KIT Le analisi cromosomiche

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Gianpaolo Sorrentino
9 anni fa
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1 KIT Le analisi cromosomiche

2 MATERIALE NEL KIT - un fascicolo con schede e foto di cromosomi metafisici per gli esercizi (da scaricare dal sito internet del CusMiBio) - 2 provette da 1,5 ml contenenti preparati cromosomici fissati in metafase da conservare in freezer - una scatola contenente vetrini porta oggetti - una scatola contenente vetrini copri oggetti - reagente per la colorazione (blu di metilene 0,05%) - 2 micropipette da 20 microlitri - 2 scatole di puntali per micropipette Il materiale scritto in grassetto va riconsegnato al CusMiBio. Il materiale restituito verrà controllato alla consegna. I costi di eventuali rotture, manomissioni o strumentazione mancante saranno a carico della scuola.

3 MATERIALE NECESSARIO A SCUOLA - laboratorio o aula con tavoli/banconi - microscopi ottici con obiettivi 4x, 10x e 40x - videoproiettore - contenitori per rifiuti - matite e pennarelli TEMPO RICHIESTO circa 1,5-2 ore

4 Allestimento del materiale Disporre sul banco da lavoro il materiale in modo che gli studenti lavorino in due gruppi. Ogni postazione deve essere così costituita: 1 vetrino coprioggetti e portaoggetti per studente 1 micropipetta da 20 microlitri 1 provette contenente la sospensione cellulare 1 falcon contenente blu di metilene microscopi ottici inoltre sul banco di lavoro dovranno essere presenti un contenitore dei rifiuti, una scatola di puntali, matite e pennarelli

5 Procedimento Uso micropipetta Illustrare la portata massima di 20 e minima di 2 microlitri; oltre questi valori la micropipetta si rompe Mostrare ai ragazzi come si imposta il volume girando la rotella in alto, se si ruota verso sinistra il volume aumenta, al contrario se si ruota a destra il volume diminuisce. Impostare lo strumento su 5 microlitri, stando molto attenti al decimale dopo la virgola Mostrare ai ragazzi come si inserisce il puntale sulla punta della micropipetta semplicemente appoggiando lo strumento sul puntale e facendo una leggera pressione Spiegare come si preleva un volume. Fare una leggera pressione sulla rotella usata per l impostazione del volume fino a quando non si percepisce una resistenza, mantenendo abbassata la rotella inserire la punta del puntale dentro il volume da prelevare ( per esempio si può usare la provetta contenente acqua) e a questo punto lasciare andare il dito accompagnando la rotella verso l alto. Espellere il puntale nel contenitore dei rifiuti usando l apposito pulsante situato in alto sullo strumento

6 LE FASI DELLA ATTIVITA Consegnare ad ogni ragazzo un vetrino sul quale scriverà con la matita il proprio nome sulla banda sabbiata Prendere dal freezer la sospensione cellulare e risospendere accuratamente il contenuto picchiettando sul fondo della provetta Prelevare 5 microlitri della sospensione cellulare e metterli al centro del vetrino portaoggetti; eliminare il puntale nel contenitore per i rifiuti Fare evaporare il fissativo lasciando il vetrino all aria per pochi minuti Prelevare 10 microlitri di blu di metilene e metterli al centro del vetrino portaoggetti; eliminare il puntale nel contenitore per i rifiuti Coprire con il coprioggetti cercando di evitare la formazione di bolle di aria Osservare le metafasi al microscopio fino ad un ingrandimento 40x

7 Ingrandimento 40x

9 Cariotipo normale o patologico? Alla fine della attività pratica consegnare le immagini dei cariotipi da analizzare Come interpretare le immagini: Femmina normale 46 cromosomi (XX) Cromosomi acrocentrici corti: 4 ^ ^ ^ ^ Maschio normale 46 cromosomi (XY) Cromosomi acrocentrici corti: 5 ^ ^ ^ ^ ^ Y

10 Cariotipi patologici Down 47 cromosomi (XX) Cromosomi acrocentrici corti: 5 ^ ^ ^ ^ ^ Down 47 cromosomi (XY) Cromosomi acrocentrici corti: 6 ^ ^ ^ ^ ^ ^ Y Klinefelter 47 cromosomi (XXY) Cromosomi acrocentrici corti: 5 ^ ^ ^ ^ ^ Y XYY 47 cromosomi (XYY) Cromosomi acrocentrici corti: 6 ^ ^ ^ ^ ^^ YY

11 Le analisi cromosomiche Ogni specie è caratterizzata da un un insieme di cromosomi, il cui numero e struttura si mantengono costanti attraverso le generazioni Lo studio dei cromosomi costituisce una branca della genetica chiamata citogenetica

12 Perché studiare i cromosomi? Patologia cromosomica Nelle cellule tumorali sono presenti anomalie cromosomiche Studio della struttura e funzione dei cromosomi

13 Analisi del cariotipo umano in laboratorio Seminare le cellule Coltura in un terreno di crescita Aggiungere una sostanza che stimoli la mitosi (PHA) Incubare per 2-3 giorni Aggiungere una sostanza che blocchi le mitosi in metafase (colchicina) Trasferire le cellule in provetta e centrifugare per concentrare le cellule sul fondo Strisciare le cellule sul vetrino portaoggetti Trasferire nella provetta che contiene il Ritagliare i cromosomi e ordinarli ricostruendo il cariotipo Identificare e fotografare i cromosomi Aggiungere il colorante (Giemsa) fissativo

14 Patologia cromosomica 1. ANOMALIE DEL NUMERO ANEUPLOIDIE e POLIPLOIDIE 2. ANOMALIE DELLA STRUTTURA MUTAZIONI CROMOSOMICHE ALTERAZIONI DEL DOSAGGIO GENICO LETALITA PRE- o POST- NATALE ANOMALIE FENOTIPICHE

15 ANEUPLOIDIE VITALI NELL UOMO e PATOLOGIE ASSOCIATE AUTOSOMI CROMOSOMI DEL SESSO CARIOTIPO SINDROME TIPO DI ANEUPLOIDIA CARIOTIPO SINDROME TIPO DI ANEUPLOIDIA 47,XX o XY Patau trisomia 45,X0 Turner monosomia 47,XX o XY Edwards trisomia 47,XXX 48,XXXX trisomia tetrasomia 47,XX o XY Down trisomia 47,XXY 48,XXXY Klinefelter trisomia tetrasomia 47,XYY Doppio Y trisomia

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