno non è presente, ma l estrazione è avvenuta correttamente Prototheca ed S. aureus sono presenti nel campione, l estrazione è avvenuta correttamente Target Value range > CFU ++++ Value range CFU +++ Value range CFU ++ Value range<100 CFU + Staphylococcus aureus < Streptpcoccus agalactiae < Prototheca < Mycoplasma bovis <

25 Vantaggi Mastit4E Sistema affidabile e sensibile (da 500 µl di latte di massa); Sistema efficiente; Veloce e preciso; Quantificazione del patogeno target; La possibilità di poter analizzare i campioni diluite con conservanti e congelati.

26 Vantaggi Mastit4E S. aureus è la principale causa di mastite bovina contagiosa; Perché ricercare questi 4 patogeni? S. agalactiae è la causa secondaria di mastite bovina contagiosa; M. bovis è la causa principale di malattie respiratorie nel bovino; secondariamente causa mastite nelle vacche. Prototheca è un alga che si trova principalmente nelle feci e nell ambiente, dannosa a livello di mammella;

27 Mastit? PREVENT with LOW cost in LOW time

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