ACIDO MICOFENOLICO ed ACIDO MICOFENOLICO GLUCURONIDE PLASMATICI/SIERICI in UV Codice Z01910
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1 ACIDO MICOFENOLICO ed ACIDO MICOFENOLICO GLUCURONIDE PLASMATICI/SIERICI in UV Codice Z INTRODUZIONE L Acido Micofenolico ( Mofetil o ) è un potente immunosoppressore che inibisce in modo reversibile l enzima Inosina-monofosfato deidrogenasi Tipo coinvolto nella sintesi della guanosina. Poiché il modo d azione dell differisce dalla Ciclosporina, Tacrolimus e Sirolimus può essere co-prescritto come parte di un pannello farmacologico. è metabolizzato tramite glucuronazione per formare un metabolita inattivo (-glucuronide) e anche un metabolita minore (-acil-glucoronide). Il metodo proposto consente di determinare la concentrazione plasmatica o sierica dell Acido Micofenolico e dell Acido Micofenolico glucuronide dopo precipitazione delle proteine plasmatiche e iniezione in HPLC. EUREKA srl LAB DIVISION VAT N info@eurekaone.com Head Quarter: Via Enrico Fermi Chiaravalle (AN) ITALY Tel. + Fax + Release N Acido Micofenolico sierico e/o plasmatico in UV Luglio
2 CARATTERISTICHE DEL METODO Principio del metodo : Il presente metodo consente di determinare l Acido Micofenolico e l Acido Micofenolico glucuronide dopo precipitazione e lettura in UV. Recupero del Metodo : circa % Sensibilità del Metodo : circa, mg/l Intervallo di Riferimento - mg/l Contenuto della Confezione : Tutti i reagenti sono pronti all'uso e stabili anni a Temperatura Ambiente ( C ). Il Calibratore è stabile mesi a C. Reagente A Deproteinizzante con Standard Interno, x ml Reagente B Soluzione di Diluizione, x ml Reagente C Soluzione Test, x, ml Stoccare a - C Reagente D Calibratore Plasmatico Liofilo, x ml Vedi Avvertenze Reagente M Fase Mobile, x ml Dotazione strumentale minima richiesta : Strumento HPLC isocratico con loop da µl Detector λ = nm Registratore di cromatogrammi Dotazione opzionale : Autocampionatore Computer gestionale Modalità di prelievo : Prelevare ml di sangue venoso in una provetta senza gel per il siero e con Eparina come anticoagulante per il plasma. Centrifugare a rpm per minuti. Separare il siero e stoccarlo a C. Stabile settimane.
3 PROCEDURA PREANALITICA In una provetta pipettare : µl di H O di grado HPLC µl di Reagente C Soluzione Test NOTA : Prima di iniziare la seduta analitica è consigliabile iniettare µl di questa soluzione nel sistema cromatografico per identificare il tempo di ritenzione dell Acido Micofenolico che deve essere simile a quello riportato in fig.. Se il Test ha dato esito positivo si può procedere alla seduta analitica. Se così non fosse verificare la funzionalità del sistema analitico. PROCEDURA ANALITICA FASE : Preparazione del Campione Dispensare in provette tipo eppendorf : Calibratore Controllo Campione Reagente D Calibratore plasmatico µl Controllo µl Campione µl Reagente A Deprot. con Standard Interno µl µl µl Attenzione: si consiglia di deproteinizzare direttamente sul Vortex per almeno secondi FASE : Centrifugare a. rpm per minuti. FASE : Diluizione Prelevare µl di surnatante limpido ed aggiungere µl di Reagente B Soluzione di Diluizione Agitare accuratamente al Vortex INIEZIONE : Iniettare µl nel cromatografo HPLC ed attendere la stampa del cromatogramma. Release N Acido Micofenolico sierico e/o plasmatico in UV Luglio
4 ACIDO MICOFENOLICO ed ACIDO MICOFENOLICO GLUCURONIDE in UV - AVVERTENZE REAGENTE C : SOLUZIONE TEST Acido Micofenolico circa mg /l Acido Micofenolico glucuronide circa mg /l REAGENTE D : CALIBRATORE LIOFILO Lotto n Acido Micofenolico mg/l Acido Micofenolico glucuronide / Modalità d uso e Ricostituzione: i Calibratori devono essere usati per calibrare il sistema HPLC. Aggiungere esattamente ml di H O di grado HPLC e agitare delicatamente per minuti fino a quando tutto il materiale non è dissolto. Prima del campionamento rimescolare gentilmente per assicurarne l omogeneità. Conservazione e stabilità: i Calibratori liofili sono stabili oltre mesi se conservati a - C. Una volta ricostituiti ore se conservati a C, giorni a C e giorni a C. Non usarli dopo la data di scadenza. Confezionamento : x ml Precauzioni: questo calibratore in matrice umana deve essere trattato con cura e considerato come potenzialmente infettivo. PARAMETRI DEL DETECTOR UV/VIS Varian λ SENSIBILITA' STRUMENTALE TEMPO DI INTEGRAZIONE nm. AUFS secondi PROTEZIONE DELLA COLONNA ANALITICA Per salvaguardare la colonna analitica Reverse Phase GENESIS, x mm, µ, è tassativo l uso del Metasaver Precolumn Filter. um ( x pz.) cod. ZA. CONDIZIONAMENTO DELLA COLONNA Installare la colonna analitica nuova Reverse Phase GENESIS C x mm, µm. Disconnettere il detector e far passare una soluzione di H O acida per minuti e successivamente la fase Mobile per minuti, al flusso di, ml/minuto. Non riciclare i liquidi di lavaggio. Condizionare la colonna con la fase mobile al flusso di, ml/minuto e scaricare i primi ml. E possibile effettuare analisi a ricircolo di fase. PULIZIA DELLA COLONNA e DELL AGO DI INIEZIONE PARAMETRI HPLC Disconnettere il detector. Flussare H O acida per minuti e scaricare. Flussare una soluzione di H O : Metanolo ( : v/v ) acida per minuti scaricandola, al flusso di, ml/min. La colonna va stoccata in H O : Metanolo ( : v/v ) acida. L ago di iniezione va lavato con una soluzione di H O : Etanolo ( : v/v ). LOOP µl Flusso di lavoro consigliato, ml/minuto Pressione corrispondente Circa bar PARAMETRI COMPUTER GESTIONALE SECONDO LE SPECIFICHE DEL SOFTWARE GESTIONALE
5 ACCESSORI E CONSUMABILI CODICE DESCRIZIONE CONFEZIONE Z Calibratore per Acido Micofenolico sierico e/o plasmatico x ml Z Controllo per Acido Micofenolico sierico e/o plasmatico - Livello x ml Z Controllo per Acido Micofenolico sierico e/o plasmatico - Livello x ml Z Controllo per Acido Micofenolico sierico e/o plasmatico - Livelli e x x ml ZFME Colonna Analitica Genesis C ( x,mm - um) PZ ZA Metasaver Precolumn Filter. um x PZ SU Vial di vetro a volume ridotto da, ml a ul + tappini x PZ
6 AC. MICOFENOLICO ed AC. MICOFENOLICO GLUCURONIDE PLASMATICI/ SIERICI IN UV (Cromatogrammi di riferimento) TEST.DATA..DATA IS Fig. Soluzione Test R.T.. Acido Micofenolico glucuronide R.T.. Acido Micofenolico Fig. Calibratore liofilo plasmatico R.T.. Acido Micofenolico glucuronide R.T.. Standard Interno R.T.. Acido Micofenolico
7 AC. MICOFENOLICO ed AC. MICOFENOLICO GLUCURONIDE PLASMATICI/ SIERICI IN UV (Cromatogrammi di riferimento)..data...data IS IS Fig. Campione di plasma arricchito R.T.. Acido Micofenolico glucuronide, mg/l R.T.. Standard Interno R.T.. Acido Micofenolico, mg/l Fig. Campione di plasma arricchito R.T.. Acido Micofenolico glucuronide, mg/l R.T.. Standard Interno R.T.. Acido Micofenolico, mg/l
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