Diagnosi di linfoma: citologia, citochimica e citofluorimetria

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Elisa Lorenzi
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1 Diagnosi di linfoma: citologia, citochimica e citofluorimetria Antonio Carminato Istituto Zooprofilattico Sperimentale delle Venezie acarminato@izsvenezie.it Percorso oncologico Mestre

2 Diagnosi di linfoma: citologia in primis Vantaggi Poco costosa e invasiva Rare complicazioni Non richiede attrezzature specifiche Campioni rapidamente analizzabili (estemporanea) Indicazione per orientare il percorso diagnostico Dx preliminare (processo flogistico, reattivo, neoplastico) Dx definitiva (molto frequentemente in caso di linfomi ad alto grado)

(estemporanea) Indicazione per orientare il percorso diagnostico Dx preliminare (processo

3 Tecniche di prelievo citologico e qualità del preparato agoinfissione/agoaspirazione (linfonodi, fegato, milza, rene, intestino, neoformazioni, versamenti) raschiato (congiuntiva) spazzolamento (cavità nasali endoscopia) Attenzione agli artefatti da schiacciamento (cellule

intestino, neoformazioni, versamenti) raschiato (congiuntiva)

4 Qualità del preparato = Accuratezza diagnostica cellularità rappresentativa del processo in atto buona cellularità Allestimento corretto

5 Qualità del preparato = Accuratezza diagnostica scarsa contaminazione ematica monostrato cellulare

6 Come trattare i campioni liquidi Allestimento a fresco Eventualmente retrocedere se presente eccesso di liquido Asciugare il prima possibile per evitare alterazioni morfologiche e per non perdere cellularità durante la fase di colorazione Inviare al laboratorio assieme ai vetrini allestiti da voi anche il liquido prelevato (citocentrifuga e citoincluso) Evitare contatto con fumi di formalina

perdere cellularità durante la fase di colorazione Inviare al laboratorio assieme ai vetrini

7 Immunocitochimica anticorpi specifici (CD) che reagiscono con antigeni cellulari e che vengono messi in evidenza da un sistema di rivelazione. Gli antigeni che cerchiamo sono poco stabili a T ambiente!!! Si effettua su campioni freschi entro 2 giorni e conservati a temperatura ambiente. LINFOCITI T B CD 3 CD 79alfa CD 4 CD 20 CD 8 CD 21

Gli antigeni che cerchiamo sono poco stabili a T ambiente!

8 Citometria a flusso e separare le cellule, nonché valutare il legame con i marker utilizzati. Le cellule in sospensione, fatte passare attraverso un fascio di fluido in un apparato di detezione, vengono analizzate in una modalità multiparametrica sulla base di caratteristiche fisiche e chimiche, registrando migliaia di eventi al secondo.

Le cellule in sospensione, fatte passare attraverso un fascio di fluido in un

9 Linfoma: classificazione Sulla base del sito anatomico e dei criteri cito/istologici 1. Alimentare 2. Mediastinico 3. Nodale 4. Extranodale: Renale Nasale CNS Cutaneo Working Formulation (WF) criteri morfologici grading (alto e basso grado) Fenotipo (B-, T-) Revised European American Lymphoma (REAL)

Extranodale: Renale Nasale CNS Cutaneo Working Formulation (WF) criteri

10 Principi generali di classificazione 1. Dimensione cellulare Medio Grande Piccolo Eritrocita

11 Principi generali di classificazione 2. Forma del nucleo e aspetto della cromatina e dei nucleoli Nucleo rotondo, cromatina densa e aggregata Nucleo rotondeggiante, cromatina punteggiata e nucleoli multipli prominenti Nucleo pleomorfo con incisure profonde, cromatina fine

rotondo, cromatina densa e aggregata Nucleo rotondeggiante,

12 Principi generali di classificazione 3. Indice mitotico Alto grado Basso grado

13 Iperplasia reattiva/plasmocitosi

14 Infiltrazione linfocitaria (IBD) vs linfoma a piccole cellule alimentari e nodali

15 Versamento chiloso vs linfoma Tal quale citocentrifuga Linfoma

16 Peritonite infettiva felina (+++ mediastinica e renale) Linfadenopatia iperplastica/reattiva periferica in corso di FIV Rinite cronica linfocitaria Altro

17 CASI CLINICI

18 LOLLO persiano 13 AA MS Anamnesi: anoressia e dimagramento Esame fisico: disidratazione, massa addominale percepibile alla palpazione Prelievo ecoguidato della neoformazione intestinale e linfonodi

addominale percepibile alla palpazione Prelievo

19 LOLLO persiano 13 AA MS Dott. G. Camali, DVM, Venezia

20 LOLLO persiano 13 AA MS Popolazione polimorfa di cellule di medio grandi dimensioni

21 Citoplasma basofilico, Nucleo eccentrico, nucleoli multipli Aspetto centroblastico Linfoma ad alto grado

22 CD 20 + CD3 fenotipo B

23 LOLLO PERSIANO 13 AA MS Escissione chirurgica e CHOP

24 OLIMPIA europeo FS 11AA

25 OLIMPIA europeo FS 11AA

26 OLIMPIA europeo FS 11AA Cellule di piccole dimensioni Linfoma a basso grado

27 OLIMPIA europeo FS 11AA CD 3 + CD 79ALFA FENOTIPO T

28 TIGRO europeo MS 9AA

29 TIGRO europeo MS 9AA

30 TIGRO europeo MS 9AA

31 FLUFF europeo 17 AA MS

32 FLUFF europeo 17 AA MS Agoinfissione renale Popolazione pleomorfa

33 FLUFF europeo 17 AA MS Cellule di grandi dimensioni Citoplasma basofilico Nuclei pleomorfi

34 FLUFF europeo 17 AA MS Versamento addominale Citocentrifuga

35 FLUFF europeo 17 AA MS

36 FLUFF europeo 17 AA MS CD 20 + CD 3 - Linfoma renale ad alto grado fenotipo B

37 FLUFF europeo 17 AA MS

38 GASTONE europeo 12 AA MS

39 GASTONE europeo 12 AA MS FEGATO FEGATO MILZA

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