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2 Metti in ordine le reazioni per i due tipi di test ELISA Indirect ELISA Sandwich ELISA

3 Ricostruisci il test ELISA indiretto sandwich A A A

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5 Cosa può essere successo? Cosa può essere successo? Cosa può essere successo?

6 Storia: in ospedale si presenta un paziente con febbre, nausea, vomito, dolori diffusi. Si sospetta una epatite. Usa il test ELISA per stabilire quale patogeno, tra quelli elencati a destra è il responsabile. L epatite, C e E viene diagnosticata rilevando la presenza degli anticorpi specifici mentre l epatite B e D si rileva attraverso la presenza dell antigeni specifici nel plasma del paziente Controllo positivi Tramissione oro-fecale Tramissione sangue o sessuale Tramissione sangue Plasma del paziente Domande: 1) Quale tipo di epatite ha contratto il paziente 2) Sono stati rilevati gli antigeni o gli anticorpi? 4) Quale tipo di test ELISA è stato utilzzato: indiretto o sandwich? 5) Come potrebbe aver contratto il virus il paziente? Tramissione sangue Tramissione oro-fecale

7 L epatite A ha un decorso generalmente benigno e non cronicizza L epatite C nel 75% degenere in cronica e il 30% dei cronici sviluppa cirrosi in anni L epatite E non cronicizza ma ha un alta % di forme fulminanti e di mortalità (40%) Tramissione oro-fecale Tramissione sangue VACCINAZIONE Vaccino ricombinante contro epatite B copre anche quella D Ci sono anche vaccino contro epatite A e in arrivo contro epatite E Non ci sono vaccini contro epatite C Tramissione oro-fecale

8 L agente eziologico dell epatite B è il virus HBV, appartenente alla famiglia degli Hepadnaviridae, ed è uno dei virus più infettivi al mondo; si trasmette tramite sangue infetto o tramite rapporti sessuali non protetti. I sintomi: l ammalato potrebbe NON presentare sintomi, pur essendo in grado di trasmettere la malattia (portatore sano) - ittero (colorazione giallastra della cute e della mucosa, dovuta ad un aumento della bilirubina nel sangue, - affaticamento, - febbre, - prurito ed eventuali piccole ferite dovute al grattarsi, - nausea e vomito, - dolore - feci chiare, - urine color marsala. - sempre presente è invece l innalzamento delle transaminasi e della bilirubina. L infezione da virus dell epatite B può evolvere in 4 esiti diversi, a seconda delle condizioni immunitarie del paziente: - decorso acuto con completo recupero e acquisizione della immunità dall infezione (89% dei casi), - epatite fulminante con mortalità del 90%: può richiedere il trapianto di fegato (1% dei casi), - infezione cronica (5-10% dei casi); con l insorgenza di cirrosi epatica o di carcinoma epatocellulare primitivo - stato di portatore inattivo (5% dei casi): il virus persiste nel fegato ma non provoca danno epatico

9 Storia: è stato effettuato il test ELISA per rilevare la presenza di anticorpi antihiv nel sangue proveniente da tre donatori (A, B, C). Domande: 1) Quale sangue risulta utile per le trasfusioni? 2) Cosa si rileva nel plasma dei donatori: l antigene o l anticorpo? 3) È meglio ricercare l antigene o l anticorpo? Perchè?

10 APPLICAZIONI Screening del sangue di donatori per evidenziare presenza di virus: HIV-1 e HIV-2 (presenza di anticorpi anti-hiv) Epatite C e B (presenza di anticorpi e antigeni) Misura degli ormoni: HCG per test di gravidanza LH per determinare l ovulazione TSH, T3, T4 per la funzionalità della tiroide Deteminare presenza patogeni Determinare presenza di droghe Determinare presenza di allergeni, tossine, anabolizzanti ecc. nei cibi Determinazione inquinanti Rilevazioni OGM

11 Storia: devi verificare con il test ELISA se le 3 spighe di mais contengono gene Bt e quindi sono OGM. Il gene Bt è ricavato dal Bacillus thurigensis e codifica la proteina Cry tossica per alcuni insetti ma non per i mammiferi. A B C Domande: 1) Quale mais è OGM? 2) Quale molecola hai rilevato con il test ELISA 3) Quale mais è tossico per i mammiferi? 4) Quale mais è tossico per gli insetti?

12 Inventate una storia in cui è necessario l utilizzo del test ELISA e poi preprate delle domande

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15 (animazione Biorad) (animazione test gravidanza)