LE LINFOADENOPATIE. ProfAM Vannucchi-AA
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1 LE LINFOADENOPATIE I LINFOMI
2 Organi linfatici primari Organi linfatici periferici mig M.O. B Sangue RICIRCOLAZIONE Progenitore linfocitario Linfonodi Milza Tess. linfatico associato alle mucose/cute Cell. staminale TIMO T Sangue Linfon. RICIRCOLAZIONE TCR
3
4
5 DISTRIBUTION of B CELLS in the LYMPH NODE CORTEX GC = germinal center; Mn = mantle, P = paracortex (mainly T cells); SC subcortex
6 B-CELL EVENTS in the GERMINAL CENTER
7 COSA ESPRIME L AUMENTO DI VOLUME DEI LINFONODI RISPOSTA IMMUNE AD AGENTI INFETTIVI (BATTERICI E VIRALI) INFILTRAZIONE DI CELLULE INFIAMMATORIE IN INFEZIONI LOCALIZZATE (linfoadeniti) INFILTRAZIONE DI CELLULE NEOPLASTICHE (metastasi) PROLIFERAZIONE NEOPLASTICA LOCALE (linfomi e leucemie) INFILTRAZIONE DI MACROFAGI INFARCITI DI LIPIDI (tesaurismosi) Linfoadenopatia < 30 anni = 80% infiammatoria > 50 anni = 60% neoplastica
8 Origine delle malattie linfoproliferative
9 LINFOMI NODALI EXTRANODALI
10 Classificazione WHO è basata sulle caratteristiche della cellula neoplastica, a livello: Morfologico Immunofenotipico Molecolare l l M l l LINFOMI LINFOMI NON HODGKIN LINFOMA DI HODGKIN aggressivi indolenti
11 EPIDEMIOLOGIA dei LINFOMI Inciden nza per abit tanti N l l d d l f è ù h dd Negli anni , l incidenza dei linfomi è più che raddoppiata
12 Linfonodi laterocervicali alti e sottomandibolari in mononucleosi
13 Linfonodi laterocervicali e sottomentonieri in LNH
14 Pacchetto di linfonodi sottomentonieri con ulcerazione cutanea in linfoma non HDG
15 Linfoadenomegalia ascellare in corso di LNH
16 Linfoadenomegalia ascellare in corso di LLC
17 Immagine TAC di numerosi linfonodi ingranditi in sede addominale in corso di linfoma non HDG
18 Immagine TAC di imponente adenomegalia mediastinica in corso di linfoma linfoblastico T
19 Slargamento mediastinico in linfoma non Hdg T
20 ACCERTAMENTI DI LABORATORIO specifici esame emocromocitometrico completo, con formula tests sierologici (HIV, EBV, CMV, toxoplasmosi) Biopsia osteomidollare Biopsia linfonodale NO AGOASPIRATO!! VES LDH non specifici ß2-microglobulinemia Elettroforesi proteine -> IF se picco monoclonale Dosaggio Ig Esami immunofenotipici/citogenetici/ molecolari
21 STADIAZIONE dei LINFOMI (i) Febbre Calo ponderale > 10 % Sudorazioni notturne Esame obiettivo Ricerca dei sintomi B Rx torace TC Biopsia standard total body osteomidollare
22 STADIAZIONE dei LINFOMI (ii) A: assenza di sintomi sistemici B: presenza di sintomi sistemici
23 Esame clinico Analisi immunoistochimica Esame microscopico morfologico Diagnosi integrata t dei linfomi Biologia molecolare
24 MORFOLOGIA dei LINFOMI (iii) Espressione di bcl-2 in un linfonodo normale un linfoma follicolare
25 MECCANISMI di LINFOMAGENESI EZIOLOGIA PATOGENESI FENOTIPO? (90 %) virus (5-10 %) immunodeficit (1-5%) pesticidi (0.5-1 %) Attivazione di proto-oncogeni oncogeni Inattivazione di geni onco-soppressori proliferazione apoptosi pp differenziazione
26 PRINCIPALI MARCATORI MOLECOLARI NEI LNH CARIOTIPO ONCOGENE FUNZIONE FOLLICOLARE t(14;18) bcl-2 Prevenzione apoptosi MANTELLARE t(11;14) bcl-1 D1 ciclina A GRANDI CELLULE B BURKITT L. ANAPLASTICO t(3;14) t(3;2) t(3;22) bcl-6 Fattore di trascrizione nucleare t(8;14) t(8;22) t(2;8) c-myc Fattore di trascrizione nucleare t(2;5) ALK-NPM Fattore di trascrizione ione nucleare Riarrangiamento geni IgH
27 PROTO-ONCOGENE TRANSLOCATIONS R C R C proto-oncogene oncogene partner genes (Ig or other) Chromosomal translocation R C R C (da, Gaidano G.) Fusion protein Transcriptional deregulation of the proto-oncogene
28 RIARRANGIAMENTO bcl-2/igh 18q21 MBR MCR I II 80% 20% 14q32 V H D H J H C H t(14;18)(q32;q21) BCL-2/IgH J H C H MBR H H
29 t(14;18), a journey to eternity ty BCL-2 è una proteina localizzata a livello delle membrane mitocondriale, reticolo endoplasmico, perinucleare; normalmente espressa nelle cellule emopoietiche Interviene nel fisiologico controllo della apoptosi linfocitaria nella zona del centro germinativo, sotto forma di un complesso eterodimerico con BAX BAX BCL-2 APOPTOSI BAX BCL-2 BAX-BAX BAX-BAX BAX-BCL-2 BAX-BCL-2 Meijerink JP, Leukemia 1997; 11:2175
30 RIARRANGIAMENTO bcl-2/igh Analisi cariotipica (>80% casi t(14;18) + ) FISH ( 80-90% casi t(14;18) + ) Southern blotting (>90% casi bcl-2/igh + ) PCR convenzionale & nested (40-80% bcl-2/igh + ) Con nested PCR, 50% di 36 soggetti normali è risultato bcl-2/igh+ utilizzando 10 μg DNA da sangue periferico
31 DIAGNOSTICA MOLECOLARE DEL L. FOLLICOLARE LNH: Istotipo Sensibilità Riarrangiamento Tutte le forme 1 / IgH linfoproliferative B Bcl2/IgH L. follicolare 1/ q21 Bcl-2 14q32 JH nested PCR
32 N. copie
33 RISPOSTA ALLA TERAPIA MONITORAGGIO della CONTAMINAZIONE bcl-2/igh nelle PREPARAZIONI di CELLULE STAMINALI 2- BM diagnosi 3,6- BM pre-espianto 4,7- CD Il purging g con 3-4 anti-b MoAb seguito dalla separazione immunomagnetica è più efficace della lisi da complemento. Frazioni altamente purificate di CD34+ (e CD34+/CD19+) sono uniformemente bcl-2/igh - 5,8- CD34 + ProfAM Negrin Vannucchi-AA RS, JCO 1994;1021-Voso MT, Blood 1997;3763- Freedman AS, Blood 1999;3325
34 BCL-6 E LNH B A GRANDI CELLULE DIFFUSO Alterazioni coinvolgenti il gene BCL-6 (3q27) si riscontrano nel 100% dei LNH a grandi cellule diffusi ( 35% per traslocazioni con cromosomi 14,2,22, più traslocazioni varianti) Bcl-6 è una proteina che funge da repressore della trascrizione genica. E espresso selettivamente t nel centro germinativo, mentre è assente nei linfociti B vergini (pre-gc) e nelle cellule B memoria e plasmacellule (post-gc). PROMOTER PARTNER (35% casi) MUTAZIONI (65% casi)
35 BCL-1 E LNH MANTELLARE 65% casi di LNH-mantellare è positivo con l esame citogenetico [(11 [t(11;14)], 14)] 100% è positivo i con l esame molecolare l [BCL-1] Giustapposizione della regione joining del gene IgH sul cromosoma 14 con una regione 11q13 corrispondente al gene BCL-1 60% casi riarrangiamento sono localizzati in una corta regione (Major Translocation Cluster, MTC), 10-20% più distali Ciclina D1 non è normalmente espressa nei linfociti o nelle cellule mieloidi, mentre risulta costantemente espressa nei LNH mantellari, in rari casi di mieloma multiplo (<5%), e in rari casi di LLC con decorso aggressivo La ciclina D1 interviene nella regolazione del ciclo cellulare, nel passaggio dalla fase G 1 alla fase S
36 The t(14;18) defines a unique subset of diffuse large B-cell lymphoma with a germinal center B-cell gene expression profile Germinal center B-cell like L.GCBD PB activated B-cell like Huang JZ, Blood 2002; 99:2285 Alizadeh AA, Nature 2000; 403: 503
37 Immunotherapy of Non Hodgkin s lymphomas Monoclonal antibodies as single agents Monoclonal antibodies combined with chemotherapy Radioimmunotherapy Active Ati immunotherapy
38 Rituximab: i a humanized anti CD20 chimeric i MoAb
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40 Therapeutic vaccination for lymphoid malignancies using an idiotype-klh strategies Levy et al., ASH 2001
41 Vaccinazione terapeutica per neoplasie linfoidi mediante strategie con idiotipo-klh i tà (%) 60 Probabili 40 Responders (n=14) Non - Responders (n=18) p < Tempo (anni) Levy et al., ASH 2001
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