LE PARASSITOSI GASTROINTESTINALI DEGLI SPARIDI

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1 LE PARASSITOSI GASTROINTESTINALI DEGLI SPARIDI Monica Caffara, Andrea Gustinelli & Marialetizia Fioravanti DIMEVET-ITT INTRODUZIONE Infezioni enteriche dell orata Enteromyxosi da Enteromyxum leei (Myxozoa) mortalità elevata, dimagrimento accentuato, peggioramento degli indici di conversione, perdite economiche Enterosporosi da (Microsporidia) agente eziologico della sindrome emaciativa dell orata Cryptosporidiosi da Cryptosporidium molnari (Apicomplexa) problema emergente in avannotteria 1

2 Enteromyxum spp. Myxozoa E. Leei E. scophthalmi E. fugu Labridae, Centracanthidae,, Mullidae, Pomacentridae, Scorpaenidae, Molidae, Blenniidae, Gobiidae Enteromyxum leei Puntazzo subacuta, soggetti < 80 g, comparsa dei sintomi qualche settimana/mese post-introduzione in gabbia, elevata mortalità (fino a 90-95%) Orata subcronica/cronica, soggetti > g, poco evidente in gabbia, più grave in vasca 20% mortalità, pesci taglia maggiore, se aumenta la temperatura anche soggetti più piccoli Spigola subclinica 2

3 Enteromyxum leei Ciclo biologico diretto (fish-to-fish) Spore Stadi presporogonici Ospiti alternati Enteromyxum leei Fattore critico temperatura dell acqua C ottimale > 20 C Stagione fredda manifestazioni cliniche assenti falsi negativi pesci positivi serbatoio Segni clinici Letargia Anoressia Scarsa conversione dell alimento, difficoltà di raggiungimento taglia commerciale Emaciazione atrofia dei muscoli epiassiali con aspetto a lama di rasoio (knife syndrome) Distensione addominale con procidenza anale 3

4 Enteromyxum leei Palenzuela IATS-CSIC Enteromyxum leei Quadro anatomopatologico Congestione focale dell intestino Assottigliamento della parete intestinale Contenuto intestinale giallastro di aspetto mucoso Riduzione del grasso periviscerale Organi pallidi 4

5 Enteromyxum leei - Diagnosi Esame microscopico ante-mortem (non letali) post-mortem Estrazione DNA + PCR/qPCR Enteromyxum leei - Diagnosi Esame istologico - ex gold standard Ibridazione in situ (ISH) Metodiche molecolari - gold standard Evidenza del DNA del parassita Studi sulle vie d entrata del parassita Evidenza di infezioni subcliniche Ricerca di ospiti invertebrati Evidenza di infezioni concomitanti con altri parassiti intestinali (multiplex-pcr) Potente mezzo di sorveglianza per testare i pesci di nuova introduzione 5

6 Enteromyxum leei Strategie di controllo (pesci nuova introduzione, disinfezione acqua, pratiche igienico-sanitarie appropriate, ecc.) Terapia Non esistono antiparassitari efficaci nei confronti di Myxozoa o Toltrazuril (prove in rombo, scarsa efficacia) o Salinomicina + Amprolium, riducono significativamente prevalenza, intensità e mortalità (prove in sarago e rombo) o Robenidina + Sulfamidici o diete supplementate con estratti naturali (aumento % sopravvivenza nel rombo) o Altri prodotti es. fumagillina: effetti tossici sull ospite o Estratti naturali / immunostimolanti / protettori mucosa intestinale (functional feeds) sembrano promettenti Microsporidia (Fungi), parassiti endocellulari obbligati Già descritti in diverse specie ittiche, alcuni generi/specie con elevata patogenicità Nell orata già descritti ma nessuno a localizzazione intestinale intranucleare E. nucleophila descritta in Spagna nel 2014 da Palenzuela et al. in orate allevate sia in gabbia sia a terra Colpiti i soggetti di peso < 100 g (nostre osservazioni: 3,5-110 g) 6

7 Spore ellissoidali, μm, tubo polare con 5-6 coils Plasmodi merogonici e sporogonici con 2 nuclei Localizzazione intranucleare negli enterociti e rodlet cells Fino a 16 spore nel nucleo della cellula ospite derivate da un singolo evento infettante Sviluppo asincrono delle spore con presenza di più di 40 spore nel citoplasma Sito primario intestino, raramente stomaco Ciclo biologico (?) 7

8 Segni clinici Crescita stentata Mortalità a stillicidio spt. durante il primo anno di produzioni (0,2-0,3% die ma per lunghi periodi) Letargia Emaciazione (emaciative syndrome) blocco della crescita (peso degli infetti anche < 50% rispetto ai non infetti) Feci biancastre Tipicamente durante l inverno Mortalità fino a 80% Quadro anatomopatologico Branchie e organi interni pallidi Emaciazione Melanosi Dilatazione dell intestino con contenuto mucoide giallastro 8

9 Diagnosi Esame microscopico a fresco del raschiato della mucosa intestinale complicato viste le ridotte dimensioni delle spore (<2 µm) Esame istologico PCR / qpcr (qualitativa) Cryptosporidium spp. 2 specie descritte finora nei pesci Cryptosporidium molnari (orata), C. scophthalmi (rombo) Localizzazione cellule epiteliali dello stomaco e raramente intestino (C. molnari) Sintomi clinici solo in caso di elevate intensità d infestazione Feci biancastre, distensione addominale e ascite Problema emergente in avannotteria C. molnari in avannotti e giovanili di orata Non ancora chiarito il reale ruolo patogeno Oocisti sporulate nelle feci (possibile utilizzo diagnostico) 9

10 Cryptosporidium spp. Diagnosi Esame microscopico a fresco del raschiato gastrico/intestinale Esame istologico PCR e sequenziamento Messa a punto di una multiplex PCR (E. leei + E. nucleophila + Cryptosporidium) ISH Enteromyxum leei Lesioni istologiche 10

11 Enteromyxum leei Lesioni istologiche Enteromyxum leei Lesioni istologiche 11

12 12

13 Cryptosporidium spp. 13