LAMOTRIGINA e MONOIDROSSICARBAMAZEPINA plasmatiche in UV Codice Z04210
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- Filomena Corsini
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1 LAMOTRIGINA e MONOIDROSSICARBAMAZEPINA plasmatiche in UV Codice Z INTRODUZIONE Il trattamento del paziente epilettico richiede il contributo multidciplinare di competenze mediche, farmacologiche, psicologiche e sociali. In questo contesto pertanto, la terapia farmacologica e il conseguente monitoraggio rivestono un ruolo decivo nel controllo immediato delle cri epilettiche e nella prevenzione a medio e lungo termine delle ricadute. Attualmente, grazie al monitoraggio delle concentrazioni plasmatiche dei farmaci antiepilettici, è in molti casi possibile modellare la terapia sul singolo paziente. Il presente metodo consente di determinare simultaneamente le concentrazioni sieriche e/o plasmatiche dei seguenti farmaci antiepilettici :. Lamotrigina. Monoidrossicarbamazepina EUREKA srl LAB DIVISION VAT N info@eurekaone.com Head Quarter: Via Enrico Fermi Chiaravalle (AN) ITALY Tel. + Fax + Release N Lamotrigina e Monoidrossicarbamazepina in UV Gennaio
2 CARATTERISTICHE DEL METODO Principio del Metodo : Gli Antiepilettici vengono olati trattando il plasma o il siero con un opportuno deproteinizzante. Dopo l aggiunta di uno stabilizzante, la soluzione viene direttamente iniettata in HPLC. Recupero del Metodo : % Sensibilità del Metodo :, µg/ml Range dinamico del metodo :, µg/ml Range terapeutico nel plasma : Lamotrigina µg/ml Monoidrossicarbamazepina µg/ml Contenuto della confezione : Tutti i reagenti sono pronti all uso e stabili anni a < C tranne i Calibratori liofili che sono stabili mesi se stoccati a C. Reagente A Soluzione Deproteinizzante con Standard Interno, x ml Reagente B Soluzione Stabilizzante, x ml Reagente C Soluzione Test, x ml Reagente F Calibratore combinato Lamotrigina e Monoidrossicarbamazepina, x ml Reagente M Fase Mobile, x ml Vedere Avvertenze Dotazione strumentale minima richiesta : Strumento HPLC ocratico con loop da µl Detector spettrofotometrico UV / VIS λ= nm Regtratore di cromatogrammi Dotazione opzionale : Autocampionatore Computer gestionale Modalità di prelievo ematico : Prelevare ml di sangue venoso in una provetta senza gel per il siero e con Eparina come anticoagulante per il plasma. Centrifugare a rpm per minuti. Separare il siero e stoccarlo a C. Stabile settimane.
3 PROCEDURA PREANALITICA In una provetta pipettare : µl di H O di grado HPLC µl di Reagente C - Soluzione Test / parametri NOTA : Prima di iniziare la seduta analitica è consigliabile iniettare µl di questa soluzione in HPLC per identificare il tempo di ritenzione dei singoli Antiepilettici che deve essere simile a quello riportato in fig.. Se il Test ha dato esito positivo si può procedere alla seduta analitica. Se così non fosse verificare la funzionalità del stema analitico. PROCEDURA ANALITICA FASE : Preparazione dei Campioni Dpensare in provette coniche da, ml tipo Eppendorf con tappo : Bianco Reagente F- Calibratore combinato Acqua di grado HPLC µl Campione Reagente F - Calibratore Combinato µl Campione µl Reagente A - Deproteinizzante con Standard Interno µl µl µl Attenzione: si consiglia di deproteinizzare direttamente sul Vortex per almeno secondi FASE : Centrifugare a rpm per minuti. FASE : Trasferire µl del sovranatante limpido in una provetta. Aggiungere a ciascuna provetta µl di Reagente B Sol. Stabilizzante Al vortex per secondi N.B.: il campione così preparato è stabile giorni a - C INIEZIONE : Iniettare µl della soluzione nel cromatografo HPLC e attendere la stampa del cromatogramma. Release N Lamotrigina e Monoidrossicarbamazepina in UV Gennaio
4 REAGENTE C: SOLUZIONE TEST LAMOTRIGINA e MONOIDROSSICARBAMAZEPINA - Avvertenze ANTIEPILETTICI : Lamotrigina Monoidrossicarbamazepina circa, mg/l circa, mg/l REAGENTE F : CALIBRATORE LIOFILO PLASMATICO COMBINATO LAMOTRIGINA MONOIDROSSICARBAMAZEPINA Modalità d uso e Ricostituzione: i Calibratori devono essere usati per calibrare il stema HPLC. Aggiungere esattamente ml di H O di grado HPLC e agitare delicatamente per minuti fino a quando tutto il materiale non è dsolto. Conservazione e stabilità : i Calibratori liofili sono stabili mesi dalla data di preparazione se conservati a C. Almeno mese se conservati a C e mesi a C una volta ricostituiti. Non usarli dopo la data di scadenza. Confezionamento : x ml Precauzioni : questo calibratore in matrice umana deve essere trattato con cura e considerato come potenzialmente infettivo., mg/l, mg/l PARAMETRI DEL DETECTOR SPETTROFOTOMETRICO λ GAIN TEMPO DI INTEGRAZIONE nm, AUFS secondi PROTEZIONE DELLA COLONNA ANALITICA Per salvaguardare la colonna analitica Reverse Phase GENESIS, x mm, µ, è tassativo l uso della Guard Column Cartridge Holder/CARTUCCIA PRECOLONNA, cod. ZUCC e dei PREFILTRI per CARTUCCIA PRECOLONNA ( x pz.) cod. ZUCC. CONDIZIONAMENTO DELLA COLONNA Installare la colonna analitica nuova Reverse Phase GENESIS, x mm, µ. Dconnettere il detector e far passare ml di una soluzione di H O : Metanolo ( : v/v ) e successivamente ml di H O per HPLC, al flusso di, ml/minuto. Non riciclare i liquidi di lavaggio. Filtrare la fase mobile con pompa da vuoto e filtro idoneo da, µ o, µ. Condizionare la colonna con la fase mobile al flusso di, ml/minuto e scaricare i primi ml. Condizionare ulteriormente per minuti anche a ricircolo di fase. NON è possibile effettuare anali a ricircolo di fase. Se la T Amb del Laboratorio è > C si consiglia di conservare a - C la Fase Mobile fra una seduta analitica e l altra. PULIZIA DELLA COLONNA PARAMETRI HPLC Dconnettere il detector. Flussare ml di H O e scaricare. Flussare una soluzione di H O : Metanolo o Acetonitrile ( : v/v ) per minuti scaricandola. Quando la colonna verrà usata di nuovo far passare ml di H O prima di condizionarla con la Fase Mobile. LOOP µl Flusso di lavoro consigliato, ml/minuto Pressione corrpondente Circa bar PARAMETRI INTEGRATORE HP / / ATTENUAZIONE PARAMETRI COMPUTER GESTIONALE SECONDO LE SPECIFICHE DEL SOFTWARE GESTIONALE
5 ACCESSORI E CONSUMABILI CODICE DESCRIZIONE CONFEZIONE Z Calibratore per Lamotrigina e Monoidrossicarbamazepina sieriche e/o plasmatiche x ml Z Controllo per Lamotrigina e Monoidrossicarbamazepina sieriche e/o plasmatiche Livello x ml Z Controllo per Lamotrigina e Monoidrossicarbamazepina sieriche e/o plasmatiche - Livello x ml Z Controllo per Lamotrigina e Monoidrossicarbamazepina sieriche e/o plasmatiche - Livelli e x x ml ZFME Colonna Analitica Genes C ( x,mm - um) PZ ZUCC Guard Column Cartridge Holder, Biocompact PZ ZUCC Prefiltri per colonna C (, mm x cm) x PZ
6 LAMOTRIGINA e MONOIDROSSICARBAMAZEPINA PLASMATICHE ( Cromatogrammi di Riferimento ) test.data c.data m o la b z h c o m o la o hcbz Fig. : Soluzione Test Fig. : Controllo combinato R.T.. Lamotrigina R.T.. Lamotrigina, mg/l R.T.. Monoidrossicarbamazepina R.T.. Monoidrossicarbamazepina, mg/l R.T.. Standard interno
7 LAMOTRIGINA e MONOIDROSSICARBAMAZEPINA PLASMATICHE ( Cromatogrammi di Riferimento ) c.data camp b.data m o la o hcbz b z h c o Fig. : Controllo combinato Fig. : Campione plasmatico di dializzato R.T.. Lamotrigina, mg/l R.T.. Monoidrossicarbamazepina, mg/l R.T.. Monoidrossicarbamazepina, mg/l R.T.. Standard Interno R.T.. Standard interno
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