LABORATORIO DI MICROBIOLOGIA Presentato dalla classe 3^A CH
Analisi Ricerca lattobacilli in un campione di yogurt seminato su terreno MRS Ricerca degli streptococchi in un campione di yogurt seminato su terreno M17 Ricerca degli streptococchi in un campione di latte seminato su terreno M17 a 37 C Conta totale in un campione di latte su terreno Nutrient Agar a 30 C Colorazione di Gram
IL PROGETTO Gli studenti della classe 3^A CH dell anno 2015/2016 si sono impegnati - in collaborazione con i docenti Bernardi Marica, Iannelli Germana, Pomati Grazia, Cortellini Annarosa e Angela Agnelli in un laboratorio di approfondimento riguardante la microbiologia. In queste ore gli studenti hanno imparato come effettuare un campionamento, come svolgere una semina e come compiere un analisi microbiologica. Inoltre, in collaborazione con le classi 4^A CH e 5^A CH, si sono eseguite le analisi della carica batterica del fiume Po.
CONTA BATTERICA 1. Preparazione acqua fisiologica 2. Preparazione dei terreni (MRS,M17,PCA e NB) 3. Preparazione del campioni 4. Svolgimento delle varie diluizioni 5. Semina 6. Incubazione 7. Conta batterica 8. Isolamento o strisciata 9. Colorazione di Gram
Tabella dati della conta betterica del latte crudo su terreno M17 a 37 C UFC(unita formante colonia) >300 T.Q. Diluizione GRUPPO 1 >300 10^-1 98 10^-2 >300 T.Q. GRUPPO 2 295 10^-1 287 10^-2
Elaborazione dati Somma delle u.f.c. Che prendo in considerazione (Numero di piastre x (numero di piastre meno x (diluizioni della più Concentrate significative), concentrate significative) concentrata) Streptococchi =5.7 10^4 UFC/ml
Tabella dati della conta batterica di un campione di latte su terreno Nutrient Agar a 30 C UFC Diluizioni >300 T.Q. GRUPPO 1 >300 10^-1 124 10^-2 >300 T.Q. GRUPPO 2 >300 10^-1 220 10^-2
Conta totale a 30 C = 1.7x10^4 UFC/ml
Tabella dati della conta batterica di un cmpione di yogurt su un terreno MRS UFC Diluizioni >300 10^-4 GRUPPO 1 >300 10^-5 45 10^-6 >300 10^-4 GRUPPO 2 >300 10^-5 114 10^-6
Elaborazione dati Somma delle u.f.c. Che prendo in considerazione (Numero di piastre x (numero di piastre meno x (diluizioni della più Concentrate significative), concentrate significative) concentrata) Lactobacilli = 8x10^7 UFC/g
Tabella dati della conta batterica di un campione di yogurt su terreno M17 UFC Diluizioni 0 10^-5 GRUPPO 1 0 10^-6 0 10^-7 268 10^-5 GRUPPO 2 9 10^-6 13 10^-7
Streptococchi = 2.5 10^7 UFC/g OSSERVAZIONI : In questo risultato non si tiene conto dei dati del gruppo 1 in quanto nelle loro piastrine non sono cresciute colonie; inoltre bisogna tener conto del fatto che il gruppo 2 ha trovato una quantitá di colonie minori rispetto a quelle trovate in una piastrina con diluizione minore
COLORAZIONE DI GRAM La colorazione di Gram serve per determinare l appartenenza di un ceppo di batteri a una delle due categorie: Gram positivi e Gram negativi. Questo tipo di distinzione si effettua dopo avere isolato le colonie da analizzare.
Procedimento Mettere una goccia di acqua fisiologica su un vetrino d orologio Bagnare l ansa nella colonia da osservare al microscopio Bagnare la colonia nella goccia d acqua e spargerla nel centro Lasciar ascuigare il vetrino Coprire tutta la superficie del campione con il Cristal Violetto Ripetere lo stesso procedimento con il liquido di Iugol, l alcol e la Safranina Mettere una goccia di olio di cedro sul vetrino Procedere con l osservazione al microscopio
Preparazione del campione per la colorazione di Gram Prendere una capsula di Petri contenente terreno inutilizzato Strisciare l ansa all interno della colonia Strisciare l ansa sul terreno vuoto per metá capsula Strisciare di nuovo partendo dal punto in cui ho interrotto la prima strisciata Ripetere l operazione un altra volta
Questo è il risultato ottenuto dopo l isolamento e il riposo in frigo. Si dovrebbero vedere 3 strisce con una concentrazione diversa di colonie: la prima piú concentrata, la seconda un po meno e la terza avrá piccoli punti isolati.
COLORAZIONE GRAM POSITIVA Questi sono Streptococchi sotto il microscopio dopo la colorazione di Gram. Come si evince dal colore (blu) le colonie sono Gram+. Se fossero state rosse sarebbero appartenute alla categoria Gram-. Solitamente le colonie Gram + sono batteri «buoni» e non patogeni come solitamente sono i Gram-.