Immunoematologia/Trasfusionale Principi Base

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1 Immunoematologia/Trasfusionale Principi Base

2 Ortho Clinical Diagnostics

3 Introduzione Ortho Clinical Diagnostics - Cenni Storici 3 Nel 1939 viene fondata Ortho Diagnostics Systems Inc. Prima società a produrre reagenti per analisi nel Servizio Trasfusionale. Prima società a sviluppare il reagente in grado di determinare il tipo Rh di un individuo. Si afferma come produttore leader di reagenti/analizzatori per il mercato trasfusionale. Nel 1997 Eastman Kodak Co. viene acquisita da Johnson and Johnson 76 ANNI! Viene fondata Johnson & Johnson Clinical Diagnostics. Multinazionale leader nel mercato del Laboratorio Biomedico. Fusione tra Ortho Diagnostics Inc. e Johnson & Johnson Clinical Diagnostics Nasce Ortho-Clinical Diagnostics. Multinazionale attiva sia nel mercato Trasfusionale che nel mercato del Laboratorio Analisi > Ortho Clinical Diagnostics diventa un azienda indipendente Conta sul supporto del gruppo Carlyle come Venture Capitalist. Focalizzata al 100% nel mercato della diagnostica in vitro.

4 I Gruppi Sanguigni Cenni Introduttivi Generali

5 I Gruppi Sanguigni I Gruppi Sanguigni ABO ed I tipi Rh 5 Scoperti da Karl Landsteiner (medico austriaco) nel 1900 Identifica I primi tre gruppi sanguigni. A B O Nel 1902 viene scoperto il quarto gruppo da due studenti di Landsteiner Viene identificato il gruppo AB. Nel 1939 viene scoperto il sistema dei tipi sanguigni Rh Landsteiner Philip Levine Altri medici e scienziati

6 I Gruppi Sanguigni I Gruppi Sanguigni ABO 6 Ogni individuo ha un gruppo o gruppo sanguigno A B AB O Casi particolari Ai fini dell analisi nel Servizio trasfusionale Gli antigeni (Ag) si trovano sulla superficie degli eritrociti (emazie). Gli anticorpi (Ab) si trovano nella parte liquida non cellulare del sangue (plasma o siero). Gli antigeni possono essere: A e/o B. Nessuno dei due. L anticorpo corrispondente nel Plasma/Siero può essere: Anti-A e/o Anti-B. Nessuno dei due.

7 I Gruppi Sanguigni I Gruppi Sanguigni ABO 7 Anticorpi Naturali o Attesi Se sulle cellule è espresso l antigene A, non può essere presente l Anti-A. Se sulle cellule è espresso l antigene B, non può essere presente l Anti-B. Anti-A, Anti-B sono naturalmente presenti in circolo (Ab attesi). Si sviluppano dopo la nascita ma non da stimolo antigenico eritrocitario.

8 Il Gruppi Sanguigni I Gruppi Sanguigni ABO 8

9 I Gruppi Sanguigni Tipo Sanguigno Rh 9 Il tipo sanguigno Rh viene scoperto 40 anni dopo il sistema dei gruppi ABO Il Dr. Philip Levine entra in Ortho Diagnostics 4 anni dopo la scoperta del La scoperta avviene da parte di Levine e Wiener dopo aver trasfuso sangue di una scimmia Rhesus in un porcellino d india (Rh ). Anche Race e Fisher scoprirono il gruppo sanguigno Rh più o meno contemporaneamente, chiamandolo però D. Ortho Clinical Diagnostics produce un farmaco che impedisce la formazione Il sistema Rh comprende 50 antigeni differenti. dell anticorpo Rh(D). L antigene D viene utilizzato per determinare se un individuo è Rh positivo o negativo. Ortho RhoGAM è un prodotto iniettabile utilizzato per prevenire la formazione dell anticorpo Rh in donne gravide Rh negative che sono o sono state incinte di un feto Rh positivo. Prima della sua scoperta il fattore Rh era la causa principale delle reazioni trasfusionali Oggi nelle trasfusioni si ricerca la compatibilità Rh. Non esistono anticorpi naturali per il sistema Rh Gli anticorpi Anti-D compaiono solo in soggetti Rh(D)- stimolati: da trasfusioni con sangue Rh(D)+ Donne Rh(D)- incinte di un bambino Rh(D)+ che sono state esposte al sangue del bambino sviluppando l anticorpo.

10 I Gruppi Sanguigni D Debole o D u 10 E possibile avere un antigene D debole o Du In alcuni individui è presente quello che viene chiamato antigene D debole. Gli eritrociti di questi soggetti non agglutinano con alcuni reagenti Anti-D. Una teoria sostiene che l individuo eredita una forma comleta dell antigene Rh(D) ma la reazione è debole o assente perchè l antigene è presente in quantità molto inferiore al normale. La seconda teoria (D mosaico) prevede che una o più parti dell antigene D siano mancanti. Entrambe le teorie aiutano a spiegare perchè alcuni soggetti con un D debole sviluppino un anticorpo Anti-D ed altri no. L anticorpo Anti-D creato da individui con D mosaico è ritenuto causa di reazioni trasfusionali ed emoraggie feto/materne. A volte il D debole viene indicato come Du.

11 I Gruppi Sanguigni Frequenze nelle Popolazioni Caucasiche 11 Le percentuali dei gruppi sanguigni rilevate nelle popolazioni caucasiche sono: 38% O POS 34% A POS 9% B POS 7% O NEG 6% A NEG 3% AB POS 2% B NEG 1% AB NEG

12 I Gruppi Sanguigni Genetica dei Gruppi Sanguigni 12 Il gruppo sanguigno è ereditario Ogni individuo è dotato di due geni che determinano il gruppo sanguigno. Ogni genitore contribuisce con uno dei due geni. Il sangue di tipo O dipende dall assenza del gene A e del gene B. Una persona di gruppo A può avere due geni A (AA) oppure un gene A (AO). Un genitore con sangue A (AO) ed un genitore con sangue di tipo B (BO) possono generare figli A (AO), B (BO), O (OO), AB (AB).

13 I Gruppi Sanguigni Altri Sistemi Gruppo Ematici 13 Oltre agli antigeni A, B, Rh(D) svariati altri antigeni possono essere presenti sugli eritrociti umani. I più significativi a livello trasfusionale sono: Antigeni Rh diversi da D (C, E, c, e). Kell (K, k). Duffy (Fy a, Fy b ). Kidd (Jk a, Jk b ). MNS (M, N, S, s). Lewis (Le a, Le b ). L esposizione a questi antigeni (ad esempio durante una trasfusione) può portare alla produzione di anticorpi irregolari rivolti alla distruzione degli antigeni estranei. La ricerca degli anticorpi irregolari è l analisi per la ricerca di anticorpi inattesi. Si tratta di uno dei principali test pretrasfusionali. Se la ricerca di anticorpi è positiva è necessario identificare l anticorpo per garantire trasfusioni sicure. Una volta identificato l anticorpo, sia il sangue del paziente che quello del donatore devono essere analizzati per determinare la presenza o l assenza dell antigene corrispondente.

14 Determinazione del Gruppo Sanguigno Ricerca di Anticorpi (RAI) La Tecnica di Agglutinazione su Colonna (CAT) Il Sistema ORTHO Biovue

15 Introduzione Tecnologia CAT Tecnica di Agglutinazione su Colonna (CAT) - Il sistema Ortho Biovue 15 L immunoematologia è il termine utilizzato per descrivere le analisi effettuate nel Servizio Trasfusionale. Studia le reazioni antigene (Ag) - anticorpo (Ab). Tutte le analisi effettuate nel Servizio Trasfusionale sono basate su reazioni Ag/Ab. Le procedure tradizionali per le analisi immunoematologiche prevedevano l uso di provette ed in seconda battuta di micropiastre. Test di lunga durata. Mancanza di standardizzazione. Soggettività nella lettura ed interpretazione dei risultati. Scarsa flessibilità tra automazione dei test e/o loro utilizzo mediante metodica manuale. La tecnica di agglutinazione su colonna (CAT) risolve gli svantaggi Metodiche rapide. Elevata sensibilità. Oggettività e stabilità dei risultati. Facilmente automatizzabile. Facilente gestibile in metodica manuale.

16 Introduzione Tecnologia CAT Tecnica di Agglutinazione su Colonna (CAT) - Il sistema Ortho Biovue 16 Ortho Biovue si basa sulla tecnologia CAT Facile da utilizzare manualmente, costituisce una base ottimale per l automazione. Offre reazioni di agglutinazione stabili e riproducibili. Ogni cassetta contiene 6 microcolonne. Ogni colonna contiene microsfere di silice. Diluenti e reagenti sono predispensati nelle colonne. E sufficiente aggiungere plasma/siero e/o eritrociti per la determinazione del tipo sanguigno o delle ricerche ed indentificazioni di anticorpi. Il sistema Ortho Biovue consente quindi un notevole risparmio di tempo ed una notevole riduzione dei potenziali errori operativi.

17 Introduzione Tecnologia CAT Tecnica di Agglutinazione su Colonna (CAT) - Il sistema Ortho Biovue 17

18 Introduzione Tecnologia CAT Tecnica di Agglutinazione su Colonna (CAT) - Il sistema Ortho Biovue 18 Solo 7 passaggi! Nessun lavaggio richiesto. Il metodo tradizionale in provetta chiede 21 passaggi.

19 Introduzione Tecnologia CAT Tecnica di Agglutinazione su Colonna (CAT) - Il sistema Ortho Biovue 19 Lettura delle reazioni. 4+: eritrociti formano una fascia solida nella parte superiore della colonna. 3+: le cellule agglutinate si concentrano in prossimità della parte superiore della colona ma è possibile osservare qualche agglutinato al di sotto della fascia superiore. 2+: le cellule agglutinate sono sparse lungo tutta la colonna sia nella parte superiore che in quella inferiore. 1+: le cellule agglutinate si trovano per lo più nella metà inferiore della colonna con qualche eritrocita sul fondo. O (NEG): gli eritrociti formano un precipitato ben definito sul fondo della colonna.

20 Introduzione Tecnologia CAT Tecnica di Agglutinazione su Colonna (CAT) - Il sistema Ortho Biovue 20 Lettura delle reazioni. Pos/Neg (0,5): si forma un precipitato sul fondo con dell agglutinato sopra, ad indicare un antigene o un anticorpo debolmente reattivo. Emolisi: la camera sopra la colonna è rossa e non vi sono agglutinati nella colonna. Questa condizione indica che I pannelli eritrocitari sono stati distrutti dall attivazione del complemento e viene considerata una reazione positiva. Campo misto (mixed field): le cellule agglutinate sono nella parte superiore della colonna con cellule non agglutinate sul fondo, ad indicare una doppia popolazione di eritrociti.

21 Introduzione Tecnologia CAT Tecnica di Agglutinazione su Colonna (CAT) - Il sistema Ortho Biovue 21

22 Determinazione del Gruppo Sanguigno Tecnica di Agglutinazione su Colonna (CAT)

23 Determinazione del Gruppo Sanguigno ABO Il sistema Ortho Biovue - Determinazione del Gruppo Sanguigno Con l analisi dei tipi sanguigno ABO vengono rilevati gli antigeni sugli eritrociti e gli anticorpi nel plasma/siero ematico. La Determinazone Diretta del gruppo analizza la presenza di antigeni sulle emazie. La Determinazione Indiretta del gruppo analizza la presenza di anticorpi nel plasma/siero. 23

24 Determinazione diretta del Gruppo Sanguigno ABO Il sistema Ortho Biovue - Determinazione del Gruppo Sanguigno 24 Nella determinazione diretta del gruppo gli eritrociti del paziente vengono mescolati con due o più reagenti diversi contenenti anticorpi (antisieri = preparato commerciale di anticorpi noti). L Anti-A evidenzia la presenza dell antigene A sulla superficie degli eritrociti del paziente. L Anti-B evidenzia la presenza dell antigene B sulla superficie degli eritrociti del paziente. L Anti-AB contiene anticorpi Anti-A ed Anti-B: evidenzia la presenza degli antigeni A e B ed inoltre evidenzia la presenza di sottogruppi deboli di A. Se un antigene A o B è presente, gli eritrociti formeranno un reticolo di agglutinazione. Se l agglutinazione si verifica solo con il reagente contenente Anti-A il gruppo è A. Se l agglutinazione si verifica solo con il reagente contenente Anti-B il gruppo è B. Se l agglutinazione si verifica solo con il reagente contenente Anti-AB siamo in presenza di un sottogruppo debole di A e/o B. Se l agglutinazione si verifica con i reagenti Anti-A, Anti-B ed Anti-AB il gruppo è di tipo AB. Se non si verifica alcuna agglutinazione con i reagenti Anti-A o Anti-B, il sangue è di tipo O.

25 Determinazione del Gruppo Sanguigno ABO Il sistema Ortho Biovue - Determinazione del Gruppo Sanguigno 25 I reagenti Anti-D predispensati nelle colonne delle ORTHO Biovue sono in grado di rilevare la maggior parte dei campioni di sangue con un D debole Anche la determinazione del tipo Rh viene effettuata mediante una tecnica diretta di determinazione del tipo. Nella determinazione del tipo Rh(D), non esiste una test di conferma indiretta come per l ABO. Gli eritrociti del paziente vengono cimentati con un antisiero Anti-D contenente anticorpi Anti-Rh. L agglutinazione rappresenta un risultato positivo del test (Rh(D)+) ed indica la presenza dell antigene sulla superficie dei globuli rossi. In caso contrario il paziente viene considerato Rh(D) negativo.

26 Determinazione indiretta del Gruppo Sanguigno ABO Il sistema Ortho Biovue - Determinazione del Gruppo Sanguigno 26 Nella determinazione indiretta del gruppo, il plasma del paziente viene mescolato con reagenti contenenti eritrociti standardizzati (emazie test). La determinazione indiretta conferma il risultato della determinazione diretta del gruppo. Il plasma del paziente viene mescolato con pannelli eritrocitari noti. I pannelli eritrocitari A1 rileveranno la presenza dell Anti-A nei pazienti di gruppo B e O. I pannelli eritrocitari B rileveranno la presenza dell Anti-B nei pazienti di gruppo A e O. In alcuni casi si utilizzano anche eritrociti A2 per distinguere tra gruppo A e gruppo A2 o A debole nel plasma/siero. La presenza di anti-a1 indica che I globuli rossi del paziente sono un sottogruppo del sangue di tipo A, ad esempio A2. In alcuni casi si utilizzano le cellule O per rilevare la presenza di Anti-H nel plasma/siero di pazienti con gruppo Bombay, un raro fenotipo che inizialmente produce una reazione simile a quella dei pazienti di gruppo O. Il fenotipo Se il Bombay campione provoca l agglutinazione dei pannelli A1 il sangue è di tipo B o O. Nel Se plasma/siero solo le cellule del A1 sangue mostrano di tipo agglutinazione O sono presenti il sangue entrambi è di gli tipo anticorpi B. Anti-A ed Anti-B. Un Se vero il plasma/siero gruppo O quindi agglutina agglutinerebbe sia le cellule le cellule A1 che A le e cellule B ma non B il le sangue O. è di tipo O. Esiste un rato fenotipo chiamato Bombay che agglutina sia le emazie test A e B ma anche le emazie test di tipo O a causa della presenza dell Anti-H che provoca agglutinazione dei pannelli di gruppo O.

27 Discrepanza tra analisi diretta ed indiretta ABO Il sistema Ortho Biovue - Determinazione del Gruppo Sanguigno 27 La discrepanze tra l analisi diretta ed indiretta del gruppo ABO possono essere provocate da una serie di fattori diversi da indagare per concludere correttamente la determinazione del gruppo ABO ERRORI TECNICI: ad esempio l errata identificazione di campioni ematici, errori di trascrizione, diluizione non corretta della sospensione di eritrociti, errori nell aggiunta dei reattivi o reattivi contaminati ed una centrifuga non correttamente calibrata (sia centrifuga campioni che centrifuga Biovue ). ANTICORPI DEBOLMENTE REATTIVI O ASSENTI: provocano reazioni deboli o nulle. I soggetti più facilmente candidati a questo tipo di discrepanza sono i neonati, anziani, pazienti affetti da leucemie o linfomi, bazienti con basso titolo anticorpale dovuto all assunzione di farmaci immunodepressivi o malattie da immunodeficienza. In questo caso è opportuno potenziare la reazione mediante incubazione o mediante altri mezzi. ANTIGENI DEBOLMENTE REATTIVI: è una causa di discrepanza molto rara ai giorni nostri ma possibile a causa di sottogruppi di A e/o B debolmente reattivi. ANOMALIE PLASMATICHE O PROTEICHE: dovute a patologie o trattamenti farmacologici oppure a causa dell utilizzo di plasma expanders.

28 Determinazione del Fenotipo Rh Il sistema Ortho Biovue - Determinazione del Gruppo Sanguigno 28 Oltre all antigene D individuato sugli eritrociti della maggior parte degli esseri umani, asistono altri quattro antigeni Rh che possono essere presenti in varie combinazioni. Si tratta degli antigeni C, c, E, e. Come per gli antigeni dei gruppi sanguigni ABO, anche questi antigeni sono ereditati dai genitori. L assenza dell antigene D viene espressa come d, anche se un antigene d non è mai stato rilevato. Da ogni genitore viene ereditato un set di combinazioni di 3 geni Rh. La produzione di antigene Rh è codificata da due geni RHD (D) ed RHCE (C, c, E, e).

29 Ricerca di Anticorpi Tecnica di Agglutinazione su Colonna (CAT)

30 Ricerca di Anticorpi (RAI) Il sistema Ortho Biovue - Ricerca di Anticorpi (RAI) 30 I test per la ricerca indiretta del gruppo descritti prima si riferiscono alla ricerca degli anticorpi del gruppo ABO (anticorpi attesi ). L analisi per la ricerca degli anticorpi inattesi (irregolari) non ABO sono una componente critica del servizio trasfusionale. Gli anticorpi inattesi, una volta individuati, vanno identificati. L identificazione è necessaria per la selezione delle unità di sangue. Le unità di sangue selezionate devono essere prive del corrispondente antigene. Il test per la ricerca degli anticorpi irregolari (RAI) è chiamato anche Test di Coombs Indiretto (IAT). Mediamente solo in un range che va dallo 0,3% al 2% della popolazione la RAI è positiva. La popolazione dei positivi alla RAI è generalmente costituita da: PAZIENTI TRASFUSI PAZIENTI CHE HANNO RICEVUTO UN TRAPIANTO DI ORGANO PAZIENTI GRAVIDE IN RARI CASI LA RAI POSITIVA NON E DOVUTA AD ESPOSIZIONE AD ERITROCITI ESTRANEI

31 Ricerca di Anticorpi (RAI) Il sistema Ortho Biovue - Ricerca di Anticorpi (RAI) 31 Una volta rilevato, l anticorpo inatteso va identificato in modo che le unità di sangue da somministrare al paziente possano essere analizzate per confermare la negatività all antigene corrispondente. L identificazione può essere lunga e complessa. L identificazione di anticorpi irregolari è un test di secondo livello. Si tratta di una procedura essenziale per giungere alla corretta selezione delle sacche.

32 Ricerca di Anticorpi (RAI) Il Sistema Ortho Biovue - Ricerca di Anticorpi (RAI) 32 Esistono due tipi di anticorpi dei gruppi sanguigno: IgM ed IgG Gli anticorpi IgM (ad esempio Anti-A ed Anti-B) sono grandi ed agglutinano direttamente gli eritrociti che espongono il relativo antigene. Gli anticorpi di classe IgG sono più piccoli e non agglutinano direttamente gli eritrociti. Nel caso delle IgG è necessario favorire l agglutinazione mediante il siero antiglobuline umane che contiene a sua volta anti-igg permettendo di costruire i ponti necessari per agglutinare le emazie. Il test AHG (Anti Human Globuline) rilevano le IgG e gli eritrociti sensibilizzati dal complemento. Sono disponibili sieri AHG polispecifici (IgG + C3d) nonchè Anti-IgG.

33 Ricerca di Anticorpi (RAI) Il Sistema Ortho Biovue - Ricerca di Anticorpi (RAI) 33 Gli anticorpi clinicamente significativi sono quelli che riducono la sopravvivenza degli eritrociti trasfusi. Sono generalmente anticorpi di tipo IgG. Non provocano agglutinazione a temperatura ambiente. Richiedono incubazione a 37 C prima della centrifugazione. Come già accennato richiedono il siero di Coombs per promuovere l agglutinazione. Il Siero di Coombs è predispensato nelle colonne delle Biovue. Come antisiero Anti-IgG monospecifico. Come siero Anti-IgG + C3d polispecifico. Come sieri separati monospecifici Anti-IgG ed Anti-C3d in colonne separate. Sfruttano due tipi di soluzioni potenzianti: SOLUZIONI A BASSA FORZA IONICA (LISS) e GLICOLE POLIETILENICO (PEG). Il LISS ed il PEG accellerano la reazione ed aumentano la forza ionica del mezzo di sospensione promuovendo il legame Ag/Ab (+ sensibilità) ed accellerando la reazione (- tempo di incubazione).

34 Ricerca di Anticorpi (RAI) Il Sistema Ortho Biovue - Ricerca di Anticorpi (RAI) 34 Anche nel caso della ricerca di anticorpi irregolari si utilizzano delle emazie commerciali selezionate in modo tale che espongano sulla propria superficie gli antigeni considerati clinicamente significativi OCD fornisce pannelli a due cellule (Selectogen ) e pannelli a tre cellule (Surgiscreen ). Questi pannelli sono disponibili in due concentrazioni differenti (3% - 0.8%). Le emazie Surgiscreen offrono una copertura maggiore di antigeni con espressione più forte sulla superficie eritrocitaria, in grado di rilevare anche anticorpi a basso titolo.

35 Ricerca di Anticorpi (RAI) Il Sistema Ortho Biovue - Ricerca di Anticorpi (RAI) 35 Quando la ricerca di anticorpi produce una reazione positiva di agglutinazione, tale reazione varia nella sua intensità in funzione del tipo di anticorpo rilevato e del titolo presente nel campione La reazione va valutata in una scala che va da 0.5 (debole) ad 1+, 2+, 3+, 4+ (forte). La forza di reazione fornisce indicazioni per la fase di identificazione degli anticorpi. Se si verifica emolisi, significa che l anticorpo ha distrutto i globuli rossi. Non esistendo più cellule da centrifugare, rimane semplicemente una forte colorazione rossa nella parte superiore della colonna di Biovue. La reazione è da considerarsi POSITIVA.

36 Ricerca di Anticorpi (RAI) Tecnica di Agglutinazione su Colonna (CAT) - Il sistema Ortho Biovue 36 Sistemi di Automazione per la ricerca di Anticorpi R.A.I. Ortho Autovue Innova Ortho Vision Max Ortho Vision

37 Identificazione di Anticorpi Il Sistema Ortho Biovue - Ricerca di Anticorpi (RAI) 37 Resolvigen4.lnk

38 Identificazione di Anticorpi Il Sistema Ortho Biovue - Ricerca di Anticorpi (RAI) 38 Rilevata la presenza di uno o più anticorpi mediante il test RAI, è necessario effettuare ulteriori analisi sul campione (siero/plasma) per identificare l anticorpo. La tecnica utilizzata è la stessa della RAI. La differenza consiste nel numero di emazie test che vengono cimentate con il campione. Il pannello eritrocitario Resolve Panel A (al 3% o allo 0.8%) consiste in 11 cellule. Il pannello eritrocitario Resolve Panel B (al 3% o allo 0.8%) consiste in 11 cellule. Il Resolve Panel B contiene cellule con combinazioni di antigeni diverse e complementari Una volta identificato l anticorpo, è necessario analizzare le unità di sangue dei donatori rispetto al Panel A per accertarsi che non. contengano il relativo antigene eritrocitario. Questo processo Per l esecuzione di un singolo viene panello anche completo chiamato. servono 11 colonne (12 con l autocontrollo). L assetto antigenico dei pannelli è illustrato nell ANTIGRAM. TIPIZZAZIONE ANTIGENICA LE REAZIONI POSITIVE E NEGATIVE DEVONO ESSERE INTERPRETATE DAL L errore PERSONALE nella determinazione DEL SERVIZIO del TRASFUSIONALE gruppo o nella ricerca PER GIUNGERE di anticorpi ALL IDENTIFICAZIONE mette il paziente a rischio DELL ANTICORPO di ricevere unità TRAMITE di sangue L ANALISI non adatte DELL ANTIGRAM. che potrebbero provocare reazioni gravi (potenzialmente fatali).

39 RIEPILOGO Determinazione del Gruppo Sanguigno Ricerca di Anticorpi Tecnica di agglutinazione su colonna (CAT)

40 Riepilogo Determinazione ABO+RAI Tecnica di Agglutinazione su Colonna (CAT) - Il sistema Ortho Biovue 40

41 Riepilogo Determinazione ABO+RAI Tecnica di Agglutinazione su Colonna (CAT) - Il sistema Ortho Biovue 41 Anche il test di Coombs Diretto (DAT) è una delle analisi fondamentali nel Centro Trasfusionale: il DAT è un test specialistico eseguito in alcuni casi su neonati per verificare se gli anticorpi materni si siano legati agli eritrociti del bambino. Il DAT viene eseguito anche in casi problematici di identificazione di anticorpi inattesi. - Il DAT sugli adulti rileva anticorpi di classe IgG che si sono legati alla duperficie degli eritrociti del paziente. Questo test può essere effettuato insieme ad un pannello di identificazioe anticorpale e viene considerato un controllo.

42 Riepilogo Tecnica di Agglutinazione su Colonna (CAT) - Il sistema Ortho Biovue 42

43 Il Cross-Match Tecnica di agglutinazione su colonna (CAT)

44 Il Cross-Match Tecnica di Agglutinazione su Colonna (CAT) - Il sistema Ortho Biovue 44 Una volta determinato il gruppo di un paziente ed effettuata la ricerca di anticorpi irregolari viene eseguita la prova crociata (cross-match) per verificare che l unità di sangue sia compatibile e quindi somministrabile al paziente con sicurezza. Gli obiettivi del crossmatch sono: Rilevare eventuali anticorpi nel plasma del ricevente che produrrebbero una reazione con gli eritrociti del donatore. Verificare ulterioremente che l unità del donatore sia stata etichettata con il corretto tipo ABO. Esistono due forme di cross-match: elettronico e completo mediante test di Coombs Indiretto. CROSS-MATCH CROSS-MATCH ELETTRONICO AHG = Type & Screen Se In un questo paziente caso non viene ha eseguita anticorpi la inattesi più lunga nè grandi procedura probabilità del cross-match di avere necessità mediante di il test sangue di durante Coombs l intervento Indiretto. Questa chirurgico, procedura non è viene necessario utilizzata svolgere per assicurare fisicamente trasfusioni la prova sicure crociata. a: In passato sono state eseguite molte prove crociate inutili non essendo presenti anticorpi inattesi. Il crossmatch elettronico permette Donne maggiore incinte. efficienza e tempestività in presenza di due criteri: Pazienti con ricerca di anticorpi positiva. Riultano già determinati due o più gruppi sanguigni coincidenti. Pazienti che hanno ricevuto trasfusioni in passato. Non sono mai stati registrati anticorpi irregolari.

45 Il Cross-Match Tecnica di Agglutinazione su Colonna (CAT) - Il sistema Ortho Biovue 45 POST TRASFUSIONE E essenziale monitorare il paziente nel corso della trasfusione per assicurarsi che non si verifichi una reazione. I SEGNI VITALI del paziente (frequenza polso, respirazione, temperatura, pressione arteriosa) vengono osservati e registrati. Una loro alterazione potrebbe indicare l inizio di una reazione trasfusionale. Prima di iniziare la trasfusione viene verificato se il paziente soffra di capogiri, prurito o difficoltà respiratorie, tutti sintomi di una reazione trasfusionale.

46 Riepilogo Vantaggi di ORTHO BioVue

47 Riepilogo Vantaggi ORTHO Biovue Ortho Clinical Diagnostics - Cenni Storici 47 Letture Chiare e Definite Letture standardizzate e confrontabili. Reazioni stabili e documentabili. Letture stabili = flessibilità operativa. Letture rapide. Formazione facile del personale. Semplicità d uso - Produttività Pochi passaggi operativi. Sensilbilità elevata: capacità di rilevare 2/3 RAI eseguibili per cassetta. livelli molto bassi di antigene o anticorpo. 2/3 RAI/Cassetta = flessibilità operativa. Specificità: elevata capacità di rilevare in Essere partner nell Innovazione Continua in Immunoematologia. Riduzione tempi operativi. modo specifico gli anticorpi desiderati e non dare aspecificità. Reattivi predispensati. Non richiede lavaggi. Formazione facile del personale. Sicurezza Ridotta esposizione a materiale biologico. Volume campione ridotto. Lavaggi non richiesti (+ sicurezza). Numero di passaggi operativi inferiore. Probabilità di errore diminuita. 33 Milioni di cassette ORTHO Biovue vendute ogni anno. 220 Milioni di test eseguiti con ORTHO Biovue System. Prestazioni Accurate Utilizzato da più di 20 anni in 20 paesi diversi.

48 Grazie