Pagina 1 di 11 Dipartimento di Diagnostica di Laboratorio Responsabile: Prof. Arnaldo Caruso Sezione Specializzata di Ematologia e Coagulazione Responsabile: Dott.ssa Arnalda Lanfranchi
Pagina 2 di 11 Il Laboratorio Cellule Staminali Le attività del Laboratorio Cellule Staminali, che hanno avuto inizio nel 1990 presso gli Spedali Civili di Brescia, hanno sede presso i locali individuati nell'ambito del Laboratorio di Medicina Molecolare "Angelo Nocivelli".
Pagina 3 di 11 Il Laboratorio realizza procedure di manipolazione delle cellule staminali per la realizzazione clinica del trapianto di midollo osseo in bambini affetti da oncoemopatie (leucemie e tumori solidi) e immunodeficienze primitive, test di monitoraggio post trapianto ma anche diagnosi di malattia. Tutte le attività di routine del laboratorio sono certificate ISO 9001, accreditate secondo gli Standard Joint Commission International 2011 e accreditate secondo i FACT-JACIE International Standards for Cellular Therapy, 4^ edizione, per quanto riguarda il settore preparazione cellule staminali per trapianto. Il servizio viene effettuato sia su campioni provenienti da pazienti ricoverati presso i Reparti dell Azienda Spedali Civili, sia da pazienti non ricoverati che afferiscono al Servizio Prelievi Esterni ed anche su campioni provenienti da altri Enti Ospedalieri sia intraregione che extraregione. L'attività di laboratorio abbraccia tre distinti aspetti: 1. Manipolazione cellule staminali per uso clinico 2. Analisi molecolare di chimerismo 3. Diagnostica cellulare, molecolare ed enzimatica di malattia
La manipolazione delle cellule staminali per uso clinico Pagina 4 di 11 Dal 1990 sono stati realizzati 130 trapianti autologhi e più di 460 trapianti di midollo osseo da donatore allogenico nei quali sono inclusi numerosi bambini affetti da immunodeficienze primitive. Il laboratorio realizza procedure di selezione di cellule staminali da donatore compatibile familiare, donatore compatibile da Registro Internazionale e da familiare parzialmente identico. Nel 1996 è stato realizzato il primo trapianto in utero al mondo e da allora sono stati realizzati 7 trapianti prenatali di cellule staminali in bambini affetti da immunodeficienza combinata grave e da osteogenesi imperfetta. Analisi molecolare di chimerismo Il successo della procedura trapiantologica accanto ai dati clinici necessita di conferme di laboratorio che si avvalgono di sofisticate tecnologie molecolari. Il chimerismo donatore-ricevente riconosce quante e quali cellule del donatore sono attecchite e quindi danno un importante informazione al clinico sull andamento del trapianto. Vengono eseguite analisi molecolari su DNA estratto dalle cellule dei pazienti a vari tempi dal trapianto e dopo averle separate immunologicamente per analizzare una specifica sottopopolazione cellulare. Diagnostica cellulare, molecolare ed enzimatica di malattia Il laboratorio esegue tests diagnostici per l evidenziazione di bambini affetti da malattia granulomatosa cronica (CGD) e di SCID da deficit di Adenosin Deaminasi (ADA) o da deficit di Purin Nucleoside Fosforilasi (PNP). La diagnosi cellulare di CGD avviene con due metodi, stimolando in vitro e colorando i granulociti neutrofili con colorazioni vitali specifiche che evidenziano la capacità o meno degli stessi a fagocitare e distruggere germi e microorganismi, o mediante citofluorimetria. La diagnosi molecolare X- linked o autosomica recessiva di Malattia Granulomatosa Cronica conferma la diagnosi cellulare. Le diagnosi di SCID con deficit di ADA o PNP viene realizzata mediante spettrofotrometria con un dosaggio di tipo enzimatico e confermata da analisi molecolare mediante sequenziamento degli esoni potenzialmente interessati dalle mutazioni. Inoltre vengono analizzati i metaboliti tossici dell Adenosin Deaminasi (Dosaggio di nucleotidi di Adenosina e Desossiadenosina) che sono sempre presenti alla diagnosi. Questo test indica l andamento della malattia e viene effettuato anche dopo trapianto di midollo osseo per valutare la detossificazione del paziente e quindi il miglioramento progressivo dettato dal trapianto stesso; inoltre il test viene effettuato anche in corso di terapia enzimatica sostitutiva con Peg-ADA insieme al Dosaggio enzimatico di Adenosin Deaminasi (ADA) nel plasma e alla Riceca Anticorpi anti-ada nel plasma. Vengono inoltre eseguiti tests di funzionalità cellulare come la capacità di proliferazione e maturazione delle cellule midollari in pazienti con malattie ematologiche ed aplasie midollari.
Pagina 5 di 11 Una buona qualità della fase analitica di tutti i processi diagnostici è molto dipendente anche dall accuratezza della fase preanalitica e dalla collaborazione tra il Laboratorio e gli operatori sanitari. Il Medico Curante assume, nella fase preanalitica (informazione e preparazione del paziente istruzioni per la raccolta e la conservazione dei campioni biologici, trasporto), un ruolo assai importante poiché la corretta esecuzione di tale fase garantisce attendibilità ed affidabilità alla fase analitica vera e propria. Al fine quindi di ottimizzare e migliorare la qualità dei processi diagnostici abbiamo voluto predisporre queste pagine informative che comprendono: - elenco indagini richiedibili - modalità di raccolta e conservazione di alcuni campioni clinici - informazioni su nuove indagini e loro interpretazione La presente guida ha lo scopo di fornire agli utenti informazioni riguardanti: 1. Le indagini eseguite 2. Le modalità di richiesta e trasporto dei campioni 3. I tempi di refertazione
Pagina 6 di 11 Ogni esame ha dei giorni specifici di accettazione come riportato in tabella 1. Gli esami contrassegnati da * devono essere accompagnati da un controllo sano di eguale quantità. L esame 15022 e 5022 per gli esterni, contrassegnato da **, deve essere accompagnato dal prelievo della mamma. Per quanto riguarda i tests che vengono eseguiti per la Manipolazione di Cellule Staminali ai fini del trapianto, l accettazione avviene tutti i giorni ed in qualsiasi orario. PRELIEVI PROVENIENTI DALL INTERNO DELLA STRUTTURA Per i Reparti collegati al Sistema Informatico dei laboratori i campioni devono essere identificati dall etichetta prodotta dal sistema informatico presente nel reparto ed inviati in laboratorio accompagnati dalla bolla di consegna recante lo stato trasferito. Per i Reparti non collegati al Sistema Informatico dei laboratori i campioni devono essere identificati dall etichetta fornita al reparto dall Accettazione Amministrativa al momento del ricovero e devono essere accompagnati dal relativo modulo di richiesta analisi fornito dal laboratorio. PRELIEVI PROVENIENTI DA ALTRE STRUTTURE OSPEDALIERE Per i tests provenienti da altre Aziende Ospedaliere è necessario prendere accordi telefonici con il laboratorio precedentemente al giorno del prelievo al paziente, in modo tale da poter fornire le indicazioni necessarie per le modalità di trasporto e di richiesta. In ogni caso il prelievo deve essere accompagnato dalla richiesta della Direzione Sanitaria dell Azienda Ospedaliera dove il paziente effettua il prelievo e da un modulo di richiesta dell Azienda Ospedaliera Spedali Civili di Brescia TIMBRATO E FIRMATO dove deve essere chiaramente specificato il nome del medico richiedente, numero di fax e indirizzo dove successivamente verranno inviati i referti.
Pagina 7 di 11 I campioni devono arrivare in laboratorio entro le 10.30. Eventuali ritardi devono essere comunicati tempestivamente al laboratorio. Il personale del laboratorio è disponibile per informazioni e chiarimenti ai seguenti recapiti: SEGRETERIA: 0 399 6284 LABORATORIO: 0 399 6283 STUDIO: 0 399 6977 / 6285 Il Servizio è operativo dalle ore 8-8.30 alle ore 17-17.30 dal lunedì al venerdì.
Pagina 8 di 11 Cod. Analisi Nome su referto Giorni di refertazione Giorni di accettazione Modalità di trasporto Tipo contenitore 15001 Diagnosi Molecolare di Deficit di ADA 15 Lun Mart Merc Giov T.A. P. tappo Arancio Litio Eparina 4.5mL 15008 Analisi Quantitativa di Chimerismo su Linfociti Totali (PBL) 5 Lun Giov T.A. P. tappo Arancio Litio Eparina 4.5mL 15009 Analisi Quantitativa di Chimerismo su T Linfociti (CD3+) 5 Lun Giov T.A. P. tappo Arancio Litio Eparina 4.5mL 15010 Analisi Quantitativa di Chimerismo su B Linfociti (CD19+) 5 Lun Giov T.A. P. tappo Arancio Litio Eparina 4.5mL 15011 Analisi Quantitativa di Chimerismo su Monociti (CD14+) 5 Lun Giov T.A. P. tappo Arancio Litio Eparina 4.5mL 15012 Analisi Quantitativa di Chimerismo su Natural Killer (CD56+) 5 Lun Giov T.A. P. tappo Arancio Litio Eparina 4.5mL 15013 Analisi Quantitativa di Chimerismo su Polimorfonucleati (PMN) 5 Lun Giov T.A. P. tappo Arancio Litio Eparina 4.5mL 15014 Deplezione Plasma 1 Tutti i giorni lavorativi 18-24 C Sacca prelievo 15015 Deplezione Globuli Rossi 1 Tutti i giorni lavorativi 18-24 C Sacca prelievo 15016 Selezione Positiva per CD34+ 1 Tutti i giorni lavorativi 18-24 C Sacca prelievo 15017 Criopreservazione di Cellule Staminali Midollari 1 Tutti i giorni lavorativi 18-24 C Sacca prelievo 15018 Criopreservazione di Cellule Staminali Periferiche 1 Tutti i giorni lavorativi 18-24 C Sacca prelievo 15020 Criopreservazione di Sospensione Linfocitaria 1 Tutti i giorni lavorativi 18-24 C Sacca prelievo P. tappo Arancio Litio Eparina 15021 Scongelamento/Lavaggio DMSO Cellule Staminali Midollari Crio 1 Tutti i giorni lavorativi In Azoto Sacca prelievo 15022 Analisi di Engraftment Materno** 5 Lun Giov T.A. P. tappo Arancio Litio Eparina 4.5mL 3102 NBT Test * 2 Mart Merc 18-24 C P. tappo Arancio Litio Eparina 4.5mL 3104 Dosaggio Enzimatico di Adenosin Deaminasi (ADA) * 2 Mart Merc T.A. P. tappo Rosso EDTA 2.7mL 3105 Dosaggio Enzimatico di Purin Nucleoside Fosforilasi (PNP) * 2 Mart Merc T.A. P. tappo Rosso EDTA 2.7mL 3122 Coltura Semisolida di cellule emopoietiche 16 Tutti i giorni lavorativi 18-24 C Siringa eparinata 3188 Test Diidrorodamina, 123 DHR * 2 Mart Merc 18-24 C P. tappo Arancio Litio Eparina 4.5mL 3280 Numerazione CD34+ 1 Tutti i giorni lavorativi 18-24 C P. tappo Rosso EDTA 2.7mL
Pagina 9 di 11 15023 Dosaggio dei nucleotidi di Adenosina e desossiadenosina 2 Lun Mart Merc Giov In ghiaccio P. tappo Rosso EDTA 2.7mL 150 Dosaggio di Adenosin Deaminasi (ADA) nel plasma 3 Mart Merc T.A. P. tappo Rosso EDTA 2.7mL 151 Diagnosi Molecolare stato di portatore Deficit di ADA*** 15 Lun Mart Merc Giov T.A. P. tappo Rosso EDTA 2.7mL 152 Ricerca Anticorpi Anti-ADA nel plasma*** 7 Mart Merc T.A. P. tappo Rosso EDTA 2.7mL 15040 Diagnosi Molecolare di Deficit di PNP*** 15 Lun Mart Merc Giov T.A. P. tappo Rosso EDTA 2.7mL 15041 Diagnosi Molecolare stato di portatore Deficit di PNP*** 15 Lun Mart Merc Giov T.A. P. tappo Rosso EDTA 2.7mL 15050 Diagnosi Molecolare stato di portatore di CGD*** 10 Lun Mart Merc Giov T.A. P. tappo Rosso EDTA 2.7mL 15051 Diagnosi Molecolare di CGD*** 25 Lun Mart Merc Giov T.A. P. tappo Arancio Litio Eparina 4.5mL 15052 Scongelamento sospensioni cellulari 2 Tutti i giorni lavorativi In Azoto Sacca prelievo 15053 Deplezione TcR alfa/beta e CD19+ 2 Tutti i giorni lavorativi 18-24 C Sacca prelievo * gli esami devono essere accompagnati da un controllo sano di eguale quantità. ** gli esami devono essere accompagnati dal prelievo della mamma. *** gli esami saranno presto disponibili anche per UTENTI ESTERNI ( non ricoverati).
Pagina 10 di 11 Cod. Analisi Descrizione Esame Giorni di refertazione Tariffa (euro) Giorni di accettazione Modalità di trasporto Tipo contenitore 1102 NBT Test * 2 52,25 Mart Merc 18-24 C P. tappo Arancio Litio Eparina 4.5mL 1104 Dosaggio Enzimatico di Adenosin Deaminasi (ADA) 2 31,10 Mart Merc 18-24 C P. tappo Rosso EDTA 2.7mL 1105 Dosaggio Enzimatico di Purin Nucleoside Fosforilasi (PNP) 2 31,10 Mart Merc 18-24 C P. tappo Rosso EDTA 2.7mL 1188 Test Diidrorodamina, 123 DHR * 2 52,25 Mart Merc 18-24 C P. tappo Arancio Litio Eparina 4.5mL 5001 Diagnosi Molecolare di Deficit di ADA 15 2421,00 Lun Mart Merc Giov T.A. P. tappo Arancio Litio Eparina 4.5mL 5011 Analisi Quantitativa di Chimerismo su Monociti (CD14+) 5 354,85 Lun Giov T.A. P. tappo Arancio Litio Eparina 4.5mL 5012 Analisi Quantitativa di Chimerismo su Natural Killer (CD56+) 5 345,85 Lun Giov T.A. P. tappo Arancio Litio Eparina 4.5mL 5013 Analisi Quantitativa di Chimerismo su Polimorfonucleati (PMN) 5 196,00 Lun Giov T.A. P. tappo Arancio Litio Eparina 4.5mL 5008 Analisi Quantitativa di Chimerismo su Linfociti Totali (PBL) 5 274,05 Lun Giov T.A. P. tappo Arancio Litio Eparina 4.5mL 5009 Analisi Quantitativa di Chimerismo su T Linfociti (CD3+) 5 345,85 Lun Giov T.A. P. tappo Arancio Litio Eparina 4.5mL 5010 Analisi Quantitativa di Chimerismo su B Linfociti (CD19+) 5 196,00 Lun Giov T.A. P. tappo Arancio Litio Eparina 4.5mL 5022 Analisi di Engraftment materno ** 5 599,85 Lun Giov T.A. P. tappo Arancio Litio Eparina 4.5mL 5023 Dosaggio dei nucleotidi di Adenosina e desossiadenosina 2 20,05 Lun Mart Merc Giov In ghiaccio P. tappo Rosso EDTA 2.7mL 1122 Coltura Semisolida di precursori emopoietici (CFU) 16 379.08 Tutti i giorni lavorativi 18-24 C Siringa eparinata 3280 Numerazione CD34+ 1 53.85 Tutti i giorni lavorativi 18-24 C P. tappo Rosso EDTA 2.7mL 50 Dosaggio di Adenosin Deaminasi (ADA) nel plasma 3 11.05 Mart Merc T.A. P. tappo Rosso EDTA 2.7mL * gli esami devono essere accompagnati da un controllo sano di eguale quantità. ** gli esami devono essere accompagnati dal prelievo della mamma.
Pagina 11 di 11 Gli utenti e i professionisti possono scriverci al seguente indirizzo di posta elettronica: oppure possono contattare telefonicamente il nostro personale: RESPONSABILE: Dott.ssa Arnalda Lanfranchi 0 399 6977 BIOLOGO DIRIGENTE: Dott.ssa Federica Bolda 0 399 6283/6977 TECNICI DI LABORATORIO: Sig.ra Renata Baffelli 0 399 6283 Sig.ra Michela Zucchi 0 399 6283 Sig.ra Samanta Villanova 0 399 6283 CONTRATTISTA: Dott.ssa Alessandra Beghin (Biologo Contrattista Ospedaliero) 0 399 6283/5 SEGRETARIA: Sig.ra Melania Mondini 0 399 6284