Prol. ISTRUZIONI PER L USO VITROS Immunodiagnostic Products Confezione dei reagenti Prolattina

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1 ISTRUZIONI PER L USO VITROS Immunodiagnostic Products Confezione dei reagenti Prolattina Prol Impiego Per la misura in vitro delle quantità di prolattina nel siero e nel plasma (EDTA o eparina) umani. Compendio e spiegazione del dosaggio La prolattina è prodotta dalla ghiandola pituitaria anteriore sotto il controllo inibitorio della dopamina, che è secreta dall ipotalamo 1. Quando viene isolata dal tessuto pituitario, dal sangue e dal liquido amniotico, la prolattina si trova in un certo numero di massa molecolare 2 e ha alcune similitudini strutturali con l ormone umano della crescita 3. La prolattina ha un ruolo importante nell inizio e nel mantenimento dell allattamento, quando c è un incremento fisiologico delle concentrazioni in circolo 4,5. La iperprolattinemia patologica viene riscontrata in caso di ipotiroidismo e di insufficienza renale. L iperprolattinemia è anche riconosciuta come danneggiante la funzione gonadica di ambedue i sessi. Le donne possono presentare casi di amenorrea e gli uomini soffrire d impotenza 5,6,7. Principi della procedura Il dosaggio di prolattina VITROS viene eseguito utilizzando la confezione di Reagente Prolattina VITROS e i Calibratori per Prolattina per prodotti immunodiagnostico VITROS sul sistema VITROS per Immunodiagnostica. Viene utilizzata una tecnica immunometrica, che comporta una reazione simultanea della prolattina presente nel campione con un anticorpo biotinilato (policlonale di pecora anti-prolattina) e un anticorpo (monoclonale di topo anti-prolattina) coniugato marcato con perossidasi da rafano (HRP). Il complesso di antigene ed anticorpo viene catturato dalla streptavidina nei pozzetti, mentre le sostanze non legate vengono eliminate tramite lavaggio. Il coniugato con perossidasi da rafano legato viene misurato mediante reazione luminescente 8. Un reagente contenente substrati luminogenici (derivato del luminolo e sale peracido) ed un agente di trasferimento di elettroni vengono aggiunti ai pozzetti. La perossidasi da rafano nel coniugato legato catalizza l ossidazione del derivato del luminolo, dando origine a produzione di luce. L agente di trasferimento di elettroni (acetanilide sostituita) provoca un aumento del livello di luce prodotta, prolungandone l emissione. I segnali luminosi vengono letti dal Sistema VITROS. Il quantitativo di coniugato con perossidasi da rafano legato è direttamente proporzionale alla concentrazione di prolattina presente. Avvertenze e precauzioni Solo per uso diagnostico in vitro AVVERTENZA: Materiale potenzialmente infettivo Si raccomanda di usare la dovuta cautela nel maneggiare i campioni di origine umana. Tutti i campioni sono da considerare come potenzialmente infettivi. Nessun metodo sperimentale può garantire con assoluta certezza l assenza del virus dell epatite di tipo B, del virus dell epatite di tipo C, dell HIV 1+2 o di altri agenti infettivi. Campioni e componenti del dosaggio devono essere manipolati, conservati ed eliminati in forma solida o liquida in conformità alle procedure dettate dalle relative direttive e normative nazionali in materia di sicurezza biologica (per es. Direttiva M29 del NCCLS 9 ). AVVERTENZA: Contiene Kathon e ProClin 300 Il reattivo coniugato contenente del ProClin 300 e il reagente anticorpo biotinilato contenente del Kathon. R43: Può provocare sensibilizzazione per contatto con la pelle. R52/53: Nocivo per gli organismi acquatici, può provocare a lungo termine effetti negativi per l ambiente acquatico. S24: Evitare il contatto con la pelle. S37: Usare guanti adatti. Versione 1.0 Pubb. n. GEM1065_IT 1

2 Prol ISTRUZIONI PER L USO Materiali forniti Materiali forniti 1 confezione dei reagenti contenente: 100 pozzetti rivestiti (streptavidina, legante 3 ng biotina/pozzetto). 11,0 ml di reagente coniugato (HRP-monoclonale di topo anti-prolattina, legante 4 miu prolattina/ml) in soluzione tamponata con agente anti-microbico. 7,3 ml di reagente anticorpo biotilinato (biotina/anti-prolattina da pecora, legante 7 miu prolattina/ml) in soluzione tamponata con agente antimicrobico. NOTA: Contiene siero bovino e sieroalbumina bovina. Materiali richiesti, ma non forniti nel kit Sistema VITROS per immunodiagnostica, oltre ai seguenti prodotti immunodiagnostici VITROS: Calibratori per Prolattina (comprese scheda di calibrazione lotti e scheda dei protocolli), Reagente di segnale, Reagente di lavaggio universale, Diluente per campioni ad elevata concentrazione A, contenitore per la conservazione delle confezioni di reagenti (opzionale) con essiccante. Preparazione e conservazione dei reagenti Le Confezioni di Reagenti per Prodotti Immunodiagnostici VITROS contengono reagenti liquidi omogenei che non devono essere agitati né mescolati prima di essere caricati sul sistema. Come tutte le soluzioni per dosaggi immunologici a base di proteine, una manipolazione scorretta della confezione di reagente può provocare la formazione di schiuma sulla superficie del reagente stesso. La confezione dei reagenti viene fornita pronta per l uso. Conservare i reagenti in condizioni integre a 2-8 C. Non congelare. Una volta aperta, utilizzare la confezione dei reagenti entro 8 settimane dal primo caricamento sul sistema. Non usare oltre la data di scadenza. Conservare le confezioni di reagenti aperte direttamente sul sistema o a 2-8 C in apposito contenitore ermetico per la conservazione delle confezioni di reagenti sigillati con essiccante a secco. I calibratori per Prolattina VITROS vengono forniti liofilizzati. Conservare i calibratori integri a 2-8 C. Non usare oltre la data di scadenza. Ricostituire con 1 ml di acqua distillata. Dopo la ricostituzione conservare per un massimo di 5 settimane a 2-8 C o di 10 settimane a -20 C (è ammesso un solo ciclo di congelamento-scongelamento). Preparazione del paziente Non è necessaria alcuna preparazione specifica del paziente. Raccolta, preparazione e conservazione dei campioni Si possono usare campioni di siero o plasma (EDTA o eparina). Per la raccolta dei campioni ematici attenersi a procedure standard. I campioni di siero o plasma possono essere conservati fino ad un massimo di 5 giorni a 2-8 C o di 4 settimane a -20 C. Evitare congelamenti e scongelamenti ripetuti. Si è riscontrato che alcuni dispositivi di prelievo del campione biologico hanno determinato alterazioni all integrità di determinati analiti provocando interferenze nella determinazione analitica 10. Considerata la varietà di dispositivi per la raccolta dei campioni disponibili in commercio, la Ortho-Clinical Diagnostics non è in grado di definire con assoluta certezza le prestazioni dei propri prodotti con tutti i diversi dispositivi. Si raccomanda pertanto che i singoli utilizzatori verifichino che il sistema di prelievo da loro adottato venga usato nel rispetto delle istruzioni della Casa produttrice e sia compatibile con il sistema VITROS. Note sul controllo di qualità e sulla procedura Maneggiare la confezione dei reagenti con cura evitando la formazione di condensa sulla scatola, evitando la formazione di schiuma nei reagenti ed infine cercando di non agitare la scatola stessa. Se le Confezioni di Reagenti VITROS vengono capovolte o agitate, piccole quantità di schiuma sottile possono risultare impossibili da rilevare dal Sistema VITROS. Le Confezioni di Reagenti contenenti una schiuma sottile che non viene rilevata possono mostrare un bias negativo. Se dovete utilizzare una confezione di reagente che è stata capovolta o agitata prima che abbia avuto la possibilità di depositarsi, dovrete verificarne le prestazioni eseguendo campioni in duplicato ai fini del controllo qualità dopo aver caricato la confezione sul sistema. La calibrazione è specifica per i singoli lotti. Le confezioni di reagenti e i calibratori corrispondenti sono identificabili dal numero di lotto. Le confezioni di reagenti dello stesso lotto possono utilizzare la medesima calibrazione, che dev essere effettuata con calibratori aventi lo stesso numero di lotto. Mescolare perfettamente i campioni, i calibratori e i controlli per inversione e portarli a C prima dell uso. Manipolare i campioni, calibratori e controlli in contenitori chiusi al fine di evitare contaminazione ed evaporazione. Per evitare l evaporazione, limitare il numero di campioni, calibratori e controlli presenti sul sistema VITROS. Per maggiori informazioni vedere la Guida dell operatore del sistema VITROS. Dopo l uso, devono essere tempestivamente riportati a 2-8 C. In alternativa è possibile utilizzarne un aliquota sufficiente ad una singola determinazione. 2 Pubb. n. GEM1065_IT Versione 1.0

3 ISTRUZIONI PER L USO Procedura Prol Verificare periodicamente il materiale a disposizione per assicurare una corretta gestione dei reagenti e una disponibilità di lotti di Reagenti di Segnale, Reagenti di Lavaggio Universale e Reagenti calibrati sufficienti a condurre le analisi programmate. Dovendo eseguire una serie di dosaggi su un singolo campione, è opportuno accertarsi che il volume di campione sia sufficiente ad effettuare i dosaggi richiesti. La buona prassi di laboratorio prevede l esecuzione di controlli ai fini della verifica delle prestazioni del dosaggio eseguito. I controlli RE VITROS contengono 3 idonei livelli di prolattina (bassi, medi, elevati). Si raccomanda di eseguire i controlli contestualmente all esecuzione di una calibrazione e, successivamente, almeno una volta ogni 24 ore e dopo l esecuzione delle procedure di controllo previste (Cfr. la Guida dell operatore del sistema VITROS). Se le procedure di controllo di qualità interne richiedono un uso più frequente dei controlli, è opportuno attenersi alle procedure previste. Per maggiori informazioni vedere la Guida dell operatore del sistema VITROS. Il nome predefinito del dosaggio che appare sul referto del paziente è Prolactin. L abbreviazione predefinita che appare sui menu di selezione dei dosaggi e sui referti di laboratorio è Prol. Se necessario è possibile riconfigurare questi valori predefiniti. I risultati possono essere espressi come miu/l o ng/ml. Tali opzioni sono configurabili dalla videata di configurazione degli analiti nelle Opzioni e Configurazioni. I campioni di siero o plasma (EDTA o eparina) con valori superiori all intervallo di calibrazione possono essere diluiti fino a 1/10 con diluente per campioni ad elevata concentrazione A prima di eseguire il dosaggio. Fare riferimento al foglietto illustrativo del diluente per campioni ad elevata concentrazione A. Procedura Il dosaggio per Prolattina VITROS richiede 35 µl di campione, calibratore o controllo per una determinazione singola, indipendentemente dal volume minimo di riempimento del contenitore per campioni utilizzato. Il dosaggio per Prolattina VITROS dev essere calibrato ogni volta che si usa un nuovo lotto di reagenti e, successivamente, ad intervalli di 28 giorni. Il dosaggio per Prolattina VITROS dev essere calibrato anche dopo l esecuzione di alcune procedure di controllo oppure se i risultati del controllo qualità differiscono molto dal range accettabile. Per informazioni più dettagliate sul funzionamento del sistema si veda la Guida dell Operatore del Sistema immunodiagnostico VITROS, capitoli 4-7. In breve: 1. Effettuare la scansione della scheda dei protocolli per caricare un nuovo protocollo di analisi sul sistema. A questo punto viene visualizzato il pulsante relativo alle diverse determinazioni sulla videata di programmazione dei campioni. Effettuare la scansione della scheda di calibrazione dei lotti per ogni nuovo lotto di reagenti al fine di immettere i dati di scadenza e di calibrazione specifici per quel lotto. 2. Aprire la busta e prelevare la confezione dei reagenti. Caricare la confezione sull unità di autocaricamento o utilizzare il pulsante di scarico/carico nella videata di gestione dei reagenti (visualizzazione per reagente). NOTA: Non utilizzare prodotti danneggiati o non sigillati perfettamente. 3. Caricare i campioni nei settori portacampioni universali usando, se necessario, appositi adattatori (volendo, si possono identificare i campioni con codici a barre). Collocare un puntale monouso accanto ai singoli campioni e caricare i settori sul sistema. Definire i programmi dei campioni tramite la videata di programmazione dei campioni. Avviare la funzione di campionamento. Tutte le fasi di campionamento vengono effettuate automaticamente. 4. Trattare i calibratori analogamente ai campioni. Trasferire un aliquota di ogni calibratore nel contenitore del campione (tenendo conto del volume di riempimento minimo del contenitore), che può essere identificato tramite codice a barre con l etichetta fornita. Non è necessario programmare la calibrazione se si usano etichette con codici a barre. Caricare i calibratori nell ordine voluto: la calibrazione parte automaticamente. Risultati Per costruire la curva di calibrazione principale codificata sulla scheda di calibrazione dei lotti si usa una funzione di aggiustamento di curva logistica a quattro parametri modificata. Il processo di calibrazione riposiziona la curva di calibrazione principale definendo una curva valida che viene memorizzata per il sistema. Per maggiori informazioni leggere le istruzioni per l uso dei calibratori. I risultati vengono calcolati automaticamente dal Sistema VITROS. Controllo di qualità I risultati di calibrazione vengono confrontati con una gamma di parametri di che appaiono in dettaglio nella videata dei parametri di calibrazione alla quale si accede dalle Opzioni e Configurazioni (videata di revisione/calibrazioni utente). Se non vengono rispettati tutti i range dei parametri di qualità definiti, sul rapporto di calibrazione appare un codice d identificazione. Per le operazioni da eseguire successivamente ad una calibrazione non andata a buon fine si veda il capitolo 8 della Guida dell Operatore (Revisione dei risultati). I valori dei campioni dei pazienti che non rientrano nell intervallo di riferimento vengono identificati con un codice basso o elevato LO o HI. I valori dei controlli vengono identificati se 2 DS rispetto alla media della linea di base definita. Non esistono parametri individuali in grado di descrivere completamente la qualità dell aggiustamento della curva. Il rapporto di calibrazione dev essere utilizzato in abbinamento a valori di controllo ai fini della determinazione della validità della calibrazione. Se i risultati di controllo differiscono di molto dal range accettabile, indagarne la causa prima di decidere se annotare i risultati del paziente. Versione 1.0 Pubb. n. GEM1065_IT 3

4 Prol ISTRUZIONI PER L USO Limiti della Procedura Limiti della Procedura I risultati ottenuti con questo o altri kit diagnostici devono essere utilizzati ed interpretati esclusivamente nel contesto del quadro clinico generale. Gli anticorpi eterofili nei campioni di siero o di plasma possono provocare interferenze negli immunodosaggi 11. Questi anticorpi possono essere presenti nei campioni di sangue provenienti da individui a contatto con animali o che sono stati curati con prodotti derivati da siero animale. I risultati che sono contraddittori con le osservazioni cliniche indicano che sono necessari altri test. I campioni contenenti trioleina (56,5 mmol/l), emoglobina (10 g/l) o bilirubina (3,42 mmol/l) interferiscono con questo dosaggio in ragione di meno del 5%. Non usare campioni torbidi. I livelli di biotina nel siero rimangono elevati fino a 24 ore dopo somministrazione orale o endovenosa di biotina. Campioni contenenti 10 ng/ml di biotina interferiscono per meno dell 11%. I campioni contenenti > miu/l possono rientrare nell intervallo di calibrazione a seguito di un effetto gancio per dose elevata. Valori attesi Ogni laboratorio dovrebbe confermare la validità degli intervalli di rifermento rispetto alla popolazione afferente. A titolo di guida, un intervallo di riferimento normale per le donne (2,5 e 97,5 percentile) da 64,0 a 395,0 miu/l con una media di 194,0 miu/l, è stato ottenuto da 147 pazienti normali, non incinte, in pre-menopausa. Un intervallo di riferimento normale per gli uomini (2,5 e 97,5 percentile) da 78,0 a 380,0 miu/l, con una media di 172,0 miu/l, è stato ottenuto da 146 pazienti normali. Prestazioni metodologiche Calibrazione e modalità per ricostruirla L intervallo di calibrazione del dosaggio prolattina VITROS è miu prolattina/l (ricavabile da calibratori di riferimento interni che sono stati avvalorati per essere messi in correlazione con un altro dosaggio disponibile in commercio con riferimento al Terzo Standard Internazionale per la prolattina 84/500). Le concentrazioni di prolattina sono citate in miu/l o in ng/ml. La conversione tra le unità è fatta utilizzando la formula: ng/ml = miu (3 IS 84/500)/L x 0,047 Accuratezza Si è ottenuta una correlazione tra il dosaggio Prolattina VITROS e un dosaggio in commercio (X) misurando un pannello di 137 campioni di pazienti appartenenti a diverse categorie cliniche. Il range nei campioni utilizzati era di 39, miu/l con dosaggio Prolattina VITROS e di 52, miu/l con il dosaggio del commercio: Dosaggio Prolattina VITROS = 1,048 x X - 94 (miu/l), con coefficiente di correlazione di 0,982. Precisione La precisione è stata valutata secondo il protocollo EP5-T2 12 del National Committee for Clinical Laboratory Standards. Sono stati utilizzati quattro sieri di controllo liofilizzati. Un replicato del controllo 1 e due replicati dei controlli 2, 3 e 4 sono stati dosati in almeno due differenti sedute giornaliere per un periodo di 20 giorni. L esperimento è stato ripetuto con due lotti di reagenti su più sistemi. I dati risultanti sono rappresentativi delle prestazioni del prodotto. Tabella 1: Precisione Concentrazione Giornaliera Intracalibrazione Intralaboratorio tipica miu/l DS* CV(%)* DS* CV(%)* DS* CV(%)* 122,0 6,77 5,6 9,89 8,1 10,4 8,7 296,0 5,52 1,9 15,1 5,1 14,0 4, ,8 1,8 61,9 4,5 62,1 4, ,1 2, , ,3 * Quadratica media Giornaliera: Precisione fra un duplicato e l altro, con media ottenuta su tutti i replicati. Intracalibrazione: Precisione totale, con componenti ponderati di variazione intra-dosaggio, inter-dosaggio e tra diversi giorni. Intralaboratorio: Misura dell effetto della ricalibrazione sulla precisione totale, calcolata nell ambito di un singolo lotto di reagenti, utilizzando dati di 4 calibrazioni. Sensibilità La sensibilità analitica viene definita come la concentrazione di 2 deviazioni standard rispetto alla media di un campione che non contiene analiti, dove vengono determinati 20 replicati. Normalmente, la sensibilità del dosaggio prolattina VITROS è 30,0 miu/l. 4 Pubb. n. GEM1065_IT Versione 1.0

5 ISTRUZIONI PER L USO Bibliografia Prol Specificità La specificità del dosaggio della prolattina VITROS è stata stabilita aggiungendo dei potenziali cross-reagenti ad un campione di controllo liofilo contenente prolattina. È stato quindi determinato il livello di prolattina presente nel campione. Potenziale cross- reagente Concentrazione aggiunta al campione Concentrazione del campione senza il cross- reagente (miu/l) Concentrazione del campione con il cross- reagente (miu/l) HGH 2,0 miu/ml HPL 20 µiu/ml LH 400 miu/ml HCG miu/ml FSH 400 miu/ml TSH 200 µiu/ml Bibliografia 1. Frantz, A.G. Physiology in medicine: Prolactin; New England Journal of Medicine, 298: (1978). 2. Shoupe, D., Montz, F.J., Letzky, O.A. and dizerega, G.S. Prolactin molecular hereogeneity; American Journal Obstetrics and Gynaecology 147: (1983). 3. Shome, B and Parlow A,F. Human pituitary prolactin (hprl): The entire linear amino acid sequence; Journal of Clinical Endocrinology Metabolism 45: (1977). 4. Falconer, I.R. Aspects of the biochemistry, physiology and endocrinology of lactation; Australian Journal of Biological Sciences 33: (1980). 5. Rees, L.H. Prolactin; Recent Advances in Clinical Biochemistry, edited by Albert, K.G and Price, P: (1981). 6. Caulfriez, A. Menstrual disorders associated with hyperprolactinemia; Hormone Research 22: (1985). 7. Buvat, J., Lemaire, A., Buvatherbaut, M., Fourlinnie, J.C., Racadot, A. and Fossati, P. Hyperprolactinemia and sexual function in men; Hormone Research 22: (1985). 8. Summers, M. et al. Luminogenic Reagent using 3-chloro-4-hydoxy acetanilide to Enhance peroxidase/luminol Chemiluminescence; Clinical Chemistry 41: S73 (1995). 9. NCCLS. Protection of laboratory Workers from Instrument biohazards and Infectious Diseases Transmitted by Blood, Body Fluids and tissue; Approved guideline. NCCLS Document M29-A (ISBN ). NCCLS, Wayne, PA 19087; Calam, R.R. Specimen Processing Separation Gels: An Update; Journal of Clinical Immunoassay 11: (1988). 11. Levinson, S.S. The Nature of heterophilic antibodies and their role in Immunoassay Interference; Journal of Clinical Immunoassay 15: (1992). 12. National Committee for Clinical Laboratory Standards. Order Code EP5-T2. (1992). Glossario dei simboli Versione 1.0 Pubb. n. GEM1065_IT 5

6 Prol ISTRUZIONI PER L USO Revisioni Revisioni Data revisione Versione Modifiche tecniche apportate* Nuovo formato, tecnicamente equivalente a PIGEM1065/101.0 con le seguenti variazioni minori: Sezione Simboli usati sostituita dalla tabella Glossario dei simboli Aggiunta la casella per la firma della sezione Revisioni * Le barre delle modifiche indicano la posizione del testo aggiornato rispetto alla versione precedente del documento. Quando le presenti Istruzioni per l uso saranno sostituite da quelle aggiornate, apporre la propria firma e la data e conservare in base alle direttive locali o ai regolamenti del laboratorio. Firma Data Condizioni di fornitura: tutte le forniture sono soggette ai termini e alle condizioni di vendita della ditta Ortho-Clinical Diagnostics e dei suoi distributori. Copie di tali condizioni saranno disponibili su richiesta. Ortho-Clinical Diagnostics Johnson & Johnson Holmers Farm Way High Wycombe Buckinghamshire HP12 4DP United Kingdom VITROS è un marchio di Ortho-Clinical Diagnostics, Inc. Ortho-Clinical Diagnostics, Inc., Pubb. n. GEM1065_IT Versione 1.0