10 Anniversario Tecnologia UPLC: Basi teoriche e vantaggi applicativi in abbinamento con il Rivelatore di Massa Acquity QDa

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1 10 Anniversario Tecnologia UPLC: Basi teoriche e vantaggi applicativi in abbinamento con il Rivelatore di Massa Acquity QDa Università di Pisa 19 Febbraio 2015 Andrea Perissi Specialista Applicativo, Waters Italy 2015 Waters Corporation 1

2 Waters UPLC System 2015 Waters Corporation 2

3 ...The Benefits of UPLC? Speed Resolution Sensitivity More peak capacity 2015 Waters Corporation 3

4 Band Spreading 2015 Waters Corporation 4

5 Acquity UPLC 2015 Waters Corporation 5

6 The benefit of UPLC in MS 2015 Waters Corporation 6

7 Benefits of UPLC in MS 2015 Waters Corporation 7

8 % % % The benefit of UPLC in MS Fastnet_040310_water068 F Da e4 28 datapoints across spiroxamine peak Fragments = 14 data points Fastnet_040310_water068 F Da e4 MS E = All the masses in ONE injection Fastnet_040310_water068 F Da e4 0 Time Hundreds of Pesticides, <85 seconds 0 Time Precursors = 14 data points 2015 Waters Corporation 8

9 The challenge - matrix complexity & co-contamination Feed extract (neat) background BPI full scan Simultaneously acquired MRM transitions for enniatins B1, A1, A, B Waters Corporation 9

10 the benefits of MS in LC Detector di Massa Complementarietà e Compatibilità con Detector Ottici Maggiori informazioni riducendo la complessità Robustezza e affidabilità del dato analitico Semplicità di utilizzo Barriere Complessità di utilizzo Costi Manutenzione ordinaria Difficile implementabilità nei laboratori 2015 Waters Corporation 10

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12 the benefits of MS in LC Sviluppo metodi Identificazione Miscele complesse Picchi trasparenti Verifica coeluizioni Quantificazione Processi di Sintesi Conferma della massa del prodotto di reazione e delle relative impurezze 2015 Waters Corporation 12

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14 Compatibilità e Complementarietà con tutti i tipi di cromatografia Range di massa Da +/- switching (25 ms): diverse tipologie di analiti all interno dello stesso campione Range dinamico: 4 ordini di grandezza per ottenere un buon dato quantitativo Velocità di scansione Da/s: essenziale per avere un numero elevato di punti per picco 20 Hz FS Da a 10000Da\s, 100 Hz SIR (5 ms dwell, 5 ms interscan) 2015 Waters Corporation 14

15 Easy to Use T =0:Accensione con attivazione automatica del sistema del vuoto T=2min:comunicazione col sistema T=5.5 min: Raggiungimento del vuoto ottimale T =6.5 min: test di tenuta della sorgente T =15 min: Temperatura sorgente e settaggio condizioni iniziali T =22 min: Risoluzione e calibrazione automatica completate Procedura di inizializzazione molto simile a un detector ottico Sorgente disegnata per essere utilizzata con parametri standard Non richiede manutenzione ordinaria, tutte le parti soggette a contaminazione sono parti consumabili 2015 Waters Corporation 15

16 Caratteristiche del Sistema Apertura Cono di Campionamento 0,8 mm Temperatura Desolvatazione 600 C Step Wave 2015 Waters Corporation 16

17 Instrument Performance Frequenza di campionameto in grado di definire un picco cromatografico tipico da UPLC con ampiezza inferiore al secondo. Acquisizioni simultanee in SIR permettono di detrerminare picchi impossibili da risolvere con un detector UV. Riproducibilità valutata su 300 iniezioni ripetute di Sulfadimetossina: RSD% 1,4 calcolato sull area del picco, senza correzione per Standard Interno. Robustezza : 1500 iniezioni di simazina e atrazina in campioni di vino Waters Corporation 17

18 Condizioni Sperimentali 2015 Waters Corporation 18

19 MIX di peptidi ( 3ug on column) con doppia rilevazione TUV & Massa 2015 Waters Corporation 19

20 MIX di peptidi ( 3ug on column) con doppia rilevazione TUV & Massa Analisi dello stato di carica: Detector QDa è in grado di rilevare, grazie alla multicarica, peptidi aventi una range di massa da 900 a 2800 Da E stata risontrata, a seguito di tre iniezioni ripetute, un accuratezza di massa inferiore a 0,2 Da, dato in linea con le specifiche del detector 2015 Waters Corporation 20

21 Picco 1: Impurezza A Picco 2: Impurezza B (MW: m/z) Picco 3: Zipradisone HCl (base libera MW ) Picco 4: Impurezza C Picco 5: Impurezza D 2015 Waters Corporation 21

22 RADAR technology - Simultaneous Full Scan & SIR 2015 Waters Corporation 22

23 Approccio applicativo nello sviluppo di un metodo 2015 Waters Corporation 23

24 Approccio applicativo nello sviluppo di un metodo 2015 Waters Corporation 24

25 Condizioni finali 2015 Waters Corporation 25

26 Analisi dati QDA Empower Waters Corporation 26

27 Grazie per l attenzione 2015 Waters Corporation 27

28 Sensitivity, Speed, Selectivity 50k FWHM 2015 Waters Corporation 28

29 Sensitivity, Speed, Selectivity 2015 Waters Corporation 29

30 TriWave Ion Mobility High Efficiency Ion Mobility Sorts ions by their size shape and charge Does NOT filter ions, everything going in comes out 2015 Waters Corporation 30

31 Increasing analytical perspective Representative analytical measurement Property of molecule rt K D m/z mass dt CCS 2015 Waters Corporation 31

32 What is CCS? Important differentiating characteristic of an ion Chemical Structure (mass, size) 3-dimensional Conformation (shape) Precise Physicochemical Property of an ion 2015 Waters Corporation 32