S. Bernasconi C. Tagliacarne GL. Marseglia
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1 S. Bernasconi C. Tagliacarne GL. Marseglia
2 OUTLINE 1) Alcune considerazioni generali 2) Alcuni fondamenti della low dose medicine 3) Utilizzo della low dose medicine nelle IRR
3 OUTLINE 1) Alcune considerazioni generali 2) Alcuni fondamenti della low dose medicine 3) Utilizzo della low dose medicine nelle IRR
4 OUTLINE 1) Alcune considerazioni generali - interesse culturale
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6 MASTER BIENNALE DI II LIVELLO LOW DOSE MEDICINE IN PSICO-NERUO-ENDOCRINO-IMMUNOLOGIA Applicazioni in Medicina Generale, nelle Disfunzioni Neuro-Muscolo-Scheletriche e nell Healthy Aging MASTER BIENNALE DI II LIVELLO LOW DOSE MEDICINE E OMOTOSSICOLOGIA
7 OUTLINE 1) Alcune considerazioni generali - interesse culturale - ricerca scientifica
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12 OUTLINE 1) Alcune considerazioni generali 2) Alcuni fondamenti della low dose medicine
13 OUTLINE 1) Alcune considerazioni generali 2) Alcuni fondamenti della low dose medicine - concentrazioni attive molto basse
14 Inferiori alla «minimal pharmacological effective dose».
15 EFFETTI DI DIFFERENTI CONCENTRAZIONI DI CITOCHINE THERAPEUTIC EFFICACY
16 DEFINITIONS g (gram)= = = 0.01 mg (milligram)= 10-3 = μg (microgram)= 10-6 = ng (nanogram)= 10-9 = pcg (picogram)= = fg (fentogram)= =
17 S.K.A (Sequential Kinetic Activation) Rappresenta un sofisticato DRUG DELIVERY SYSTEM in grado di rendere efficaci concentrazioni molecolari al di sotto della minimal pharmacological effective dose.
18 S.K.A (Sequential Kinetic Activation) Oggi si parla anche di RELEASE ACTIVITY cioè la capacità della basic substance di rilasciare nel mezzo acquoso la propria attività farmacologica Bulletin of Experimental Biology and Medicine, Vol. 154, No. 1, November, 2012
19 SKA H Acqua ordinaria O H H O H H O Con la dinamizzazione si innesca il fenomeno di Frölich: la spazializzazione ordinata di tutti i dipoli, che porta all abbassamento della costante dielettrica cioè ad una più facile trasmissione elettromagnetica H O H O H O H H H O H H O H H H Acqua biologica
20 OUTLINE 1) Alcune considerazioni generali 2) Alcuni fondamenti della low dose medicine - concentrazioni attive molto basse - evidenze sperimentali
21 Effects of different doses of IL-1-β on isolated human fibroblasts
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23 Expression of NFKb on isolated fibroblasts nfkb lps a c d b 1h Legend lps=control A=placebo (water and alcohol) B=pharmacological concentration C=0.01pg/ml ska activated D=0.01 pg/ml only diluted not ska activated lps a c 18h d b
24 I RECETTORI TRANS-MEMBRANA Up- and Down-Regulation TNF Soluble TNF receptor Cell-surface receptor Cell activation
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26 OUTLINE 1) Alcune considerazioni generali 2) Alcuni fondamenti della low dose medicine - concentrazioni attive molto basse - evidenze sperimentali - patologia=alterata omeostasi
27 Antigen presentation to naïve T cells results in the development of Th1, Th2 or Th17 cells depending on the cytokine milieu. From: The Review of Diabetic Studies (2006) 3:72-75
28 Neither good nor bad in Nature Raphael I et al. T cell subsets and their signature cytokines in autoimmune and inflammatory diseases. Cytokine (2014),
29 Cytokines UP IL-1 IL-6 TNF-α IL-17 INFIAMMAZIONE Cytokines DOWN TGF-β IL-4 IL-10 INF-γ IL-2 IL-8 Concentrazione Fisiologica IL-1 IL-6 TNF-α IL-17 INF-γ IL-2 IL-8 OMEOSTASI SALUTE Concentrazione Fisiologica TGF-β IL-4 IL-10
30 IN IMMUNE DEFICIENCY Immunemodulating Cytokines Th2 TGF-β IL-4 IL-10 Immunestimulating Cytokines IL-2 Th1 IFN-γ IL-1 GCSF
31 THE CONCEPT OF BALANCE RECIPROCITY of TH CELLS Th0 IL-12 UP-REGULATES IL-4 UP-REGULATES Th1 Th2 Inflammatory diseases Allergy IL-4 IL-12, INF-γ IL-4 DOWN-REGULATES INF-γ DOWN-REGULATES Th subsets each other. cross-regulate expansion and functions - Cooke, A. Th17 in Inflammatory Conditions. 2006, Rev Diabetic Stud 3: Bettelli E. et al. Th17: the third member of the effector T cell trilogy. Current Opinion in Immunology 2007, 19:
32 The concept of BALANCE and the use of SKA low dose cytokines Antagonistic cytokines are utilized in order to slow down a biological effect; Same cytokines in order to enhance a biological function.
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35 OUTLINE 1) Alcune considerazioni generali 2) Alcuni fondamenti della low dose medicine 3) Utilizzo della low dose medicine nelle IRR
36 OUTLINE 1) Alcune considerazioni generali 2) Alcuni fondamenti della low dose medicine 3) Utilizzo della low dose medicine nelle IRR - razionale
37 Convalescenza.. IMMUNODEPRESSIONE POST-INFETTIVA
38 CITOMIX VACCINIUM VITIS VASA LYMPHATICA SUIS ANANASSA SATIVA MEDULLA OSSIS SUIS CENTELLA ASIATICA THYMULINE AZIONE ANTISETTICA (Vaccinium vitis), ESTRATTI D ORGANO LOW DOSE VEGETALI LOW DOSE ANTINFIAMMATORIA (Ananassa sativa), CITOCHINE STIMOLAZIONE DEI TESSUTI IMMUNOCOMPETENTI LOW DOSE DI STIMOLAZIONE DEL SRE (Centella asiatica) INNESCO DELLA RISPOSTA IMMUNITARIA GCSF IL1-beta INF -gamma IL-6 IL-4 IL-2 PROLIFERAZIONE DEI B E BOOSTING DELLE APC (IL4); STIMOLAZIONE DEI T, B, NK (IL2)
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40 CRITERI DI INCLUSIONE / ESCLUSIONE Criteri di inclusione Criteri di esclusione Bambini giunti all osservazione c/o il Bambini affetti da patologia cronica personale studio di Pediatria in qualità (diabete, cardiopatia, insufficienza renale), di pazienti convenzionati con la ASL-8 in trattamento immunosoppressivo e Arezzo e privati, nel periodo compreso cortisonico, quelli sottoposti a terapia tra e antibiotica per lungo periodo e gli allergici. Requisiti: età compresa tra 3 ed 8 anni, positività anamnestica per RRI [bambini che nel periodo compreso tra novembre 2006 ed aprile 2007 avevano manifestato più di 6 episodi di infezioni respiratorie acute].
41 PROTOCOLLO PREVENTIVO DELLE RRI E TERAPIA DEGLI EPISODI RESPIRATORI ACUTI (ARTI) Il GRUPPO A è stato curato con CITOMIX con il seguente schema:
42 Δ=3.58 Δ=1.04
43 RICORSO ALLA TERAPIA ANTIBIOTICA
44 OUTLINE 1) Alcune considerazioni generali 2) Alcuni fondamenti della low dose medicine 3) Utilizzo della low dose medicine nelle IRR - razionale - dati laboratoristici (studio preclinico)
45 Pre-clinical Study Evaluation of Citomix on PBMC (Peripheral Blood Mononuclear Cells) of 15 healthy adult volunteers and on 15 pediatric patients AMCs (Adenoidal Mononuclear Cells) after adenoidectomy surgery.
46 ATTIVITA IMMUNOMODULANTE DI CITOMIX Prelievo di sangue da adulti sani 15 volontari Adenoidi di soggetti pediatrici con infezioni ricorrenti 15 soggetti Schiacciamento meccanico Isolamento cellule Isolamento cellule PBMC AMC
47 ATTIVITA IMMUNOMODULANTE DI CITOMIX Analisi ex-vivo : Trattamento con Citomix (soluzione) vs Terreno di coltura (RPMI) Colture cellulari Basale PBMC AMC Citomix 1:10 Citomix 1:100 Obiettivo: Attività NK Analisi sottopopolazioni linfociti B e T Produzione di Citochine e Immunoglobuline Metodo: -Citotossicità -FACS Analysis, -ELISA,
48 SCOPO Valutare l'attività immunomodulante "in vitro" di CITOMIX PBMC di soggetti volontari adulti sani cellule adenoidee di pazienti pediatrici. Parametri immunologici: capacità proliferativa di alcune sottopopolazioni linfocitarie (T e B) attività NK produzione di citochine e immunoglobuline.
49 RISULTATI In coltura CITOMIX non è tossico per la sopravvivenza e la proliferazione cellulare
50 Valutazione della capacità proliferativa linfocitaria mediante marcatura con CFSE SANGUE PERIFERICO Proliferazione di linfociti T CD8+ 50,00 45,00 40,00 30,00 BASALE 25,00 CITOMIX 1:10 20,00 CITOMIX 1:100 15,00 CANDIDA 10,00 5,00 0,00 CD3+CD8+ Proliferazione di linfociti T CD4+ CD8+ CFSE- 70,00 60,00 50,00 % cells % cells 35,00 BASALE 40,00 CITOMIX 1:10 30,00 CITOMIX 1:100 20,00 CANDIDA 10,00 0,00 CD3+CD4+ CD4+ CFSE-
51 Valutazione della capacità proliferativa linfocitaria mediante marcatura con CFSE - ADENOIDI Proliferazione di linfociti T CD8+ 40,00 35,00 25,00 BASALE 20,00 CITOMIX 1:10 15,00 CITOMIX 1:100 10,00 CANDIDA 5,00 0,00 CD3+CD8+ Proliferazione di linfociti T CD4+ CD8+ CFSE- 60,00 50,00 40,00 % cells % cells 30,00 BASALE CITOMIX 1:10 30,00 CITOMIX 1:100 20,00 CANDIDA 10,00 0,00 CD3+CD4+ CD4+ CFSE-
52 RISULTATI In coltura CITOMIX non è tossico per la sopravvivenza e la proliferazione cellulare I dati suggeriscono una azione prevalente sul sistema innato
53 Valutazione dell attività citotossica Natural Killer (NK) Attività NK - adenoidi Attività NK - sangue periferico 1,40 1,20 0,80 % di lisi % di lisi 1,00 0,60 0,40 0,20 0,00 BASALE CITOMIX 1:10 CITOMIX 1:100 AMC BASALE CITOMIX 1:10 CITOMIX 1:100 Rapporto 1:100 0,52 1,15 0,30 17,40 17,20 17,00 16,80 16,60 16,40 16,20 16,00 15,80 15,60 BASALE CITOMIX 1:10 CITOMIX 1:100 PBMC BASALE CITOMIX 1:10 CITOMIX 1:100 Rapporto 1:100 16,172 16,174 17,287 Elevata variabilità inter- ed intraindividuale Aumento dell attività NK con citomix 1:10 nei linfociti da adenoidi, per poi tornare a livelli basali con la concentrazione 1:100 Aumento dell attività NK rispetto al basale con citomix 1:100 nei linfociti da sangue periferico
54 Valutazione dell attività citotossica Natural Killer (NK) Attività NK - adenoidi 1,60 AMC BASALE CITOMIX 1:10 CITOMIX 1:100 Rapporto 1: D bas/stim ,40 1,20 % di lisi 1,00 0,80 0,60 0,40 0,20 0,00 BASALE CITOMIX 1:10 CITOMIX 1:100 Aumento dell attività NK con citomix 1:10 e 1:100 nei linfociti da adenoidi Aumento dell attività NK rispetto al basale con citomix 1:10 e 1:100 nei linfociti da sangue periferico Risultati non statisticamente significativi (Test T di Student) Courtesy from Prof. G.L.. Marseglia
55 RISULTATI In coltura CITOMIX non è tossico per la sopravvivenza e la proliferazione cellulare I dati suggeriscono una azione prevalente sul sistema innato Basse concentrazioni di CITOMIX (1:100) si dimostrano in grado di stimolare la produzione di citochine regolatorie
56 Valutazione della produzione di Citochine Sangue periferico Produzione di IL6 e TNFalpha dopo 10 gg in coltura - sangue periferico 180,00 160,00 pg/ml * 1x106 cells 140,00 120,00 100,00 BAS 80,00 1:10 1:100 60,00 40,00 20,00 0,00 IL6 PBMC TNFalpha IL6 TNFalpha BAS : :
57 Valutazione della produzione di Citochine Sangue periferico Produzione di IFNgamma dopo 10 gg in coltura sangue periferico Produzione di IL10 dopo 10 gg in coltura - sangue periferico 700,00 14,00 600,00 12,00 500,00 10,00 400,00 BAS 8,00 BAS 300,00 1:10 6,00 1:10 200,00 1:100 4,00 1: ,00 0,00 2,00 0,00 IFNgamma IL10 CITOCHINE REGOLATORIE PBMC IFNgamma IL10 BAS : : Aumento di IFNgamma e di IL-10 con la concentrazione 1:100 di citomix
58 Valutazione della produzione di Citochine Adenoidi Produzione di IL6 dopo 10 gg in coltura adenoidi Produzione di TNFalpha dopo 10 gg in coltura adenoidi 800,00 600,00 BAS 400,00 1:10 1: ,00 0,00 pg/ml * 1x106 cells pg/ml * 1x106 cells 1000,00 IL6 ADENOIDI IL6 4,00 3,50 3,00 2,50 2,00 1,50 1,00 0,50 0,00 BAS 1:10 1:100 TNFalpha TNFalpha BAS : :
59 Valutazione della produzione di Citochine Adenoidi Produzione di IFNgamma dopo 10 gg in coltura adenoidi Produzione di IL10 dopo 10 gg in coltura adenoidi 250,00 23,50 23,00 22,50 22,00 21,50 21,00 20,50 20,00 19,50 19,00 18,50 200,00 150,00 BAS 1:10 100,00 1:100 50,00 0,00 IFNgamma ADENOIDI IFNgamma BAS 1:10 1:100 IL10 IL10 BAS : : CITOCHINE REGOLATORIE Aumento di IFNgamma e di IL10 con la concentrazione 1:100 di citomix
60 L aumento di IFNgamma in presenza di citomix rende le cellule dell immunità innata pronte a debellare eventuali infezioni virali e l IL-10 svolge azione regolatrice
61 L aumento è maggiore con concentrazioni più basse di citomix in coltura, ad avvalorare l ipotesi di un azione sistemica di citomix più che locale. Le citochine regolatorie prodotte stimolano ed incrementano la risposta specifica delle cellule dell immunità acquisita.
62 RISULTATI In coltura CITOMIX non è tossico per la sopravvivenza e la proliferazione cellulare I dati suggeriscono una azione prevalente sul sistema innato Basse concentrazioni di CITOMIX (1:100) si dimostrano in grado di stimolare la produzione di citochine regolatorie e la produzione di immunoglobuline (IgA. IgM, IgM)
63 Valutazione della produzione di immunoglobuline Sangue periferico Produzione di Immunoglobuline dopo 10 gg in coltura - sangue periferico 900,00 800,00 g/ml * 1x106 cells 700,00 600,00 500,00 BAS 400,00 1:10 1: ,00 200,00 100,00 0,00 IgA IgG IgM PBMC IgA IgG IgM BAS PBMC IgA IgG IgM :10 BAS :100 1: : Courtesy from Prof. G.L.. Marseglia
64 SECONDA FASE STUDIO CLINICO CIT-OM -X 85 Studio clinico prospettico randomizzato con controllo attivo sull attività di un preparato composto ad azione immunomodulante nel controllo delle infezioni respiratorie ricorrenti in età pediatrica: studio CIT-OM85-X
65 Grazie per l attenzione sbernasconi3@gmail.com
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