GENERALE LABORATORIO di BOTANICA A cura di: AM. Guagliardi Responsabile Laboratori didattici M. Improta, G. Migliaccio - Responsabili tecnici del Laboratorio didattico i docenti di Botanica: G. Pinto, A. Pollio
Sommario 1. Laboratorio I - Osservazioni di Citologia vegetale 2 1.1. I plastidi 2 1.1.1. I cloroplasti in cellule di Elodea canadensis 2 1.1.2. I cloroplasti e cromoplasti in cellule di peperone. 2 1.1.3. Cromoplasti della carota 4 1.1.4. Gli amiloplasti della patata 5 1.1.5. I pigmenti del vacuolo 5 1.2. Vacuolo e fenomeni osmotici 6 1
1. LABORATORIO I - OSSERVAZIONI DI CITOLOGIA VEGETALE Materiali necessari per le osservazioni: - campioni vegetali - pipette pasteur in plastica - contenitore d acqua da 25-50ml - carta assorbente - pinzette - lamette da barba nuove - vetrini porta e coprioggetto - microscopio ottico - vetrini d orologio - coloranti 1.1. I plastidi 1.1.1. I cloroplasti in cellule di Elodea canadensis Osserviamo una foglia di Elodea canadensis. Si tratta di una pianta acquatica di piccole dimensioni, le cui foglie sono così sottili da potere essere osservate al m.o. senza che sia necessario sezionarle. Prendere con una pinzetta un intera fogliolina, poggiarla sul vetrino porta oggetto, aggiungere una goccia d acqua e Elodea canadensis 10 x 2
coprire con il vetrino corpi oggetto Osserva il preparato con l obiettivo 5X, 10 X e infine con quello 40 X Fai un disegno schematico di una cellula di E. canadensis, evidenziando il contorno della cellula (parete) e i plastidi in essa contenuti. Elodea canadensis 20x 1.1.2. I cloroplasti e cromoplasti in cellule di peperone. (Per i dettagli riguardanti la preparazione delle sezioni a fresco di campioni vegetali, consulta l allegato I). Preparazione di una sezione di un frutto di peperone (Capsicum annuum) verde e di uno rosso, a. esegui una serie di sezioni trasversali in un punto in cui il frutto del peperone si presenta di colore verde. b. Poni la/le più sottili sezioni che hai ottenuto sul vetrino portaoggetti, aggiungi un paio di gocce d acqua. c. Poggia un lato del vetrino copri oggetto a sinistra o a destra della sezione tenendo il vetrino ad un angolo di circa 45 d. Abbassa lentamente il vetrino copri oggetto sul preparato. Il copri oggetto appiattisce la tua sezione, la mantiene umida e protegge le lenti degli obiettivi. Sezione di peperone verde 10 x Sezione di peperone rosso 10 x 3
Osserva i preparati ai tre ingrandimenti, e fai un disegno schematico dei particolari che ritieni fondamentali 1.1.3. Cromoplasti della carota 1.Osserva ora una campione di radice di Daucus carota, la carota, ottenuto effettuando una sezione molto sottile, con l aiuto della lametta. 2.Osserva i preparati nel modo consueto, e fai un disegno schematico dei particolari che ritieni fondamentali. Che differenze osservi rispetto alla precedente osservazione effettuata sulla sezione di peperone rosso? Sezione di carota 10 x Sezione di carota 20 x Osserva i preparati ai tre ingrandimenti, e fai un disegno schematico dei particolari che ritieni fondamentali 4
1.1.4. Gli amiloplasti della patata 1.prepara ora una sezione da un campione patata, Solanum tuberosum, sempre con l aiuto di una lametta. 2.Osserva i preparati nel modo consueto, e fai un disegno schematico dei particolari che ritieni fondamentali. Sezione di tubero di patata 10x 3.Aggiungi ora una goccia di colorante (lugol) e ripeti le osservazioni Sezione di tubero di patata colorata con lugol 10x 1.1.5. I pigmenti del vacuolo Pigmenti vacuolari: A differenza di quanto accade nel cromoplasto, in cui troviamo pigmenti liposolubili, il vacuolo contiene pigmenti idrosolubili. 1. Utilizzando la pinzetta, effettua una spellatura del petalo di camelia, Camelia sinensis, e asportane un piccolo pezzo. 2. Poggiala con delicatezza sul vetrino copri oggetto, cercando di evitare che si arrotoli. Aggiungi una goccia d acqua e copri il campione con il vetrino copri oggetto. Spelatura di petali di camelia 10 x 5
3. Osserva il campione ai tre ingrandimenti (5x, 10x e 40x). Individui le stesse strutture interne che hai visto nella foglia di Elodea? Quali sono le principali differenze che riscontri? Quali strutture sono particolarmente evidenti? Riesci a distinguere il vacuolo? 4. Osserva come le cellule siano al loro interno colorate intensamente. Il colore è impartito dalle antocianine, pigmenti idrosolubili contenuti nel vacuolo, che occupa gran parte del volume cellulare. Sezione di petali di camelia 40x 1.2. Vacuolo e fenomeni osmotici Possiamo evidenziare la presenza del vacuolo studiando il fenomeno dell osmosi utilizzando proprio il petalo di camelia. 1. Adoperando la pinzetta, effettua una spellatura del petalo di camelia e asportane un piccolo pezzo. 2. Aggiungi con la pipetta Pasteur tre gocce di una soluzione al 10% di saccarosio. Hai creato un ambiente ipertonico all esterno della cellula. 3. Effettua le tue osservazioni ad ingrandimenti crescenti dopo 5 min. dall aggiunta della soluzione di saccarosio. Spelatura di petali di camelia in soluzione ipertonica 10 x Spelatura di petali di camelia in soluzione ipertonica 40 x 6