Tesi di Laurea. FACOLTÀ DI MEDICINA E CHIRURGIA Corso di laurea in Tecniche di Laboratorio Biomedico

Dimensione: px

Iniziare la visualizzazioe della pagina:

Download "Tesi di Laurea. FACOLTÀ DI MEDICINA E CHIRURGIA Corso di laurea in Tecniche di Laboratorio Biomedico"

Dionisia Mazza
8 anni fa
Visualizzazioni

Tesi di Laurea FACOLTÀ DI MEDICINA E CHIRURGIA Corso di laurea in Tecniche di Laboratorio Biomedico IL CONTROLLO QUALITÀ NELLA PRODUZIONE FARMACEUTICA INDUSTRIALE: APPLICAZIONE DI

1 Tesi di Laurea FACOLTÀ DI MEDICINA E CHIRURGIA Corso di laurea in Tecniche di Laboratorio Biomedico IL CONTROLLO QUALITÀ NELLA PRODUZIONE FARMACEUTICA INDUSTRIALE: APPLICAZIONE DI UNA METODICA PER L ANALISI DEI PROBIOTICI VALIDATA DALL ISTITUTO SUPERIORE DI SANITÀ Laureando: Luca Michelutti Relatore: Dott. Renzo Peressoni Correlatore: Dott. Franco Del Bianco

UNA METODICA PER L ANALISI DEI PROBIOTICI VALIDATA DALL ISTITUTO SUPERIORE DI SANITÀ

2 CENNI STORICI 1892 Döderlein propone l uso di lattobacilli nelle infezioni vaginali 1900 Henry Tissier isola bifidobatteri da feci di neonati allattati 1907 Metchnikoff teorizza l uso di batteri utili nel rimpiazzo di batteri dannosi nell intestino umano 1917 Nissle tratta salmonellosi e shigellosi con un ceppo di Escherichia coli non patogeno Ad oggi numerosi sono i microrganismi batterici e non definiti probiotici, e il numero è continuamente in crescita

batteri dannosi nell intestino umano 1917 Nissle tratta salmonellosi e shigellosi con un ceppo di Escherichia coli

3 DEFINIZIONE Microrganismi vitali che, somministrati in quantità adeguate, apportano benefici alla salute dell ospite (FAO/WHO, 2002)

4 IL MICROBIOTA INTESTINALE L apparato gastroenterico è colonizzato da cellule batteriche, con oltre 500 specie complessivamente Oltre a batteri sono presenti anche archeabatteri, eucarioti e virus Fornisce diversi contributi: Attività metaboliche Funzioni trofiche Funzione protettiva

a batteri sono presenti anche archeabatteri, eucarioti e virus Fornisce

5 MICRORGANISMI PROBIOTICI Un probiotico deve essere: Sicuro per l uomo Vitale ed efficace nell intestino umano Conferire benefìci fisiologici

7 ALCUNI MICRORGANISMI PROBIOTICI Bifidobacterium spp Sono microrganismi Gram-positivi, a morfologia bastoncellare, anaerobi. Si trovano in diverse nicchie ecologiche tra le quali vi è l intestino umano.

8 Lactobacillus spp Sono microrganismi Gram-positivi, anaerobi facoltativi o microaerofili, a morfologia prevalentemente bastoncellare. Sono presenti anche nell uomo, soprattutto nel tratto gastrointestinale e nel tratto genitale femminile. Si suddividono in base alle loro caratteristiche in: omofermentanti (L. acidophilus), eterofermentanti facoltativi (L. paracasei) ed eterofermentanti obbligati (L. reuteri)

Sono presenti anche nell uomo, soprattutto nel tratto gastrointestinale e nel tratto genitale

9 Bacillus coagulans È un microrganismo Gram-positivo, anaerobio tollerante, sporigeno. È una specie ubiquitaria in natura

10 IL RAPPORTO ISTISAN 08/36

11 MATERIALI E METODO DI LAVORO Prelievo e campionamento Identificazione genetica Conta batterica probiotica Conferma genetica e conta differenziale Controllo microbiologico Carica totale, carica di lieviti e muffe, carica di enterobatteri. Presenza di Staphylococcus aureus, Escherichia coli e Salmonella.

Controllo microbiologico Carica totale, carica di lieviti e muffe, carica

12 RISULTATI Reagenti di PCR Concentrazione finale H2O distillata sterile ---- Buffer 10X 1 X MgCl2 25 mm 1,5 mm dntps 2,5 mm 0,2 mm Primer senso 100 µm 0,5 mm Primer antisenso 100 µm 0,5 mm DNA Da 1 µl a 5 µl Taq DNA polymerase 5U/µL 1,25 U Volume finale di 50 µl

mm Primer senso 100 µm 0,5 mm Primer antisenso 100 µm 0,5 mm DNA

13 Specie Primer Ciclo iniziale Denaturazione Annealing Estensione Cicli totali Ciclo finale B. coagulans Spo3 + Spo4 95 C x 5 min 95 C x 1 min 65 C x 1 min 72 C x 1 min C x 10 min Bifidobacterium spp BifidF + BifidR 96 C x 2 min 94 C x 30 sec 63 C x 40 sec 72 C x 30 sec C x 5 min L. acidophilus Idlc4F + Idl22R 94 C x 2 min 94 C x 20 sec 51 C x 40 sec 68 C x 30 sec C x 7 min L. paracasei W2 + Y2 94 C x 3 min 94 C x 45 sec 50 C x 45 sec 72 C x 1 min C x 5 min

BifidR 96 C x 2 min 94 C x 30 sec 63 C x 40 sec 72 C x 30 sec 35 72 C x 5 min L.

15 RISULTATI Microrganismo Terreno di coltura Bifidobacterium spp. Lactobacillus acidophilus Lactobacillus paracasei Condizioni di incubazione Temperatura di incubazione Tempo di incubazione MRS Anaerobiosi 37 C 72 h HHD Anaerobiosi 37 C 72 h MRS Anaerobiosi 37 C 72 h HHD Anaerobiosi 37 C 72 h MRS Anaerobiosi 37 C 72 h HHD Anaerobiosi 37 C 72 h

Temperatura di incubazione Tempo di incubazione MRS Anaerobiosi 37 C 72 h HHD

17 RISULTATI Microrganismo Bacillus coagulans Terreno di coltura Condizioni di incubazione Temperatura di incubazione Tempo di incubazione TSA Aerobiosi 37 C Almeno 24 h Nutrient Agar Aerobiosi 37 C Almeno 24 h GYE Aerobiosi 37 C Almeno 24 h TSA Aerobiosi 44 C Almeno 24 h Nutrient Agar Aerobiosi 44 C Almeno 24 h GYE Aerobiosi 44 C Almeno 24 h TSA Aerobiosi 50 C Almeno 24 h Nutrient Agar Aerobiosi 50 C Almeno 24 h GYE Aerobiosi 50 C Almeno 24 h

Aerobiosi 37 C Almeno 24 h TSA Aerobiosi 44 C Almeno 24 h Nutrient Agar Aerobiosi 44 C Almeno 24 h GYE

19 RISULTATI Brodo di coltura HHD MRS TSB Specie Bifidobacterium spp. Lactobacillus spp. Lactobacillus spp. Bacillus coagulans

21 CONCLUSIONI Aspetti positivi del metodo Facilità d utilizzo Applicabilità per numerosi prodotti commerciali Limiti del metodo Tempi lunghi di analisi e metodiche superate Protocolli non sempre adatti Assenza di indicazioni per nuove specie probiotiche

Documenti analoghi

Integratori alimentari a base di probiotici: Linee Guida Italiane

Integratori alimentari a base di probiotici: Linee Guida Italiane Alfonsina Fiore DSPVSA Reparto Pericoli Microbiologici Connessi agli Alimenti Istituto Superiore di Sanità Convegno INTEGRATORI ALIMENTARI: