DOSAGGI REALIZZABILI PER LA DIAGNOSI DI GESTAZIONE. Fisiologia della Riproduzione, Facoltà di Medicina Veterinaria di Perugia

Transcript

1 DOSAGGI REALIZZABILI PER LA DIAGNOSI DI GESTAZIONE Fisiologia della Riproduzione, Facoltà di Medicina Veterinaria di Perugia

2 STORIA - Antichità - Interesse per la diagnosi di gestazione anni prima della nostra era... Egiziani Urina femmine presunte gravide Germinazione dei semi Processo Rapido... Processo Lento... Diagnosi positiva Diagnosi negativa

3 DIAGNOSI PRECOCE GESTAZIONE individuazione inseminazioni infruttuose individuazione casi di infertilità ECOGRAFIA Tecniche di laboratorio: riconoscimento precoce stato gestativo evoluzione stato gestativo fino al parto

4 Dosaggi realizzabili...

5 Piano di lavoro Early Pregnancy Factor Progesterone Estrogeni Gonadotropine Corioniche Ormone Lattogeno Placentare Proteine Specifiche o Associate alla Gestazione Fisiologia della Riproduzione, FMV, Università di Perugia

6 Segnali emessi dal conceptus inizio della gestazione Vacca: più domande che risposte Rilevabili nella circolazione materna? Early Pregnancy Factor

7 Early Pregnancy Factor EPF = Fattore immuno-soppressore Cocchiara et al., 1986 Fattore di crescita Athanasas-Platsis et al., 2000

8 Early Pregnancy Factor - Test ECF TM Informazioni (Web site) - Concepto Diagnostics Rilevazione del % di vacche gestanti tra il 6-20 giorno di gestazione Applicable nel sangue e nel latte Risultati Cordoba et al Sensibilità 86 % Specificità 4 % Precisione 46 % (J Dairy Sci, v. 84, p ) Risultati Gandy et al Rilevazione di manze non gestanti: 44 % tra il 1-3 giorno 56 % tra il 7-9 giorno Risultati : siero o latte (fresco o congelato) (Theriogenology, v. 56, p ) EPF

9 Test EPF ECF TM

10 Piano di lavoro Early Pregnancy Factor - Progesterone - P4 EPF P4

11 Progesterone Ruolo indispensabile per il mantenimento gestazione Alla base dello sviluppo dei primi metodi di diagnosi ormonale (anni 70) Dosaggi nel plasma e nel latte P4

12 Progesterone Tab. I. Interpretazione dei risultati otteni dal dosaggio RIA del P4. Risultati* Campioni Negativo Dubbio Positivo Plasma 0,5 a 1 ng/ml 1 a 2 ng/ml > 2 ng/ml Latte 8 ng/ml 8 a 11 ng/ml > 11 ng/ml Crema di L. < 1 ng/10µl - > 1 ng/10µl *Nei risultati si possono osservare variazioni quantitativei ; sono dovute al genere di tecnica impiegata e da variazioni individuali. Derivaux et Ectors (1980) P4

13 Progesterone DG con dosaggio del P4 (momento del prelievo in rapporto al ciclo estrale) P4

14 Progesterone LIMITI Finestra dei tempi Precisione del dosaggio soglia, dubbi Degradazione possibile da parte dei GR Falsi positivi: alterazioni del ciclo cisti luteali pseudogravidanze, idrometra P4

15 Piano di lavoro Early Pregnancy Factor - Progestérone - Estrogeni - Est EPF P4 Est

16 Estrogeni Sintesi apprezzabile nella donna, topo, suino e giumenta nei ruminanti, sintesi scarsa durante la prima metà della gestazione

17 Estrogeni Ruolo... Favoriscono la vascolarizzazione locale Aumentano la sintesi di proteine Fleet et Heap, 1982 Esercitano effetti immuno-modulatori Effetti amplificati dalla sensibilizzazione preliminare del progesterone Gabrilovac et al., 1988 Medina et Kincade, 1994

18 Estrogeni Caratteristiche Scarsa secrezione di estrogeni da parte della placenta Presenza delle forme libere (estrone e estradiolo 17 ) a dei livelli molto bassi fino al 100 giorno di gestazione ed anche più tardi. (Hirako et al. 2000) Presenza delle forme coniugate (estrone solfato ) rilevabili a partire dal giorno (Takahashi et al. 1997) Est

19 Estrogeni Estrogeni dosaggio buon indicatore vitalità placentare vitalità fetale Concentrazione dell estrone solfato nella vacca con gestazione semplice (- - - ) o multipla (- - -) Dobson et al. (1993) Est

20 Estrogeni Caduta loro concentrazione = disfunzione funzione fetoplacentare Aumento = segno di «benessere» fetale Segnale «tardivo»: permette di seguire l ultima parte della gravidanza

21 Estrogeni nelle varie specie

22 Piano di lavoro Early Pregnancy Factor - Progesterone - Estrogeni - Gonadotropine Corioniche - GC EPF P4 Est GC

23 Gonadotropine Corioniche Contrariamente ai primati (hcg) e agli equidi (ecg e dcg) Non espresse nella placenta dei ruminanti Possibile espressione della sotto-unità beta Assenza d espressione della sotto-unità alfa! Nilson et al GC

24 Nella donna hcg: human Chorionic Gonadotropin hpl: human Placental Lactogen o hcs: human Chorionic Somatomammotropin SP: Schwangerschafts protéines Steroidi: Progesterone, pregnandiolo, estrogeni

25 Definizione dell hcg Glicoproteina costituita da 2 sub-unità e legate da un legame non covalente

26 Struttura dell hcg Molto vicina a quella del LH Struttura primaria, secondaria e terziaria vicina a quella del LH umano hcg consta di 30 amminoacidi in più della sub-unità del LH Physiologie de la Reproduction, FMV, ULg

27 Struttura tridimensionale dell hcg. Sub-unià in rosso, sub-unità in blu, ponti bisolfuro in nero Structure, :

28 Ruolo del hcg Segnale embrionale Mantenimento del corpo luteo Trasformazione del corpo luteo ciclico in corpo luteo gravidico Stimola la secrezione di progesterone

29 hcg La secrezione di un ormone gonadotropo dal trofoblasto e poi dalla placenta spiega la trasformazione del corpo luteo gravidico nei primati (hcg, mcg, ) hcg: human Chorionic Gonadotropin mcg: monkey Chorionic Gonadotropin

30 Concentrazione del hcg Rilevabile dal 9 giorno dopo il concepimento Si eleva considerevolmente nel 1 trimestre della gestazione Resta alto fino al parto

31 Profilo plasmatico del hcg

32 Negli equini ecg: equine Chorionic Gonadotropin o PMSG: Pregnant Mare Serum Gonadotropin PL: non rilevabile SP: non descritta Steroidi: derivati degli estrogeni

33 Definizione dell ecg/pmsg Glicoproteina costituita da 2 sub-unità e legate da un legame non covalente L ecg contiene il 47% di carbone idrato ed il 13% di acido sialico Non si trova nell urina, ma nel sangue materno (contrariamente all hcg )

34 Struttura dell ecg Molto simile a quella del LH equino Sequenza amminoacidica identica Differente glicosilazione

35 Concentrazione dell ecg Rilevabile dopo il 38 giorno di gestazione Aumenta considerabilmente tra il 40 ed il 120 giorno della gestazione Scompare dopo il 150 giorno di gestazione

36 Ruolo dell ecg: interviene dopo il 38 giorno di gestazione Provoca il sopraggiungere di nuove ovulazioni Provoca la formazione di nuovi corpi lutei Stimola la secrezione di progesterone da parte di «C.L. accessori» fino al momento in cui comincia la sintesi placentare

37

38 Ormone Corionico Gonadotropo Nella donna e nella cavalla, le gonadotropine corioniche (placenta) sono costituite da 2 sub-unità ( e ) come le gonatropine FSH e LH! Nei ruminanti Nilson et al. (1991) hanno mostrato l assenza dell espressione del gene codificante per la sub-unità alfa nella placenta dei ruminanti

39 Gonadotropine corioniche Contrariamente ai primati (hcg) e agli equidi (ecg) Non si esprime nella placenta dei ruminanti Possibile espressione della sub-unità beta Assenza d espressione della sub-unità alfa! Nilson et al Physiologie de la Reproduction, FMV, ULg

40 Piano di lavoro Early Pregnancy Factor - Progesterone - Estrogeni - Gonadotropine Corioniche - Ormone Lattogeno Placentare - PL EPF P4 Est GC PL

41 Ormone Lattogeno Placentare Storia... Osservazione iniziale di Selye et al., 1933 Fino ad oggi, sono state ritrovate nel topo, nel ratto, nella donna, nella capra, nella pecora e nella vacca... e non è stata ritrovata nella giumenta, nella scrofa, né nei carnivori (cagna, gatta)

42 Trophoblast Wooding et Beckers (1987) 42

43 ATTIVITA BIOLOGICA -Mammogenesis e Lattogenesis - Fetal growth activity - Crescita lobulo-alveolare della ghiandola mammaria e per la produzione del latte: pecore e capre - Crescita fetale: bovina. 43

44 Ormone Lattogeno Placentare Profili plasmatici del bpl nella madre (- - -) e nel feto (- - -) PL

45 Ormone Lattogeno Placentare EPF IFN P4 Lattogeno Placentare Variazione individuale dell ormone lattogeno placentare: tra il g PL

46 Ormone Lattogeno Placentare gg di gestazione La concentrazione aumenta gradualmente per avere un picco nell ultimo terzo della gestazione La concentrazione decresce progressivamente nelle 36 h che precedono il parto

47 Piano di lavoro Early Pregnancy Factor - Progesterone - Estrogeni - Gonadotropine Corioniche - Ormone Lattogeno Placentare - Proteine Specifiche o Associate alla Gestazione - PAG EPF P4 Est GC PL PAG

48 CHE COS E L ECOGRAFIA? E una metodica che permette di ottenere immagini degli organi interni utilizzando onde ultrasonore ad altra frequenza Gli echi derivanti dalle onde sono registrati e visualizzati su monitor in tempo reale

49 ECO SI Ecografia addominale (fegato, colecisti, vie biliari, milza, pancreas, reni e vescica. Ecografia pelvica (utero, ovaie, vescica) Ecografia superficiale (tiroide, muscoli, tendini, mammella, articolazioni)

50 ECO NO OSSO ARIA Hanno impedenze acustiche da riflettere tutti gli ultrasuoni e generare una superficie bianca Tale situazione impedirà lo studio di ciò che è al loro interno o dietro di loro