Malattia di Schmallemberg in tempo di pace BLUE TONGUE, MALATTIA DI SCHMALLEMBERG E MAEDI VISNA: TRA EPIDEMIE, RICERCA E REGOLAMENTI.

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1 Malattia di Schmallemberg in tempo di pace BLUE TONGUE, MALATTIA DI SCHMALLEMBERG E MAEDI VISNA: TRA EPIDEMIE, RICERCA E REGOLAMENTI. Sala Convegni Promocamera Sassari - 8 Luglio 2016

2 Schmallenberg virus (SBV) Famiglia Bunyaviridae Genere Orthobunyavirus Sierogruppo Simbu (AKABANE, AINO, etc.) Specie Sathuperi Culicoides Obsoletus complex e Culicoides dewulfi Sono considerati attualmente i principali vettori di SBV

3 Schmallenberg virus (SBV) Virus ad RNA ss Il genoma è formato da 3 segmenti: S, M e L che codificano per almeno 5 proteine. L-segment: RNA polimerasi Rna dipendente, 69% omologia con Akabane virus M-segment: proteine di superficie GN e GC che costituiscono determinanti antigenici responsabili dell attachment e fusion virale, della produzione di AC neutralizzanti e dell emoagglutinazione; 71% homology with Aino virus S-segment: proteina nucleocapsidica N; 97% homology with Shamonda virus

4 SBV colpisce i bovini, ovi-caprini e ruminanti selvatici Breve viremia = 3-6 giorni Ipertermia, diminuzione della produzione lattea e diarrea sono i principali sintomi riscontabili negli animali adulti. Capacità di superare la barriera placentare determinando aborti, nati morti o poco vitali con caratteristiche malformazioni congenite come artrogriposi, deviazioni della colonna vertebrale e difetti del SNC.

5 Distribuzione geografica di SBV in Europa nel

6 Distribuzione regionale dei focolai di SBV in Italia nel corso dell epidemia del Nel corso dell Ottobre 2011, SBV è stato riscontrato per la prima volta in Italia nella regione del Veneto. SBV è comparso per la prima volta in Sardegna alla fine del Segnalati oltre l 80% dei focolai di SBV in Italia.

7 PATOGENESI DI SBV CORRELATA A QUELLA DEGLI ALTRI ORTHOBUNYAVIRUS (AKABANE VIRUS) 28 days 29/69 days 91/150 days RIASSORBIMENTO FETALE EFFETTO TERATOGENO IMMUNITA INNATA = RESISTENZA

8 STAGIONALITA DELLA RIPRODUZIONE NEGLI OVINI IN SARDEGNA PECORE ADULTE (PLURIPARE) MAGGIO GIUGNO LUGLIO AGOSTO SETTEMBRE OTTOBRE NOVEMBRE DICEMBRE PECORE GIOVANI (PRIMIPARE) AGOSTO SETTEMBRE OTTOBRE NOVEMBRE DICEMBRE GENNAIO FEBBRAIO MARZO

9 COSA è SUCCESSO IN SARDEGNA NEL CORSO DELL EPIDEMIA DI SBV NEL 2012/2013? CIRCOLAZIONE DI SBV AGOSTO SETTEMBRE ACCOPPIAMENTO ANIMALI ADULTI INFEZIONE ANIMALI ADULTI E GIOVANI ACCOPPIAMENTO ANIMALI GIOVANI PARTI DEGLI ANIMALI ADULTI PARTI DEGLI ANIMALI GIOVANI SBV è stato segnalato in Sardegna nel Novembre-Dicembre 2012.

10 Principali lesioni dell infezione da SBV: Artrogriposi, Torcicollo e Brachignatia inferioriore 10

11 Principali lesioni dell infezione da SBV: Artrogriposi, Torcicollo e Brachignatia inferioriore

12 Principali lesioni dell infezione da SBV: Artrogriposi, Torcicollo e Brachignatia inferioriore

13 Principali lesioni dell infezione da SBV: Malformazioni del cranio e deviazione del setto nasale

14 Principali lesioni dell infezione da SBV: Idrocefalo, Poroencefalia e Ipoplasia cerebellare 14

15 Principali lesioni dell infezione da SBV: Micromielia Control SBV

16 Frequenza delle principali lesioni dell infezione da SBV

17 qrt-pcr su cervello e milza di agnelli malformati qrt-pcr Solo Cervello POS Cervello e Milza POS Solo Milza POS qrt-pcr NEG Il genoma SBV è stato riscontrato nel 73% degli agnelli con malformazioni analizzati. 17

18 qrt-pcr su organi di 15 agnelli malformati Organo Cervello Milza Cuore Rene Fegato Polmone Abomaso Timo Placenta Sangue Vello Cordone ombelicale Il genoma SBV è stato riscontrato nei diversi organi dei 15 agnelli con malformazioni analizzati. Il polmone è risultato il 2 organo di elezione per la ricerca del virus dopo il cervello

19 Follow-up Sierologico e Virologico in n.5 greggi ovini focolai di SBV Nelle greggi oggetto dello studio la sieroprevalenza variava dal 23.9% al 73.8%, mentre l incidenza degli agnelli nati con malformazioni variava tra il 3% ed il 19% (media 10%) Metodi 4 Gruppi di studio in ciascun gregge Pecore giovani primipare (n. 10) Pecore adulte Multipare con agnelli malformati (n. 10) Pecore adulte Multipare con agnelli sani (n. 10) Agnelli nati in Dicembre 2012 (n. 10) ELISA e Sieroneutralizzazione, qrt-pcr per la ricerca di SBV RNA

20 Gregge 1 Sieroneutralizzazione per la ricerca di anticorpi contro SBV (% degli animali positivi) nelle aziende focolaio nel corso dell epidemia del Gregge qrt-pcr sempre negativa per SBV! Pecore giovani primipare (n. 10) Pecore adulte Multipare con agnelli malformati (n. 10) Pecore adulte Multipare con agnelli sani (n. 10) Agnelli nati in Dicembre 2012 (n. 10) 2013

21 Gregge 3 Sieroneutralizzazione per la ricerca di anticorpi contro SBV (% degli animali positivi) nelle aziende focolaio nel corso dell epidemia del Gregge qrt-pcr sempre negativa per SBV! Pecore giovani primipare (n. 10) Pecore adulte Multipare con agnelli malformati (n. 10) Pecore adulte Multipare con agnelli sani (n. 10) Agnelli nati in Dicembre 2012 (n. 10) 2013

22 Gregge 5 Sieroneutralizzazione per la ricerca di anticorpi contro SBV (% degli animali positivi) nelle aziende focolaio nel corso dell epidemia del qrt-pcr sempre negativa per SBV! Pecore giovani primipare (n. 10) Pecore adulte Multipare con agnelli malformati (n. 10) Pecore adulte Multipare con agnelli sani (n. 10) Agnelli nati in Dicembre 2012 (n. 10)

23 Schmallenberg ha continuato a circolare in Sardegna dopo l epidemia del 2012? 1) Indagine sierologica sul territorio 2) Sorveglianza entomologica 3) Sorveglianza clinica passiva 4) Sequenziamento del virus che ha circolato in Sardegna Ricerca Corrente IZS SA 01/12 RC

24 1)Indagine sierologica sul territorio Nel corso dei 3 anni successivi Sono state selezionate n.99 aziende in Sardegna con modalità Random 20 aziende sede di focolaio nel aziende ricadenti nel raggio di 4 Km dai focolai 45 aziende presenti sul resto del territorio regionale Scelta degli animali 2013: Adulti nati prima del 2012 (prima dell epidemia) Giovani nati nel periodo Novembre-Dicembre 2012 (durante l epidemia) 2014: Giovani nati nel periodo Novembre-Dicembre 2013 (1 anno dopo l epidemia) 2015: Giovani nati nel periodo Novembre-Dicembre 2014 (2 anni dopo l epidemia) Ricerca anticorpi tramite test ELISA e Sieroneutralizzazione

25 TIPOLOGIA AZIENDE N GREGGI ESAMINATI GREGGI CON ANIMALI ADULTI POSITIVI A SBV GREGGI CON ANIMALI GIOVANI POSITIVI A SBV (NATI IN NOVEMBRE 2012) AZIENDE FOCOLAIO NEL AZIENDE NEL BUFFER DI 4 KM AZIENDE NEL RESTO DEL TERRITORIO TOTALE (97%) 14 (35%) TIPOLOGIA AZIENDE N GREGGI ESAMINATI GREGGI CON ANIMALI GIOVANI POSITIVI A SBV (NATI IN NOVEMBRE 2013) AZIENDE FOCOLAIO NEL AZIENDE NEL BUFFER DI 4 KM 13 2 AZIENDE NEL RESTO DEL TERRITORIO 22 5 TOTALE 40 9 (23%) TIPOLOGIA AZIENDE N GREGGI ESAMINATI GREGGI CON ANIMALI GIOVANI POSITIVI A SBV (NATI IN NOVEMBRE 2014) AZIENDE FOCOLAIO NEL AZIENDE NEL BUFFER DI 4 KM 6 4 AZIENDE NEL RESTO DEL TERRITORIO 1) Indagine sierologica sul territorio RISULTATI INDAGINE SIEROLOGICA 2013 RISULTATI INDAGINE SIEROLOGICA 2014 RISULTATI INDAGINE SIEROLOGICA TOTALE 19 9 (47%)

26 BLACK LIGHT TRAP 2) Sorveglianza entomologica SASSARI MORES DORGALI GIRASOLE Sono state sottoposte ad analisi biomolecolare per la ricerca del virus 2,058 femmine parous di C. imicola (107 pool), 1,277 di C. newsteadi (72 pool), 92 di Obsoletus complex (21 pool), 60 di C. punctatus (15 pool), 29 di C. pulicaris (16 pool), 37 di C. circumcriptus (12 pool) e 5 di C. paolae (5 pool). Tutti i campioni analizzati sono risultati negativi alla ricerca del virus.

27 3) Sorveglianza clinica passiva Successivamente all epidemia del 2012 sono stati riscontrati casi sporadici di agnelli nati morti con deformità ascrivibili ad infezione da SBV sia in pecore nate prima del 2012 che in quelle nate negli anni successivi. Tuttavia, tutti gli esami virologici eseguiti sono risultati sempre negativi per SBV.

28 4) Sequenziamento del virus che ha circolato in Sardegna Le analisi di Sequenziamento del Segmento S del virus SBV riscontrato in Sardegna hanno dimostrato diverse sostituzioni aminoacidiche, mentre l'analisi filogenetica ha mostrato che il virus SBV sardo clusterizza in un gruppo distinto rispetto ad altri isolati europei gi ref NC Shamonda virus N and NSs genes segment S genomic RNA isolate Ib An gi gb KC Schmallenberg virus isolate BH200/12-2 segment S nucleocapsid protein (N) gene complete cds gi gb KC Schmallenberg virus isolate BH198/12-5 segment S nucleocapsid protein (N) gene complete cds gi gb KC Schmallenberg virus isolate BH148/12-9 segment S nucleocapsid protein (N) gene complete cds gi gb KC Schmallenberg virus isolate BH77/12-1 segment S nucleocapsid protein (N) gene complete cds gi gb KC Schmallenberg virus isolate BH233/12-1 segment S nucleocapsid protein (N) gene complete cds gi gb KC Schmallenberg virus isolate BH231/12-1 segment S nucleocapsid protein (N) gene complete cds gi gb KC Schmallenberg virus isolate F6 segment S complete sequence gi gb JX Schmallenberg virus isolate Germany segment S complete sequence gi gb KP Schmallenberg virus isolate BH132/14 segment S nucleocapsid protein (N) and nonstructural protein (N) genes complete cds gi gb KP Schmallenberg virus isolate BH119/14-3/4 segment S nucleocapsid protein (N) and nonstructural protein (N) genes complete cds gi gb KP Schmallenberg virus isolate BH119/14-1/2 segment S nucleocapsid protein (N) and nonstructural protein (N) genes complete cds 33 gi gb KP Schmallenberg virus isolate BH652/12 segment S nucleocapsid protein (N) and nonstructural protein (N) genes complete cds gi gb KP Schmallenberg virus isolate BH619/12 segment S nucleocapsid protein (N) and nonstructural protein (N) genes complete cds gi gb KC Schmallenberg virus isolate BH652/12-1 segment S nucleocapsid protein (N) gene complete cds gi gb KC Schmallenberg virus isolate BH635/12-2 segment S nucleocapsid protein (N) gene complete cds gi gb KC Schmallenberg virus isolate BH619/12-1 segment S nucleocapsid protein (N) gene complete cds gi gb KC Schmallenberg virus isolate BH336/12-3 segment S nucleocapsid protein (N) gene complete cds gi gb KC Schmallenberg virus isolate BH248/12-1 segment S nucleocapsid protein (N) gene complete cds gi emb HE Schmallenberg virus genes for nucleocapsid protein and non-structural protein segment S genomic RNA isolate BH80/11-4 gi gb KP Schmallenberg virus strain SBV/2013/TR/Krkl.1 nucleocapsid (N) gene complete cds gi gb KC Schmallenberg virus isolate BH37/12-2 segment S nucleocapsid protein (N) gene complete cds gi gb KC Schmallenberg virus isolate BH02/12-1 segment S nucleocapsid protein (N) gene complete cds gi gb KP Schmallenberg virus isolate D495/12-1 segment S nucleocapsid protein (N) and nonstructural protein (N) genes complete cds gi gb KC Schmallenberg virus isolate BH336/12-1 segment S nucleocapsid protein (N) gene complete cds gi gb KC Schmallenberg virus isolate BH237/12-4 segment S nucleocapsid protein (N) gene complete cds 51 gi gb KC Schmallenberg virus isolate BH28/12-5 segment S nucleocapsid protein (N) gene complete cds / cuore 66370polmone 66370cervello 65871/9 gi gb KC Schmallenberg virus isolate HL1 segment S complete sequence gi gb KC Schmallenberg virus isolate BH199/12-5 segment S nucleocapsid protein (N) gene complete cds gi gb KC Schmallenberg virus isolate BH250/12-2 segment S nucleocapsid protein (N) gene complete cds gi gb KC Schmallenberg virus isolate BH174/12-2 segment S nucleocapsid protein (N) gene complete cds gi gb KC Schmallenberg virus strain Na1 isolate Na1-BHK21-P2 N protein and Nss protein genes complete cds 87 gi gb KC Schmallenberg virus strain Na1 isolate Na1-CNS N protein and Nss protein genes complete cds gi gb KC Schmallenberg virus strain Na1 isolate Na1-BHK21-P10 N protein and Nss protein genes complete cds gi gb KC Schmallenberg virus isolate BH127/12-16 segment S nucleocapsid protein (N) gene complete cds gi gb KC Schmallenberg virus isolate BH59/12-8 segment S nucleocapsid protein (N) gene complete cds gi gb KC Schmallenberg virus isolate BH03/12-3 segment S nucleocapsid protein (N) gene complete cds gi gb KC Schmallenberg virus strain Na2 isolate Na2-BHK21-P10 N protein and Nss protein genes complete cds gi gb KC Schmallenberg virus strain Na2 isolate Na2-BHK21-P2 N protein and Nss protein genes complete cds gi gb KC Schmallenberg virus strain Na2 isolate Na2-CNS N protein and Nss protein genes complete cds gi gb KC Schmallenberg virus isolate BH197/12-3 segment S nucleocapsid protein (N) gene complete cds 0.002

29 CONCLUSIONI Gli aspetti clinico-patologici riscontrati in Sardegna nel corso dell epidemia del 2012 sono simili a quanto osservato e descritto da altri autori nel resto dell Europa. SBV negli allevamenti ovini in Sardegna ha avuto un andamento stagionale con casi riscontrati nel periodo dei parti di Novembre-Dicembre (animali adulti) ma non durante la stagione invernale (animali giovani). Il cervello e, secondariamente, il polmone risultano gli organi d elezione per gli esami diagnostici diretti. L immunità passiva acquisita dagli agnelli attraverso il colostro dura fino alle prime 8 settimane.

30 CONCLUSIONI La prevalenza sierologica nel corso dell epidemia del 2012 negli allevamenti in Sardegna è stata quasi del 100%. L immunità acquisita durante l epidemia del 2012 si è dimostrata di lunga durata, come osservato nell indagine sierologica effettuata l anno successivo, giustificando i pochi casi riscontrati negli anni a seguire. I risultati sierologici relativi ai 3 anni di follow-up suggeriscono che SBV ha comunque circolato in Sardegna, anche se con un incidenza decrescente. Nel corso dell ultimo anno, tuttavia, l incidenza è aumentata, probabilmente in seguito all aumento anche delle popolazioni naïve.

31 CONCLUSIONI I risultati della sorveglianza entomologica rispecchiano l andamento clinico della malattia ed evidenziano, ancora una volta, la difficoltà di rilevare SBV nei vettori competenti. Durante la sorveglianza passiva, dal punto di vista diagnostico la ricerca del genoma di SBV in feti malformati fortemente sospetti d infezione è risultata in molti casi negativa, cosi ponendo seri problemi nella definizione di caso di malattia. I dati del sequenziamento dimostrano che gli isolati sono geneticamente omogenei e non si discostano da quelli presenti in altri paesi. Tuttavia permane una certa variabilità che non si presenta statisticamente significativa, ma suggerisce di approfondire le conoscenze al riguardo con ulteriori studi estesi ad altri tratti del genoma di SBV.

32 CONCLUSIONI Considerato l accertata circolazione SBV negli anni successivi al 2012, l overwintering di questo virus è un evento da considerare probabile. Infine, sulla base dei dati a disposizione, il reale impatto economico di SBV non può essere rigorosamente stimabile. Tuttavia, la stagionalità della malattia, il periodo di suscettibilità relativamente breve del feto, la possibilità delle pecore che partoriscono nati morti malformati di avere una normale lattazione, ed infine, la durevole immunità acquisita dopo l infezione naturale, suggerisce che SBV probabilmente non può essere causa di importanti danni economici nell allevamento ovino.

33 GRAZIE PER L ATTENZIONE! RINGRAZIAMENTI Ennio Bandino, Angelo Ruiu, Manuel Liciardi, Sandro Rolesu, Stefano Cappai, Ciriaco Ligios, Giantonella Puggioni, Giuseppe Satta, Silvia Dei Giudici, Paola Chironi, Pierpaolo Angioi, Anna Maria Sechi, Giannella Cancedda, Davide Pintus, Giorgio Meloni, Laura Boeddu, Salvatorina Carboni, Natascia Latte, Claudia Contu, Gavino Benenati, Giantonello Madau, Alberto Benech, Federica Monaco