Dal Genotipo al Fenotipo
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1 Dal Genotipo al Fenotipo Dal Fenotipo normale al Fenotipo patologico Regolazione dell espressione genica
2 Figure 7-1 Molecular Biology of the Cell ( Garland Science 2008)
3 Una cellula differenziata contiene tutte le informazioni genetiche necessarie a dirigere la formazione di un organismo completo
4 Figure 7-2a Molecular Biology of the Cell ( Garland Science 2008)
5 Figure 7-2b Molecular Biology of the Cell ( Garland Science 2008)
6 Tipi cellulari diversi sintetizzano serie diverse di proteine Proteine costitutive Geni housekeeping Proteine strutturali dei cromosomi RNA polimerasi Proteine ribosomali Enzimi della glicolisi Proteine del citoscheletro Proteine del differenziamento Geni regolati Emoglobina Insulina Figure 7-2c Molecular Biology of the Cell ( Garland Science 2008)
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8 Determinazione dell espressione di 1800 geni differenti in vari tipi di cancro (RNA-tecnica microarray) Figure 7-3 Molecular Biology of the Cell ( Garland Science 2008)
9 Proteine presenti in due differenti umani (elettroforesi bidimensionale di proteine) In rosso sono colorate le proteine comuni in blu quelle specifiche Figure 7-4 Molecular Biology of the Cell ( Garland Science 2008)
10 Regolazione dell espressione genica Organizzazione della cromatina Punto 1 Inizio della trascrizione
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12 L inizio della trascrizione è controllato mediante: Sequenze di DNA (promotori sequenze di regolazione) (cis acting) Alle quali si legano delle proteine chiamate Fattori di Trascrizione (generali o specifici) (trans acting) transcription factors PROMOTER
13 Proteine che legano il DNA I Fattori di Trascrizione sono generalmente proteine bi-modulari caratterizzate: 1. da specifici domini che hanno la capacità di legare il DNA 2. da domini in grado di interagire con specifici ligandi che possono attivare o reprimere la trascrizione
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15 Dal Volume: La Cellula, un approccio molecolare
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17 Proteina a dito di zinco
18 Nonostante siano conosciuti molti dei siti a cui si legano i differenti TF resta ancora tanto da scoprire sulle regioni con funzione di regolazione nel nostro genoma
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20 Differenti tecniche ci permettono di scoprire le proteine regolatrici e la sequenza delle regioni regolatrici a cui sono legate ESEMPI Cromatografia per affinità (identifica le proteine) Footprinting del DNA (identifica le sequenze nucleotidiche)
21 Conserved non genic sequence Emmanouil et al. (2005) Nature Reviews Genetics
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23 Regolazione nei procarioti Il gene dei procarioti è policistronico
24 Gruppi di geni che codificano per enzimi coinvolti in una stessa via metabolica vengono trascritti contemporaneamente. Questo meccanismo permette di controllare l espressione genica in modo coordinato questi gruppi di geni vengono chiamati operoni
25 Operone Triptofano Controllo negativo della trascrizione Repressore del Triptofano Figure 7-35 Molecular Biology of the Cell ( Garland Science 2008)
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27 Operone Lattosio Jacob e Monod (1961) L operone Lac codifica per le proteine necessarie per il trasporto del lattosio all interno della cellula e per la sua demolizione 1. Beta-galattosidasi 2. Permeasi 3. Transacetilasi
28 Il controllo negativo dell operone lac In assenza di lattosio non è necessaria la trascrizione dell operone. Un repressore si lega al promotore ed inibisce il legame DNA-RNA pol. In presenza di lattosio il disaccaride si lega al repressore inattivandolo e la trascrizione può partire. Dal Volume: La Cellula, un approccio molecolare
29 Il controllo positivo dell operone lac Quando i livelli di glucosio si abbassano è necessaria la degradazione del lattosio. Bassi livelli di glucosio attivano l adenilato ciclasi che converte ATP in camp. Il camp si lega ad una proteina CAP (proteina attivatrice dei cataboliti) che attiva la trascrizione Dal Volume: La Cellula, un approccio molecolare
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32 Eucarioti Presenza di cromatina Fattori Generali di Trascrizione Differente organizzazione genica Differenziamento cellulare
33 DNA PACKAGING Chromatin structure is hyerarchic NUCLEOSOME Heterochromatin (more compact organization) Euchromatin (less compact organization)
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36 Differenti Fattori di Trascrizioni Specifici (STF) sono presenti in differenti tipi cellulari. Questi permettono specifici patterns di espressione genica che conferiscono la specificità cellulare. Dei geni umani dal 5% al 10% codifica per STF
37 La trascrizione di singoli geni è accesa o spenta nelle cellule da proteine regolatrici. Gli attivatori e i repressori agiscono con una varietà di meccanismi causando generalmente: La modificazione locale della struttura della cromatina L assemblaggio dei fattori generali di trascrizione al promotore Il reclutamento della RNA polimerasi
38 Figure 7-44 Molecular Biology of the Cell ( Garland Science 2008) Eucarioti
39 Complessi proteici differenti si legano a regioni regolatrici di uno stesso gene influenzando l inizio della trascrizione
40 Figure 7-50a Molecular Biology of the Cell ( Garland Science 2008)
41 1. Diversi TF agiscono sullo stesso gene 2. Lo stesso TF agisce su differenti geni (Espressione coordinata di diversi geni)
42 L espressione di una singola proteina regolatrice può scatenare l espressione di un intera batteria di geni a valle
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44 Complex Mammalian Gene Control Regions One example of a complex mammalian regulatory region is found in the human b-globin gene, which is expressed exclusively in red blood cells and at a specific time in their development
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47 Hb-A (2a - 2b) HbA-2 (2a 2d) HbF (2a - 2g) Hb embrionale (2z 2e)
48 Complex Mammalian Gene Control Regions The human b-globin gene is part of a cluster of globin genes. Moreover, each gene is turned on at a different stage of development. The entire cluster appears to be subject to a shared control region called a locus control region (LCR)
49 Complex Mammalian Gene Control Regions The LCR appears to act by controlling chromatin condensation, and its importance can be seen in patients with a certain type of thalassemia
50 Regolazione dell espressione genica Organizzazione della cromatina Punto 1 Inizio della trascrizione
51 cell 1 cell 2 Alternate splicing of mrna (four exons) tissue specific
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54 La determinazione del sesso in Drosophila dipende da una serie ordinata di eventi di splicing dell RNA
55 RNA EDITING
56 CONTROLLO DELLA TRADUZIONE
57 Meccanismi che controllano globalmente l inizio della traduzione: fosforilazione di eif2 eif2 defosforilato durante l attivazione della proliferazione,
58 mrna DEGRADATION Importante ruolo del 3 UTR degli mrna nel controllo della stabilità
59 mrna DEGRADATION Degradation rate of some Eukaryotic mrnas is Regulated In vertebrates, ingested iron is carried through the circulation bound to a protein called transferrin. The transferrin-iron complex is brought into cells by interacting with the transferrin receptor (TfR) in the plasma membrane.
60 Meccanismi che controllano la traduzione di specifici messaggeri: poliadenilazione citoplasmatica AA AA AA AA Ovociti: accumulo nel citoplasma di mrna inattivi con corte code di poli-a poli-a polimerasi AAAAAAAAAAAA AAAAAAAAAAAA Embrioni: poliadenilazione e traduzione dei messaggeri accumulati
61 Poliadenilazione citoplasmatica alla base dei meccanismi di controllo degli mrna materni
62 Regolazione dell espressione genica nel differenziamento cellulare
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65 Memoria cellulare Quando una cellula di un organismo multicellulare diventa impegnata a differenziare in un tipo cellulare specifico, la scelta del destino è generalmente mantenuta attraverso molte generazioni cellulari successive, il che significa che i cambiamenti di espressione genica coinvolti nella scelta devono essere ricordati
66 Circuito a feed-back positivo
67 Metilazione del DNA Nei vertebrati la metilazione del DNA si trova in regioni trascrizionalmente silenti del genoma (come il cromosoma X inattivo) suggerendo che essa abbia un ruolo nel silenziamento dei geni
68 Come la metilazione del DNA può spegnere i geni
69 Inattivazione del cromosoma X nelle cellule di mammifero
70 Ereditabilità degli schemi di metilazione durante la duplicazione del DNA
71 In alcuni casi l espressione di alcuni geni può variare secondo se sono stati ereditati per via paterna o materna. Questa espressione differenziale viene definita imprinting genomico
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75 Methylated DNA from Zygote to Adult Alex Meissner, Henry Stewart Talks
76 Methylated DNA from Zygote to Adult Alex Meissner, Henry Stewart Talks
77 DNA Methylation Differentiates Totipotent Embryonic Stem Cells from Unipotent Adult Stem Cells Alex Meissner, Henry Stewart Talks
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procarioti eucarioti poli-cistronico mono-cistronico non modificato CAP al 5 e poly-a al 3 RNA messaggero: procarioti eucarioti policistronico monocistronico non modificato CAP al 5 e poly-a al 3 continuo
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