dott.ssa Patrizia Pelosi

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1 Valutazione delle prestazioni dei laboratori italiani nel tempo sulla matrice «uova» e risultati della partecipazione al EUPT AO-12 (uovo intero liquido) ed al JRC-PT (Fipronil in uova) (patrizia.pelosi@iss.it) Istituto Superiore di Sanità - Roma Dipartimento Ambiente e Salute Reparto Esposizione a contaminanti in aria, suolo e da stili di vita Workshop 2018 Laboratori Nazionali di Riferimento AO/CF/FV/SRM e Laboratori Ufficiali per l analisi di residui di antiparassitari in alimenti

2 Argomenti trattati Risultati della partecipazione dei Laboratori italiani (Lab IT) al EUPT AO-12 (uovo intero liquido) Prestazione dei Lab IT nell analisi della matrice «uova» ( ) Risultati della partecipazione dei Lab IT al proficiency test JRC-PT (Fipronil in uova) 2

3 Risultati della partecipazione dei Lab IT al EUPT AO-12 «uovo intero liquido» EUPTs: Protocollo generale Protocollo specifico new Ed. 8: EUPT 2018! Ed. 7 - EUPT 2017 Revised 27 th January 2017 EUPT AO-12 (2017) last updated: 04,04,2017 3

4 Protocollo generale EUPTs (7 Edition: Revised 27 th January 2017) Parametri statistici per la valutazione degli EUPTs RACCOMANDAZIONI Performance non soddisfacente: attività di follow-up da riferire ai LNR e EURL Falsi positivi Falsi negativi IzI < IzI < 3.0 (opzionale ma raccomandato) Non ci sono cambiamenti sostanziali! Valore assegnato (x PT ): media dei risultati da statistica robusta, calcolo con Algoritmo A, Annex C del DIN ISO 13528: Deviazione Standard target (FFPs PT ): modello di Deviazione Standard basata sul Fit For Purpose (FFP) FFPs PT = x PT x FFP FFT= 0.25 (25%, dal EU PT6-2004) z-score (z): calcolato usando il modello di Deviazione Standard FFPs PT z-score = (x x PT ) / FFPs PT x = risultato del laboratorio Criteri di valutazione: Accettabile: IzI 2.0 Questionabile: 2.0 < IzI < 3.0 Non Accettabile: IzI 3.0 Categorizzazione laboratori: A e B (new in 2016) Categoria A «sufficient scope»: Analisi 90% composti obbligatori della target list Determinazione 90% analiti fortificati al campione Nessun falso positivo Valori combinati di z-score: AZ 2 «Average of the Squared z-scores» per i Lab categoria A Criteri di valutazione: Buono: AZ Soddisfacente: 2.0 < AZ 2 < 3.0 Insoddisfacente: AZ Deviazione standard robusta (QnSD): utilizzato l algoritmo A descritto in Annex C del DIN ISO 13528: Statistica robusta: minimizzazione degli scostamenti dei risultati. Falsi negativi: analiti «analizzati» dal laboratorio ma non riscontrati al MRRL calcolo dello z-score (MRRL) Falsi positivi: analiti non addizionati e non rilevati dagli organizzatori z-score non calcolato 4

5 Protocollo specifico - EUPT AO-12 (2017) Pesticides in whole liquid egg Matrice Uova omogeneizzate: 50 g (campione fortificato + bianco) Calendario Invio materiale test: 18 Aprile 2017 Scopo del laboratorio partecipante: 17 Aprile 2017 Invio risultati: 15 Maggio 2017 (Problemi di trasmissione!) Istruzioni particolari Conservazione del campione congelato a - 18 C (Test di omogeneità 5 g campione, variabilità può aumentare con campioni di analisi inferiori) Antiparassitari scopo dell EUPT Target Lists Annex 1: Composti da analizzare obbligatoriamente (59 analiti) : Composti da analizzare su base volontaria (25 analiti) Determinazioni Campione fortificato: determinazione degli analiti ad una concentrazione MRRL stabilito (MRRL = 0,010 mg/kg) Campione bianco: verifica della presenza di analiti (da usare per standards in matrice/calcolo del recupero) Risultati quantitativi (Result submission website: subpages 1-2) Determinazione degli analiti nel campione fortificato ( MRRL/ Reporting Limit) concentrazione in mg/kg di prodotto Determinazione analiti nel bianco Esperienza del laboratorio nella determinazione dei composti delle Target Lists con il metodo in uso Correzione per il recupero, se effettuata Recupero % dell analita riscontrato dal metodo utilizzato Informazioni sul metodo usato (Result submission website: subpages 3) Informazioni sul metodo di analisi e di determinazione analitica Ulteriori informazioni - Falsi negativi (Result submission website: subpage 4) Dopo il termine per l invio dei risultati, in caso di falsi negativi riscontrati, gli organizzatori chiedono dettagli sul metodo usato RACCOMANDAZIONI 5

6 EUPT AO-12 Matrice ed analiti selezionati Matrice «uova intere liquide»: matrice «uova» nel Reg. (UE) 2017/660 programma coordinato di monitoraggio europeo (MACP) tra Stati Membri (MS) Analiti selezionati: ricerca degli analiti più appropriati per l analisi dell uovo (MACP; Direttiva 96/23/CE; SANCO/12745/2013-Working Document sui piani di monitoraggio nazionale dei MS (WD)) Target lists: (+1) Annex 1: analiti da analizzare obbligatoriamente (n=59) (+1) 13 analiti : analiti da analizzare su base volontaria (n=35) 6 analiti (+16) (+3) Minimum Required Reporting Level (MRRL) = 0,01 mg/kg Target List Annex 1 e numero di analiti fortificati: in linea con i precedenti EUPT-AO (eccezione «miele») Target List e numero di analiti fortificati: incremento di analiti 6

7 Target List EUPT AO-12: Annex 1 Analiti da analizzare obbligatoriamente (n = 59) Organoclorurati (OC): 5 (-1) trans-chlordane p,p'-ddt Endosulfan sulfate cis-heptachlorepoxide trans-heptachlorepoxide Organofosforati (OP): 5 (+2) Chlorfenvinphos Diazinon Phosmet Phoxim Pirimiphos-Methyl Piretroidi (PYR): 3 Bifenthrin Deltamethrin Resmethrin 7

8 Target List EUPT AO-12: Analiti da analizzare su base volontaria (n = 35) Miscellanea: 6 (+3) BAC-C 12 BAC-C 14 BAC-C 16 Indoxacarb Spinosyn A Spinosyn D 8

9 Laboratori europei partecipanti al EUPT AO laboratori (104 registrati) da 30 Paesi (26 MS* + 2 EFTA** + Serbia + Tailandia) *: MS = Stati Membri **: EFTA = European Free Trade Association (Ralf Lippold «Joint Workshop of the EURLs, NRLs and OFLs for Pesticide Residues in Food and Feed» Settembre 2017, Friburgo - Germania) 9

10 EUPT AO-12: Lab IT partecipanti EUPT AO-12 (2017) 11 Lab IT: LNR-AO + 10 LU 10 LU-AO (IZS+APPA) 1 IZS non ha partecipato (matrice non nello scopo Lab) Laboratori Italiani Lab EUPT AO-12 (2017-uova) Istituto Superiore di Sanità LNR-AO X APPA Bolzano LU X IZS Abruzzo e Molise LU X IZS Lazio e Toscana (Roma) LU X IZS Lombardia ed Emilia Romagna LU X LNR-AO: Laboratorio Nazionale di Riferimento per i residui dei pesticidi sui prodotti alimentari di origine animale ed alimenti con un alto contenuto di grassi LU: Laboratori Ufficiali: IZS = Istituto Zooprofilattico Sperimentale; APPA = Agenzia Provinciale per la Protezione dell Ambiente IZS del Mezzogiorno LU X IZS Piemonte - Liguria - Valle d'aosta (GE) LU non nello scopo IZS Puglia e Basilicata LU X IZS Sardegna LU X IZS Sicilia LU X IZS Umbria e Marche LU X IZS delle Venezie LU X 10

11 CIRCA BC: metodo EURL-AO Metodo EURL-AO basato sul QuEChERS (LC-MS/MS) metodo + specifiche (tipo di ionizzazione; transizioni) 11

12 Metodi usati dai Lab IT EUPT AO-12 (uova) Codice Lab 10 Classe analiti determinati OC+PYR+OP+ Scopo n analiti Riferimenti Metodo 80 QuEChERS based Esperienza > 2 anni; < 1 anno: Indoxacarb Campione Solvente di estrazione Aggiunta H2O Correzione ph Purificazione 1 5 g ACN SI NO Freezing out Purificazione 2 Dispersive SPE (PSA/MgSO4) Recupero metodo NO (correzione con recupero analiti fuori range %) Range recupero % analiti fortificati % (correzione: %) Taratura Multi-livello con standard in matrice Determinazione (Standard Interno) (TPP, PCB-198, delta- HCH) LC-MS/MS (QQQ) (no St. Int.) Conferma LC-MS/MS (QQQ) Capacità analitica 23 OC+PYR+OP+ OC+PYR+OP (+) 70(+) QuEChERS based > 2 anni; 1-2 anni: Phosmet < 1 anno: Indoxacarb 3 g ACN SI 10 ml Metodo interno > 2 anni 5g ACN NO NO QuEChERS based 1-2 anni: BAC < 1 anno Spinosyn A/D 5g ACN SI 10 ml NO Dispersive SPE (PSA/MgSO4) SPE (C18) Dispersive SPE (PSA/MgSO4) Recupero automatico "procedural calibration" % NO % NO % Multi-livello con standard in matrice 1-livello con standard in matrice 1-livello con standard in matrice GC-MS/MS(QQQ) (TCPP) (PCB 209) LC-MS/MS (QQQ) (TPP) LC-MS/MS (QQQ) Metodi ed Esperienza 47 OC+PYR+OP+ 91 (+) EN (QuEChERS - Citrate buffered) > 2 anni 5 g ACN NO NO (Tampone Citrato) Dispersive-SPE (ODS/MgSO4) SI % Multi-livello con standard in matrice (TPP) LC-Orbitrap (TPP) (TPP) LC-Orbitrap (TPP) Solventi New Lab OC OC+PYR+OP+ 18 (new) 78 QuEChERS based > 2 anni; nessuna: Indoxacarb Spinosyn A/D nessuna informazione trasmessa SI 5 g ACN NO 10 ml Dispersive SPE (PSA/MgSO4) no BAC SI 73-81% NO % nessuna informazione trasmessa Multi-livello con standard in matrice Solvente (BAC) (no St. Int.) LC-MS/MS (QQQ) (no St. Int.) LC-MS/MS (QQQ) Cleanup 62 OC+PYR+OP+ 91 EN (QuEChERS - Citrate buffered) > 2 anni 5 g ACN SI 10 ml NO (Tampone Citrato) Dispersive SPE (PSA/MgSO4) Filtrazione Recupero automatico "standrd addition" % Multi-livello: - standard addition - standard in solvente (BAC) GC-MS/MS(QQQ) (TCPP) LC-MS/MS (QQQ) (TCPP) GC-MS/MS (QQQ) Recuperi OC+PYR+OP+ tau Fluvalinate () OC+PYR+OP+ 42 QuEChERS based > 2 anni 1 g ACN SI NO 65 (+) AOAC Official Method (QuEChERS - Acetate buffered) < 1 anno nessuna: Chlorfenvinphos, Phosmet, Pirimiphosmethyl, Indoxacarb 5 g Acetic acid 1% in acetonitrile NO NO (Tampone Acetato) NON SPECIFICATO (Dispersive SPE PSA/MgSO4) Dispersive SPE (PSA/MgSO4) dspe 500 mg Zr and dessiccation Recupero automatico (St. Int. Isotopico) Recupero automatico "standards addition" 70-95% % Multi-livello con standard in solvente Multi-livello con standard in matrice GC-MSD (Malathion d10) GC-MSD (no St. Int.) GC-MSD Tecnica analitica 88 OC 20 Metodo interno < 1 anno 40 g Esano/ Acetonen (1/1) NO NO GPC Colonna di Florisil NO % Multi-livello con standard in solvente GC-(m) ECD (no St. Int.) No info (diverse colonne: DB-5 DB-1701) Conferma 111 New Lab OC+PYR+OP 43 EN (QuEChERS - Citrate buffered) > 2 anni 5 g ACN SI 10 ml NO (Tampone Citrato) Dispersive SPE (PSA/MgSO4) Recupero automatico "procedural calibration" no info Standard addition GC-(m) ECD (PCB 209) TPP = Tri Phenyl Phosphate TCPP = Tris (1,3-dichloro-isopropyl)phosphate 12

13 EUPT AO-12 Preparazione dei campioni test Materiale test: «uovo intero liquido» Campione prelevato dal mercato locale Assenza di antiparassitari al di sopra del MRRL Spiking 1 Soluzione standard certificata (controllo con standards analitici dell EURL-AO) Preparazione del campione da inviare 12 kg di uova liquide fortificate con 20 ml soluzione standard omogenizzazione campioni test ca. 50 g Test di omogeneità (*) 10 campioni test random analizzati in duplicato Test di stabilità (*) Analisi effettuate dalla preparazione dei campioni alla fine dell EUPT AO-12 (*) IUPAC/ISO/AOAC International Protocol for Proficiency Testing ISO 13528:2005); Criteri di accettabilità riportati nel «General Protocol for EU proficiency Tests on Pesticide residues in Food and Feed» 6 Edition: revised 8 th February,

14 Target Annex 1 Concentrazioni degli analiti fortificati al campione test Principi attivi determinati MRRL (mg/kg) Valore assegnato (1) (mg/kg) MRL (2) (mg/kg) Val.Asseg/ MRL Val.Assegn/ MRRL trans-chlordane 0,010 0,0260 0,005* 5,2 2,6 p,p'-ddt 0,010 0,0466 0,05 0,9 4,7 Endosulfan sulfate 0,010 0,0460 0,05* 0,9 4,6 cis-heptachlorepoxide 0,010 0,0874 4,4 8,7 0,02 trans-heptachlorepoxide 0,010 0,0512 2,6 5,1 Chlorfenvinphos 0,010 0,1127 0,01* 11,3 11,3 Diazinon 0,010 0,0590 0,02* 3,0 5,9 Phosmet 0,010 0,0795 0,05* 1,6 8,0 Phoxim 0,010 0,0614 0,06 1,0 6,1 Pirimiphos-Methyl 0,010 0,1217 0,01* 12,2 12,2 Bifenthrin 0,010 0,1673 0,01* 16,7 16,7 Deltamethrin 0,010 0,0642 0,02* 3,2 6,4 Resmethrin 0,010 0,2482 0,02* 12,4 24,8 BAC-C 12 0,010 0,2030 2,0 20,3 BAC-C 14 0,010 0,0709 0,1 0,7 7,1 BAC-C 16 0,010 0,0483 0,5 4,8 Indoxacarb 0,010 0,0565 0,02 2,8 5,7 Spinosyn A 0,010 0,3120 1,6 31,2 0,2 Spinosyn D 0,010 0,1052 0,5 10,5 (1) : Robust Mean calcolata secondo l'algoritmo A descritto nell'annex C del documento DIN ISO 13528: "Statistical methods for use in proficiency testing by interlaboratory comparisons". (2) MRL: Maximum Residue Level, da definizione di residuo del Reg. (CE) n.396/2005 e Reg. (UE) n.37/2010 (solo Phoxim) Standard Spinosad: Spinosyn A+D «information only» trans-chlordane MRL = 0,5 x MRRL MRL/MRRL 1-6 x MRRL (Annex 1) (valutazione capacità analitica a ca MRL) 2-10/20 x MRRL () Val.Assegnato/MRL 1-17 x MRL (Annex 1) 0,5-3 x MRL () (alcuni spiking MRL) Val.Assegnato/MRRL 3-25 x MRRL (Annex 1) 5-20 x MRRL () (valutazione capacità analitica dichiarata) 14

15 n Lab analisi analita Target List Legenda: (1): Valore asseganto = Robust Mean, calcolata secondo l'algoritmo A descritto nell'annex C del documento DIN ISO 13528: "Statistical methods for use in proficiency testing by interlaboratory comparisons". (2): MRL: Maximum Residue Level, da definizione di residuo del Reg. (CE) n.396/2005 e Reg. (UE) n.37/2010 (solo Phoxim) n.d. Falso negativo n.a. non analizzato Risultati dei Lab IT partecipanti al EUPT AO-12 5* Calcolo preliminare dello z-score limitato al valore 5 (convenzione) Principi attivi determinati MRL (2) Lab 10 Lab 23 Lab 38 Lab 47 Lab 51 Lab 57 Lab 62 Lab 73 Lab 82 Lab 88 Lab trans-chlordane 0,010 0,0260 0,005* -1,4 0,3 1,3 1,6-1,8-2,5-1,1-0,7 0,6-2,2-1,5 11 p,p'-ddt 0,010 0,0466 0,05-1,3 0,1 0,6 n.d. (-3,1) n.d. (-3,1) -2,7-0,8 0,0-1,3-1,6-1,3 9 Endosulfan sulfate 0,010 0,0460 0,05* -0,1 n.d. (-3,1) 0,1 0,4 n.a. 5* 0,1 n.a. 0,9-2,2 1,6 11 cis-heptachlorepoxide 0,010 0,0874-1,0 0,9 0,8 0,6-2,7-1,8-0,2-0,2 0,8-2,1-1,3 0,02 11 trans-heptachlorepoxide 0,010 0,0512-0,2 0,4 1,2-0,1-2,6-2,0-0,3-0,1 n.d. (-3,2) n.d. (-3,2) -1,3 9 Chlorfenvinphos 0,010 0,1127 0,01* -0,3 0,0 0,2 0,2 n.a. -1,3 0,5-0,3-2,1 n.a. -1,3 Annex 1 9 Diazinon 0,010 0,0590 0,02* -0,1 0,9 1,2 0,6 n.a. -1,2 0,7-0,5-2,2 n.a. -0,7 8 Phosmet 0,010 0,0795 0,05* n.d. (-3,5) 1,0 1,3 0,7 n.a. 1,5 0,7 n.a. -1,1 n.a. -1,5 5 Phoxim 0,010 0,0614 0,06-0,9 n.a. n.a. 0,2 n.a. -0,7 0,4 n.a. n.a. n.a. n.d. (-3,3) 9 Pirimiphos-Methyl 0,010 0,1217 0,01* -0,7 0,1-0,6-0,6 n.a. -1,2 0,8-0,3-2,4 n.a. -0,8 9 Bifenthrin 0,010 0,1673 0,01* -2,4-0,3 0,6 0,8 n.a. -2,5-0,8 0,0-0,1 n.a. n.d. (-3,8) 9 Deltamethrin 0,010 0,0642 0,02* -1,8 0,0 1,2 1,2 n.a. -1,3-0,8 3,7-0,4 n.a. -0,9 5 Resmethrin 0,010 0,2482 0,02* n.a. n.a. 1,9 n.d. (-3,8) n.a. n.a. -0,9-0,6 n.d. (-3,8) n.a. n.a. 4 BAC-C 12 0,010 0,2030 n.a. n..a 0,6 0,1 n..a -0,8 0,0 n..a n..a n..a n.a. 4 BAC-C 14 0,010 0,0709 0,1 n.a. n.a. 0,9 0,0 n.a. -1,0 0,4 n.a. n.a. n.a. n.a. Codice Laboratorio partecipante MRRL Robust Mean (1) (mg/kg prodotto) z-score (Fit For Purpose, 25%) 4 BAC-C 16 0,010 0,0483 n.a. n.a. 1,3 0,6 n.a. -1,6 0,4 n.a. n.a. n.a. n.a. 7 Indoxacarb 0,010 0,0565 0,02 0,2 0,0 0,8 0,9 n.a. -0,7 0,3 n.a. 0,0 n.a. n.a. 6 Spinosyn A 0,010 0,3120 1,3 n.a. -0,3-0,1 n.a. 0,4 0,1 n.a. n.d. (-3,9) n.a. n.a. 0,2 6 Spinosyn D 0,010 0,1052-0,2 n.a. -2,0 0,9 n.a. 5* -0,7 n.a. n.d. (-3,6) n.a. n.a. Buona capacità analitica dei laboratori per analiti Annex 1 (discreta ) Difficoltà analitiche: 10 falsi negativi da 7 Lab 2 Lab IT hanno nello scopo solo OC Phoxim e Resmethrin analizzata da 5/1115 Lab IT

16 Target List Annex 1 Categoria A OC OP PYR Varie Legenda: Principi attivi determinati Codice Laboratorio partecipante MRRL Robust Mean (1) (mg/kg prodotto) EUPT AO-12: prestazioni dei Lab IT MRL (2) Lab 10 Lab 23 Lab 38 Lab 47 Lab 51 Lab 57 Lab 62 Lab 73 Lab 82 Lab 88 Lab 111 trans-chlordane 0,010 0,0260 0,005* -1,4 0,3 1,3 1,6-1,8-2,5-1,1-0,7 0,6-2,2-1,5 p,p'-ddt 0,010 0,0466 0,05-1,3 0,1 0,6 n.d. (-3,1) n.d. (-3,1) -2,7-0,8 0,0-1,3-1,6-1,3 Endosulfan sulfate 0,010 0,0460 0,05* -0,1 n.d. (-3,1) 0,1 0,4 n.a. 5* 0,1 n.a. 0,9-2,2 1,6 cis-heptachlorepoxide 0,010 0,0874-1,0 0,9 0,8 0,6-2,7-1,8-0,2-0,2 0,8-2,1-1,3 0,02 trans-heptachlorepoxide 0,010 0,0512-0,2 0,4 1,2-0,1-2,6-2,0-0,3-0,1 n.d. (-3,2) n.d. (-3,2) -1,3 Chlorfenvinphos 0,010 0,1127 0,01* -0,3 0,0 0,2 0,2 n.a. -1,3 0,5-0,3-2,1 n.a. -1,3 Diazinon 0,010 0,0590 0,02* -0,1 0,9 1,2 0,6 n.a. -1,2 0,7-0,5-2,2 n.a. -0,7 Phosmet 0,010 0,0795 0,05* n.d. (-3,5) 1,0 1,3 0,7 n.a. 1,5 0,7 n.a. -1,1 n.a. -1,5 Phoxim 0,010 0,0614 0,06-0,9 n.a. n.a. 0,2 n.a. -0,7 0,4 n.a. n.a. n.a. n.d. (-3,3) Pirimiphos-Methyl 0,010 0,1217 0,01* -0,7 0,1-0,6-0,6 n.a. -1,2 0,8-0,3-2,4 n.a. -0,8 Bifenthrin 0,010 0,1673 0,01* -2,4-0,3 0,6 0,8 n.a. -2,5-0,8 0,0-0,1 n.a. n.d. (-3,8) Deltamethrin 0,010 0,0642 0,02* -1,8 0,0 1,2 1,2 n.a. -1,3-0,8 3,7-0,4 n.a. -0,9 Resmethrin 0,010 0,2482 0,02* n.a. n.a. 1,9 n.d. (-3,8) n.a. n.a. -0,9-0,6 n.d. (-3,8) n.a. n.a. BAC-C 12 0,010 0,2030 n.a. n..a 0,6 0,1 n..a -0,8 0,0 n..a n..a n..a n.a. BAC-C 14 0,010 0,0709 0,1 n.a. n.a. 0,9 0,0 n.a. -1,0 0,4 n.a. n.a. n.a. n.a. BAC-C 16 0,010 0,0483 n.a. n.a. 1,3 0,6 n.a. -1,6 0,4 n.a. n.a. n.a. n.a. Indoxacarb 0,010 0,0565 0,02 0,2 0,0 0,8 0,9 n.a. -0,7 0,3 n.a. 0,0 n.a. n.a. Spinosyn A 0,010 0,3120 1,3 n.a. -0,3-0,1 n.a. 0,4 0,1 n.a. n.d. (-3,9) n.a. n.a. 0,2 Spinosyn D 0,010 0,1052-0,2 n.a. -2,0 0,9 n.a. 5* -0,7 n.a. n.d. (-3,6) n.a. n.a. n z-score Accettabili ( z 2) n z-score Questionabili (2< z < 3) n z-score Non Accettabili ( z 3) n.d. - Falsi Negativi (escluso Spinosad) n.a. = non analizzati (escluso Spinosad) n analiti target fortificati determinati (n=13) % analiti target fortificati determinati (90%) n analiti target list Annex 1 analizzati (n=59) % analiti target list Annex 1 analizzati (90%) Falsi Positivi (n=0) AZ 2 "Average of the Squared z-scores" z-score (Fit For Purpose, 25%) (n.d.) 1 (n.d.) 0 2 (n.d.) 1 (1 n.d.) (n.d.) 1 (n.d.) 2 (n.d.) B B 1,09 B B 5,00 0,47 B B B B (1): Valore asseganto = Robust Mean, calcolata secondo l'algoritmo A descritto nell'annex C del documento DIN ISO 13528: "Statistical methods for use in proficiency testing by interlaboratory comparisons". (2): MRL: Maximum Residue Level, da definizione di residuo del Reg. (CE) n.396/2005 e Reg. (UE) n.37/2010 (solo Phoxim) n.d. Falso negativo n.a. non analizzato 5* Calcolo preliminare dello z-score limitato al valore 5 (convenzione) Prestazioni peggiori rispetto a EUPT AO-11 (lardo) Annex 1 2/11 Lab z-scores «Accettabili» per tutti i composti 5/11 Lab z-score «Questionabili» 9/11 Lab z-scores «Non Accettabili» Aumentato il numero di falsi negativi 2 Lab falsi positivi (n=3) 2 Lab performance scarse 3 Lab Categoria A: 2 Lab - Buona 1 Lab - Insoddisfacente 9/11 Lab ampio scopo ( 77 % analiti Annex 1) 4/11 Lab z-scores «Accettabili» per tutti i composti 16

17 Falsi positivi e falsi negativi Falsi Positivi - Analiti con risultati > MRRL ma non addizionati al campione test 2 falsi positivi da 2 Lab IT partecipanti MRRL = 0,01 mg/kg Falsi Negativi - Analiti nello scopo del laboratorio ma non riscontrati nel campione analizzato (calcolo dello z-score usando MRRL o RL del laboratorio) 7 analti non determinati (n.d.): 10 falsi negativi da 7 Lab IT partecipanti Annex 1 Principi attivi determinati MRRL (mg/kg) Valore assegnato (1) (mg/kg) MRL (2) (mg/kg) Val.Asseg/ MRL Val.Assegn/ MRRL p,p'-ddt 0,010 0,0466 0,05 0,9 4,7 p,p'-ddt Risultati (Lab) n.d. (Lab 51) 0,0471 (Lab 73) p,p'-dde (Falso positivo) 0,030 (Lab 51) 0,010 (Lab 73) o,p -DDT (Falso positivo) 0,060 (Lab 73) Falsi negativi MRRL (mg/kg) Valore assegnato (1) (mg/kg) MRL (2) (mg/kg) Val.Asseg/ MRL Val.Assegn/ MRRL Laboratori p,p'-ddt 0,010 0,0466 0,05 0,9 4,7 Lab 47 - Lab 51 Endosulfan sulfate 0,010 0,0460 0,05* 0,9 4,6 Lab 23 trans-heptachlorepoxide 0,010 0,0512 0,02 2,6 5,1 Lab 82 - Lab 88 Phosmet 0,010 0,0795 0,05* 1,6 8,0 Lab 10 Phoxim 0,010 0,0614 0,06 1,0 6,1 Lab 111 Bifenthrin 0,010 0,1673 0,01* 16,7 16,7 Lab 111 Resmethrin 0,010 0,2482 0,02* 12,4 24,8 Lab 47 - Lab 82 (1) : Robust Mean calcolata secondo l'algoritmo A descritto nell'annex C del documento DIN ISO 13528: "Statistical methods for use in proficiency testing by interlaboratory comparisons". (2) MRL: Maximum Residue Level, da definizione di residuo del Reg. (CE) n.396/2005 e Reg. (UE) n.37/2010 (solo Phoxim) OC-OP: valore assegnato simile a MRL (5-8 x MRRL) PYR: valore assegnato > MRL e MRRL!!! 17

18 Falsi positivi e falsi negativi Falsi Positivi - Analiti con risultati > MRRL ma non addizionati al campione test 2 falsi positivi da 2 Lab IT partecipanti MRRL = 0,01 mg/kg Falsi Negativi - Analiti nello scopo del laboratorio ma non riscontrati nel campione analizzato (calcolo dello feedback z-score usando al MRRL LNR o su RL del azioni laboratorio) intraprese dai LU 7 analti non determinati (n.d.): 10 falsi negativi da 7 Lab IT partecipanti Annex 1 Principi attivi determinati MRRL (mg/kg) Valore assegnato (1) (mg/kg) MRL (2) (mg/kg) Val.Asseg/ MRL Val.Assegn/ MRRL p,p'-ddt 0,010 0,0466 0,05 0,9 4,7 p,p'-ddt Risultati (Lab) n.d. (Lab 51) 0,0471 (Lab 73) p,p'-dde (Falso positivo) 0,030 (Lab 51) 0,010 (Lab 73) o,p -DDT (Falso positivo) 0,060 (Lab 73) Falsi negativi Protocollo generale: MRRL (mg/kg) Valore assegnato (1) (mg/kg) MRL (2) (mg/kg) Val.Asseg/ MRL Val.Assegn/ MRRL Laboratori p,p'-ddt 0,010 0,0466 0,05 0,9 4,7 Lab 47 - Lab 51 Endosulfan sulfate 0,010 0,0460 0,05* 0,9 4,6 Lab 23 trans-heptachlorepoxide 0,010 0,0512 0,02 2,6 5,1 Lab 82 - Lab 88 Phosmet 0,010 0,0795 0,05* 1,6 8,0 Lab 10 Phoxim 0,010 0,0614 0,06 1,0 6,1 Lab 111 Bifenthrin 0,010 0,1673 0,01* 16,7 16,7 Lab 111 Resmethrin 0,010 0,2482 0,02* 12,4 24,8 Lab 47 - Lab 82 (1) : Robust Mean calcolata secondo l'algoritmo A descritto nell'annex C del documento DIN ISO 13528: "Statistical methods for use in proficiency testing by interlaboratory comparisons". (2) MRL: Maximum Residue Level, da definizione di residuo del Reg. (CE) n.396/2005 e Reg. (UE) n.37/2010 (solo Phoxim) OC-OP: valore assegnato simile a MRL (5-8 x MRRL) PYR: valore assegnato > MRL e MRRL!!! 18

19 Difficoltà analitiche dei Lab IT falsi negativi Codice Lab Classe analiti determinati Scopo n analiti Riferimenti Metodo Esperienza Campione Solvente di estrazione Aggiunta H2O Correzione ph Purificazione 1 Purificazione 2 Recupero metodo Range recupero % analiti fortificati Taratura Determinazione (Standard Interno) Conferma 10 OC+PYR+OP+ 80 QuEChERS based > 2 anni; < 1 anno: Indoxacarb 5 g ACN SI NO Freezing out Dispersive SPE (PSA/MgSO4) NO (correzione con recupero analiti fuori range %) % (correzione: %) Multi-livello con standard in matrice (TPP, PCB-198, delta- HCH) LC-MS/MS (QQQ) (no St. Int.) LC-MS/MS (QQQ) n.d. Phosmet* 23 OC+PYR+OP+ 70(+) QuEChERS based > 2 anni; 1-2 anni: Phosmet < 1 anno: Indoxacarb 3 g ACN SI 10 ml Dispersive SPE (PSA/MgSO4) Recupero automatico "procedural calibration" % Multi-livello con standard in matrice GC-MS/MS(QQQ) (TCPP) n.d. Endosulfan Sulfate OC+PYR+OP+ Metodo interno > 2 anni 5g ACN NO NO SPE (C18) NO % 1-livello con standard in matrice (PCB 209) (+) QuEChERS based 1-2 anni: BAC < 1 anno Spinosyn A/D 5g ACN SI 10 ml NO Dispersive SPE (PSA/MgSO4) NO % 1-livello con standard in matrice LC-MS/MS (QQQ) (TPP) LC-MS/MS (QQQ) OC+PYR+OP+ New Lab OC OC+PYR+OP+ OC+PYR+OP+ OC+PYR+OP+ tau Fluvalinate () OC+PYR+OP+ 91 (+) 18 (new) EN (QuEChERS - Citrate buffered) 78 QuEChERS based 91 EN (QuEChERS - Citrate buffered) > 2 anni 5 g ACN NO > 2 anni; nessuna: Indoxacarb Spinosyn A/D 5 g ACN > 2 anni 5 g ACN SI 10 ml SI 10 ml NO (Tampone Citrato) NO NO (Tampone Citrato) 42 QuEChERS based > 2 anni 1 g ACN SI NO 65 (+) AOAC Official Method (QuEChERS - Acetate buffered) < 1 anno nessuna: Chlorfenvinphos, Phosmet, Pirimiphosmethyl, Indoxacarb 88 OC 20 Metodo interno < 1 anno 40 g 5 g nessuna informazione trasmessa Acetic acid 1% in acetonitrile NO NO (Tampone Acetato) Dispersive-SPE (ODS/MgSO4) Dispersive SPE (PSA/MgSO4) no BAC Dispersive SPE (PSA/MgSO4) NON SPECIFICATO (Dispersive SPE PSA/MgSO4) Dispersive SPE (PSA/MgSO4) Filtrazione dspe 500 mg Zr and dessiccation SI % SI 73-81% NO % Recupero automatico "standrd addition" Recupero automatico (St. Int. Isotopico) Recupero automatico "standards addition" % 70-95% % Esano/ Acetonen (1/1) NO NO GPC Colonna di Florisil NO % Multi-livello con standard in matrice Multi-livello con standard in matrice Solvente (BAC) Multi-livello: - standard addition - standard in solvente (BAC) Multi-livello con standard in solvente (TPP) LC-Orbitrap (TPP) (no St. Int.) LC-MS/MS (QQQ) (no St. Int.) GC-MS/MS(QQQ) (TCPP) LC-MS/MS (QQQ) (TCPP) GC-MSD (Malathion d10) (TPP) LC-Orbitrap (TPP) nessuna informazione trasmessa Multi-livello con standard in matrice Multi-livello con standard in solvente GC-MSD (no St. Int.) GC-(m) ECD (no St. Int.) LC-MS/MS (QQQ) GC-MS/MS (QQQ) GC-MSD No info (diverse colonne: DB-5 DB-1701) n.d. p,p -DDT** n.d. Resmethrin** n.d. p,p -DDT* f.p. p,p -DDE* z «Questionabili» Z-Score = 5 Endosulfan Sulfate z «Questionabili» Z-Score = 3,7 Deltamethrin** f.p**p,p -DDE/o,p -DDT n.d. trans-hepo* n.d. Resmethrin* n.d. Spinosyn A/D* z «Questionabili» n.d. trans-hepo z «Questionabili» 111 New Lab OC+PYR+OP 43 EN (QuEChERS - Citrate buffered) > 2 anni 5 g ACN SI 10 ml NO (Tampone Citrato) Dispersive SPE (PSA/MgSO4) Recupero automatico "procedural calibration" no info Standard addition GC-(m) ECD (PCB 209) n.d. Phoxim* n.d. Bifenthrin* TPP = Tri Phenyl Phosphate TCPP = Tris (1,3-dichloro-isopropyl)phosphate * No routine/no accreditati ** No Accreditati ma in routine Accreditati e in routine 19

20 Performance europea del EUPT AO-12 Deviazione Standard Relativa robusta (QnSD) per gli analiti fortificati QnSD 20-30% QnSD = Deviazione Standard robusta calcolata con l algoritmo A (DIN ISO 13528: , Annex C) EUPT AO-11 (lardo) QnSD < 20% Risultato migliore rispetto ai precedenti EUPT-AO Buona capacità analitica delle Target lists 20

21 EUPT AO-12 - Performance Lab IT vs partecipanti Legenda: n.d. = non determinato (falso negativo) Laboratori italiani Laboratori partecipanti n di laboratori italiani partecipanti = 11 n di laboratori con risultati inviati = 102 Annex 1 Principi attivi determinati n.d. falsi negativi Lab che hanno trovato analita % Lab che analizzano l'analita target % z-score Accettabile % z-score Questionabile % z-score Non accettabile n.d. falsi negativi Lab che hanno trovato analita % Lab che analizzano l'analita target % z-score Accettabile % z-score Questionabile % z-score Non accettabile Molti n.d. tra i partecipanti Capacità analitica buona Z-Scores variabilità Annex 1: Analiti nello scopo dell'eupt AO-12 da ricercare in manieara obbligatoria trans-chlordane ,8 18,2 0, ,0 7,4 9,6 p,p'-ddt ,7 9,1 18, ,8 8,1 8,1 Endosulfan sulfate ,7 11,1 22, ,5 3,2 7,4 cis-heptachlorepoxide ,8 18,2 0, ,3 4,3 4,3 trans-heptachlorepoxide ,7 9,1 18, ,9 2,2 12,9 Chlorfenvinphos ,9 11,1 0, ,5 3,6 6,0 Diazinon ,9 11,1 0, ,6 3,2 5,3 Phosmet ,5 0,0 12, ,2 2,6 10,3 Phoxim ,0 0,0 20, ,3 1,5 6,2 Pirimiphos-Methyl ,9 11,1 0, ,6 2,2 3,3 Bifenthrin ,7 22,2 11, ,8 4,5 5,7 Deltamethrin ,9 0,0 11, ,1 1,1 9,8 Resmethrin ,0 0,0 40, ,3 4,4 10,3 : Analiti nello scopo dell'eupt AO-12 da ricercare su base volontaria BAC-C ,0 0,0 0, ,3 3,2 6,5 BAC-C ,0 0,0 0, ,3 3,2 6,5 BAC-C ,0 0,0 0, ,5 0,0 6,5 Indoxacarb ,0 0,0 0, ,3 0,0 7,7 Spinosyn A ,3 0,0 16, ,8 7,3 10,9 Spinosyn D ,7 0,0 33, ,0 7,3 32,7 OC: prestazioni discrete OP: Phosmet/Phoxim (n.d.) PYR: problemi Resmethrin Phoxim e Resmethrin Capacità analitica inferiore Falsi negativi z-scores «Non accettabili» Tutti z-score «Accettabili» Nessun falso negativo Capacità analitica buona CONSIDERAZIONI FINALI: prestazioni confrontabili dei Lab IT vs EUPT AO-12 21

22 EUPT AO-12: Considerazioni finali sui Lab IT partecipanti Partecipazione al Proficiency Test Buona partecipazione dei laboratori italiani di settore con matrice «uovo» nello scopo analitico (11 Lab IT=LNR-AO + 10 LU-AO (IZS; APPA) Necessaria la partecipazione di tutti i laboratori di controllo ufficiale (art. 28 Reg. (CE) n. 396/2005) Prestazioni dei laboratori Metodi analitici: non si hanno informazioni (Metodo QuEChERS e Metodi Interni?) Analiti Annex 1 (n=59): Alta percentuale di laboratori che analizzano gli analiti fortificati ma presenza di n.a. Sono analizzate tutte le classi di analiti ad eccezione di 2 Lab con scopo limitato (solo OC) 5/11 Lab z-scores «Questionabili» Molti falsi negativi (n.d.) z-scores «Non accettabili» 2 Lab ha prestazioni scarse (scopo e z-scores «Questionabili»/«Non Accettabili») Lab in categoria A: diminuito numero dei laboratori (3/11) ed 1 Lab ha prestazioni «Insoddisfacenti» (n.d.) Analiti (n=35) I Lab che analizzano i composti hanno buone prestazioni: z-scores tutti «Accettabili» Obiettivi di miglioramento (compatibilmente con le risorse dei laboratori) Aumentare numero di analiti nello scopo dei laboratori presenti in Annex 1 (tutte le classi OC, OP, PYR) Incrementare lo scopo dei laboratori anche con analiti (da analizzare su base volontaria). Migliorare la prestazione di alcuni laboratori sulla matrice «uovo» (z-scores; falsi positivi e negativi): dare feedback al LNR-AO sulle azioni intraprese 22

23 Prestazione dei Lab IT nell analisi della matrice «uova» ( ) EUPT AO-03 (2008) EUPT AO-09 (2014) EUPT AO-12 (2017) Obiettivo EURL-AO Valutazione dei laboratori nel tempo (numerosità-prestazioni) Aumentare lo scopo degli analiti nel EUPT (analiti su base volontaria): analiti nello scopo dei piani di monitoraggio europei e nazionali determinabili sia in GC che LC Partecipanti Metodi usati Performance 23

24 Lab IT partecipanti agli EUPT su «uova» EUPT AO-03 (2008) 7 Lab IT: LNR-AO + 6 LU 6 LU-AO (IZS) 5 IZS non hanno partecipato EUPT AO-09 (2014) 10 Lab IT: LNR-AO + 9 LU 8 LU-AO (IZS+APPA) 1 LU-AO-olio/LU-FV (ARPA) 3 IZS non hanno partecipato (2 IZS: matrice non nello scopo Lab) EUPT AO-12 (2017) 11 Lab IT: LNR-AO + 10 LU 10 LU-AO (IZS+APPA) 1 IZS non ha partecipato (matrice non nello scopo Lab) ARPA Lazio (matrice non nello scopo) Laboratori Italiani Lab EUPT AO-03 (2008-uova) EUPT AO-09 (2014-uova) LNR-AO: Laboratorio Nazionale di Riferimento per i residui dei pesticidi sui prodotti alimentari di origine animale ed alimenti con un alto contenuto di grassi LU: Laboratori Ufficiali: IZS = Istituto Zooprofilattico Sperimentale; ARPA = Agenzia Regionale per la Protezione dell Ambiente; APPA = Agenzia Provinciale per la Protezione dell Ambiente EUPT AO-12 (2017-uova) Istituto Superiore di Sanità LNR-AO X X X APPA Bolzano LU X X ARPA Lazio (LT) LU X LU AO-olio + FV (non nello no LU AO IZS Abruzzo e Molise LU X X IZS Lazio e Toscana (Roma) LU X X IZS Lombardia ed Emilia Romagna LU X X X IZS del Mezzogiorno LU non nello scopo X IZS Piemonte - Liguria - Valle d'aosta (GE) LU X non nello scopo non nello scopo IZS Puglia e Basilicata LU no X IZS Sardegna LU X X X IZS Sicilia LU X X IZS Umbria e Marche LU X X X IZS Umbria e Marche (SEZ. Ancona) LU X non più LU non più LU IZS delle Venezie LU X X X 24

25 Lab IT partecipanti agli EUPT su «uova» EUPT AO-03 (2008) 7 Lab IT: LNR-AO + 6 LU 6 LU-AO (IZS) 5 IZS non hanno partecipato EUPT AO-09 (2014) 10 Lab IT: LNR-AO + 9 LU 8 LU-AO (IZS+APPA) 1 LU-AO-olio/LU-FV (ARPA) 3 IZS non hanno partecipato (2 IZS: matrice non nello scopo Lab) EUPT AO-12 (2017) 11 Lab IT: LNR-AO + 10 LU 10 LU-AO (IZS+APPA) 1 IZS non ha partecipato (matrice non nello scopo Lab) ARPA Lazio (matrice non nello scopo) Laboratori Italiani Lab EUPT AO-03 (2008-uova) EUPT AO-09 (2014-uova) LNR-AO: Laboratorio Nazionale di Riferimento per i residui dei pesticidi sui prodotti alimentari di origine animale ed alimenti con un alto contenuto di grassi LU: Laboratori Ufficiali: IZS = Istituto Zooprofilattico Sperimentale; ARPA = Agenzia Regionale per la Protezione dell Ambiente; APPA = Agenzia Provinciale per la Protezione dell Ambiente EUPT AO-12 (2017-uova) Istituto Superiore di Sanità LNR-AO X X X APPA Bolzano LU X X ARPA Lazio (LT) LU X LU AO-olio + FV (non nello no LU AO IZS Abruzzo e Molise LU X X IZS Lazio e Toscana (Roma) LU X X IZS Lombardia ed Emilia Romagna LU X X X Incremento dei laboratori italiani partecipanti: IZS del Mezzogiorno LU non nello scopo X IZS Piemonte - Liguria - Valle d'aosta (GE) LU X non nello scopo non nello scopo matrice «uova» nello scopo IZS Puglia e Basilicata LU no X IZS Sardegna LU X X X IZS Sicilia LU X X IZS Umbria e Marche LU X X X IZS Umbria e Marche (SEZ. Ancona) LU X non più LU non più LU IZS delle Venezie LU X X X 25

26 Metodi usati: EUPT AO matrice «uovo» EUPT AO-03 (2008) Tutti metodi interni Metodi multi-residuo ma non multi-classe Campione iniziale ( g) Vari solventi di estrazione (diversa polarità) Purificazione: GPC e/o SPE su cartuccia (C18, Si, Allumina, Florisil) Taratura con Standard in solvente Uso dello standard interno Determinazione in GC-ECD/ FPD /NPD (1 Lab GC-MSD) Trend dei laboratori italiani ( ) EUPT AO-09 (2014) Metà dei metodi interni e Metodo QuEChERS (varianti) Metodi multi-classe e multiresiduo Campione iniziale ridotto ( g) Solvente di estrazione più usato: ACN Purificazione: SPE dispersiva/ o SPE su cartuccia Taratura con Standard in matrice (maggioranza) Uso dello standard interno Determinazione e conferma con GC-MS/MS e/o LC-MS/MS EUPT AO-12 (2017) Solo 2 metodi interni Aumentato uso metodo QuEChERS (varianti) Metodi multi-classe e multiresiduo scopo più ampio Campione iniziale ridotto ( g) Solvente di estrazione predominante: ACN Purificazione predominante: SPE dispersiva (alternative SPE-GPC-Florisil) Taratura con Standard in matrice (maggioranza) Uso dello standard interno Determinazione e conferma con GC-MS/MS e/o LC-MS/MS 26

27 Miglioramento dei metodi matrice «uovo» Laboratori usano metodi consolidati con ampio spettro matrici (QuEChER) Laboratori con «scopo ampio» Metodi «miniaturizzati» e rapidi Compensazione dell «effetto matrice» Tecniche di determinazione e conferma in spettrometria di massa Aumentato l uso della cromatografia liquida (LC-MS/MS) in aggiunta a quella gassosa (GC-MS/MS) EUPT AO-12: performance non ottimale 27

28 Analiti fortificati (Target list Annex 1) EUPT AO-03: 55 analiti (MRRL: 0,002-0,020 mg/kg) EUPT AO-09: 60 analiti (MRRL: 0,002-0,020 mg/kg) 5 OC (+ 2 definizioni di residuo): 5 OC: DDT (definizione residuo) Dieldrin (p,p'-ddd (TDE)) Endosulfan sulfate Endrin p,p'-ddt gamma-hch o,p'-ddt trans-heptachlorepoxide. Endosulfan (definizione residuo) Endosulfan sulfate 3 (+1) OP: HCB Diazinon Nitrofen Phoxim 2 OP: Parathion(-ethyl) Chlorpyrifos-ethyl (Malathion) Parathion-methyl EUPT AO-12: 59 analiti (MRRL: 0,010 mg/kg) 5 OC: trans-chlordane p,p'-ddt Endosulfan sulfate cis-heptachlorepoxide trans-heptachlorepoxide 5 OP: Chlorfenvinphos Diazinon Phosmet Phoxim Pirimiphos-Methyl 4 PYR: Cyfluthrin Cypermethrin Deltamethrin Fenvalerate 2 PYR: Permethrin (sum) Deltamethrin 3 PYR: Bifenthrin Deltamethrin Resmethrin 28

29 Analiti fortificati (Target list ) EUPT AO-03: Nessuna Target List EUPT AO-09: 27 analiti 6 analiti fortificati: BAC-C12 BAC-C14 Bixafen Carbendazim DDAC-C10 Metaflumizone EUPT AO-12: 25 analiti 4 (+2) analiti fortificati: BAC-C 12 BAC-C 14 BAC-C 16 Indoxacarb (Spinosyn A) (Spinosyn D) MRRL: 0,010 mg/kg Performance generalmente buona dei Lab che analizzano composti 29

30 EUPT AO-03: 55 analiti Classe analiti Annex OC OP PYR Categoria A Performance Codice Laboratorio partecipante Principi attivi determinati Performance analiti Target list Annex 1 Lab 4 Lab 30 Lab 35 Lab 39 Lab 40 Lab 45 Lab 52 DDT (definizione LMR) 0,002 0, ,0-1,2-1,7-0,1 0,9-0,6 n.a. p,p'-ddt 0,002 0,0200 n.d. -1,0-1,6 1,6 1,2-0,2 7,7 o,p'-ddt 0,002 0, ,4-1,1-1,3 n.a. -0,5-0,7 9,1 Endosulfan sulfate 0,002 0,0080 n.a. -1,0 n.d. -0,1 n.d. -0,8 n.a. Nitrofen 0,005 0,0100 n.a. n.a. n.a. -0,3 n.a. n.a. n.a. Chlorpyrifos-ethyl 0,005 0,0150 n.a. -0,3 0,1 0,4 n.a. -0,6 0,2 Parathion-methyl 0,005 0,0500 n.a. n.a. -1,4 0,3 n.a. n.a. -1,3 Cyfluthrin 0,010 0,0700 n.a. 0,8-1,2 0,6 n.d. n.a. 36,9 Cypermethrin 0,010 0,0600-2,0 0,4-2,3 0,3 n.d. n.a. 17,3 Deltamethrin 0,010 0,0400 n.d. 9,0-1,5-0,3 n.d. n.a. 8,4 Fenvalerate 0,005 0,0300 n.d. 0,8-1,0-0,4 n.d. n.a. 19,2 % analiti target fortificati determinati dal Lab (90%) Falsi Positivi (n=0) % analiti analizzati scopo del PT (n=57) (scopo > 90% target list) n.d. - Falsi Negativi MRRL Mediana (mg/kg prodotto) z-score (Fit For Purpose, 25%) Analiti nello scopo dell'eupt da ricercare obbligatoriamente Performance Annex EUPT AO-03 (2008) EUPT AO-09 (2014) EUPT AO-12 (2017) Analiti nella target list (Annex 1) 51 (+6 RD) Analiti addizionati (+1) 13 Lab partecipanti Lab senza falsi positivi (Categoria A) 5 (71%) 10 (100%) 9 (82%) Lab analizzano > 90% analiti fortificati (Categoria A) Lab che analizzano > 90% analiti target list (Categoria A) Lab Categoria A (nuova definizione) Lab con z-score solo accettabili Lab con z-score non accettabili Lab con falsi negativi Lab con falsi positivi Classe analiti Annex 1 OC OP PYR Categoria A Classe analiti Annex 1 OP PYR Categoria OC A Performance Principi attivi determinati EUPT AO-09: 60 analiti Lab 14 Lab 50 Lab 55 Lab 60 Lab 72 Lab 74 Lab 77 Lab 106 Lab 108 Lab 111 Dieldrin 0,005 0,0268 4,5-0,1-3,7 (n.d.) -0,7-1,6-1,2 0,3-3,7 (n.d.) 1,4 0,3 Endosulfan sulfate 0,005 0,0289 2,2 0,5-3,0 0,6-2,2-1,0 0,3-2,8 n.a. n.a. Endrin 0,002 0,0141 4,2 1,0 n.a. -0,9-1,2-1,2 0,7-1,8 0,6-0,3 HCH-gamma (Lindane) 0,005 0,0256 5* 0,4 5* -1,5-0,4-1,0 0,4-0,1 1,4-0,4 trans-heptachlorepoxide 0,005 0,0438 4,4-0,7 0,8-0,7-0,5-1,3 0,4-2,1 1,2 0,3 Diazinon 0,005 0,0588 1,9 0,5-0,5 1,6-0,5-1,7 0,2 n.a. 0,6 0,5 Parathion(-ethyl) 0,010 0,0862 3,7 1,1-0,3 1,3 1,2-1,3 0,9 n.a. 0,4 0,2 Phoxim 0,020 0,1220 n.a 0,7-1,2-1,6 n.a. -0,4 n.a. n.a. n.a. n.a. Deltamethrin 0,010 0,0562 5* -0,8-3,0-0,9-3,3 (n.d.) -1,1 1,1 n.a. 0,8-1,2 Permethrin (sum of isomers) 0,010 0,2512 2,9-1,0-2,5-1,4 0,6-0,8 1,0 n.a. 1,6-0,1 % analiti target fortificati determinati dal Lab (90%) Falsi Positivi (n=0) % analiti analizzati scopo dell'annex 1 del PT (n=60) (scopo > 90% target list) n.d. - Falsi Negativi Codice Laboratorio partecipante Codice Laboratorio partecipante Principi attivi determinati MRRL Robust Mean (1) (mg/kg prodotto) z-score (Fit For Purpose, 25%) Annex 1 : Analiti nello scopo dell'eupt da ricercare obbligatoriamente EUPT AO-12: 59 analiti MRRL Robust Mean (1) (mg/kg prodotto) Lab 10 Lab 23 Lab 38 Lab 47 Lab 51 Lab 57 Lab 62 Lab 73 Lab 82 Lab 88 Lab 111 z-score (Fit For Purpose, 25%) Annex 1 : Analiti nello scopo dell'eupt da ricercare obbligatoriamente trans-chlordane 0,010 0,0260-1,4 0,3 1,3 1,6-1,8-2,5-1,1-0,7 0,6-2,2-1,5 p,p'-ddt 0,010 0,0466-1,3 0,1 0,6 n.d. (-3,1) n.d. (-3,1) -2,7-0,8 0,0-1,3-1,6-1,3 Endosulfan sulfate 0,010 0,0460-0,1 n.d. (-3,1) 0,1 0,4 n.a. 5* 0,1 n.a. 0,9-2,2 1,6 cis-heptachlorepoxide 0,010 0,0874-1,0 0,9 0,8 0,6-2,7-1,8-0,2-0,2 0,8-2,1-1,3 trans-heptachlorepoxide 0,010 0,0512-0,2 0,4 1,2-0,1-2,6-2,0-0,3-0,1 n.d. (-3,2) n.d. (-3,2) -1,3 Chlorfenvinphos 0,010 0,1127-0,3 0,0 0,2 0,2 n.a. -1,3 0,5-0,3-2,1 n.a. -1,3 Diazinon 0,010 0,0590-0,1 0,9 1,2 0,6 n.a. -1,2 0,7-0,5-2,2 n.a. -0,7 Phosmet 0,010 0,0795 n.d. (-3,5) 1,0 1,3 0,7 n.a. 1,5 0,7 n.a. -1,1 n.a. -1,5 Phoxim 0,010 0,0614-0,9 n.a. n.a. 0,2 n.a. -0,7 0,4 n.a. n.a. n.a. n.d. (-3,3) Pirimiphos-Methyl 0,010 0,1217-0,7 0,1-0,6-0,6 n.a. -1,2 0,8-0,3-2,4 n.a. -0,8 Bifenthrin 0,010 0,1673-2,4-0,3 0,6 0,8 n.a. -2,5-0,8 0,0-0,1 n.a. n.d. (-3,8) Deltamethrin 0,010 0,0642-1,8 0,0 1,2 1,2 n.a. -1,3-0,8 3,7-0,4 n.a. -0,9 Resmethrin 0,010 0,2482 n.a. n.a. 1,9 n.d. (-3,8) n.a. n.a. -0,9-0,6 n.d. (-3,8) n.a. n.a. % analiti target fortificati determinati (90%) % analiti target list Annex 1 analizzati (90%) Falsi Positivi (n=0) AZ 2 "Average of the Squared z-scores" n.a. = non analizzati (escluso Spinosad) B B 1,09 B B 5,00 0,47 B B B B

31 Performance - analiti comuni EUPT AO uovo ( ) Classe analiti Annex OC PYR EUPT AO-09 (MRRL: 0,002-0,020 mg/kg) EUPT AO-12 (MRRL: 0,010 mg/kg) Classe analiti Principi attivi determinati Codice Laboratorio partecipante Principi attivi determinati MRRL Mediana (mg/kg prodotto) Lab 4 Lab 30 Lab 35 Lab 39 Lab 40 Lab 45 Lab 52 z-score (Fit For Purpose, 25%) Analiti nello scopo dell'eupt da ricercare obbligatoriamente p,p'-ddt 0,002 0,0200 n.d. -1,0-1,6 1,6 1,2-0,2 7,7 Endosulfan sulfate 0,002 0,0080 n.a. -1,0 n.d. -0,1 n.d. -0,8 n.a. Deltamethrin 0,010 0,0400 n.d. 9,0-1,5-0,3 n.d. n.a. 8,4 Classe analiti Annex 1 OC OP PYR Annex 2 Varie Codice Laboratorio partecipante MRRL Robust Mean (1) (mg/kg prodotto) Codice Laboratorio partecipante Principi attivi determinati MRRL Robust Mean (1) (mg/kg prodotto) EUPT AO-03 (MRRL: 0,002-0,020 mg/kg) Lab 14 Lab 50 Lab 55 Lab 60 Lab 72 Lab 74 Lab 77 Lab 106 Lab 108 Lab 111 z-score (Fit For Purpose, 25%) Annex 1 : Analiti nello scopo dell'eupt da ricercare obbligatoriamente Endosulfan sulfate 0,005 0,0289 2,2 0,5-3,0 0,6-2,2-1,0 0,3-2,8 n.a. n.a. trans-heptachlorepoxide 0,005 0,0438 4,4-0,7 0,8-0,7-0,5-1,3 0,4-2,1 1,2 0,3 MRL Diazinon 0,005 0,0588 1,9 0,5-0,5 1,6-0,5-1,7 0,2 n.a. 0,6 0,5 Deltamethrin 0,010 0,0562 5* -0,8-3,0-0,9-3,3 (n.d.) -1,1 1,1 n.a. 0,8-1,2 : Analiti nello scopo dell'eupt da ricercare su base volontaria BAC-C12 0,010 0,2111 n.a. 1,0 n.a. n.a. n.a. -0,7 n.a. n.a. n.a. n.a. BAC-C14 0,010 0,0611 n.a. 0,8 n.a. n.a. n.a. -1,2 n.a. n.a. n.a. n.a. Lab 10 Lab 23 Lab 38 Lab 47 Lab 51 Lab 57 Lab 62 Lab 73 Lab 82 Lab 88 Lab 111 z-score (Fit For Purpose, 25%) Miglioramento: Deltamethrin Endosulfan sulfate (MRRL e spiking aumentati) Aumento scopo: BAC-C12 BAC-C 14 p,p -DDT (MRRL e spiking aumentati) Annex 1 OC OP PYR Varie Annex 1 : Analiti nello scopo dell'eupt da ricercare obbligatoriamente p,p'-ddt 0,010 0,0466 0,05-1,3 0,1 0,6 n.d. (-3,1) n.d. (-3,1) -2,7-0,8 0,0-1,3-1,6-1,3 Endosulfan sulfate 0,010 0,0460 0,05* -0,1 n.d. (-3,1) 0,1 0,4 n.a. 5* 0,1 n.a. 0,9-2,2 1,6 trans-heptachlorepoxide 0,010 0,0512 0,02-0,2 0,4 1,2-0,1-2,6-2,0-0,3-0,1 n.d. (-3,2) n.d. (-3,2) -1,3 Diazinon 0,010 0,0590 0,02* -0,1 0,9 1,2 0,6 n.a. -1,2 0,7-0,5-2,2 n.a. -0,7 Deltamethrin 0,010 0,0642 0,02* -1,8 0,0 1,2 1,2 n.a. -1,3-0,8 3,7-0,4 n.a. -0,9 : Analiti nello scopo dell'eupt da ricercare su base volontaria BAC-C 12 0,010 0,2030 n.a. n..a 0,6 0,1 n..a -0,8 0,0 n..a n..a n..a n.a. 0,1 BAC-C 14 0,010 0,0709 n.a. n.a. 0,9 0,0 n.a. -1,0 0,4 n.a. n.a. n.a. n.a. Stabili: (MRRL aumentati) trans-hepo Diazinon 31

32 Prestazione dei Lab IT nell analisi della matrice «uova» ( ) Prestazioni Cambiata la categorizzazione Lab: pochi Lab in Cat. A z-scores: non c è un trend in miglioramento (variabilità di prestazioni) 2 Lab con scopo ristretto (solo OC) n. falsi negativi aumentato: (da 3 a 7 Lab) n. falsi positivi: non c è un trend in miglioramento (2 Lab) «Scopo» dei laboratori partecipanti al PT Aumentati i Lab IT con scopo ampio (> 90% target list Annex 1) Diminuiti i Lab con alta percentuale di analiti analizzati rispetto a quelli fortificati (Phoxim, Phosmet, Resmethrin) 32

33 Partecipazione dei Lab IT al proficiency test JRC-PT (Fipronil in uova) Allerta europea (20 Luglio 2017 RASFF: 0,72 mg/kg Fipronil in uova) Richiesta del Belgio: Proficiency Test (PT) su Fipronil in uova Scopo PT: Valutare le capacità analitiche dei laboratori europei nell identificazione del Fipronil in campioni di uova ad una concentrazione ca. MRL (incertezza applicata: valutazione di campione regolamentare). Organizzatori: Joint Research Centre (JRC) European Commission s science and knowledge service Annuncio PT: fine Agosto 2017 (22/8/2017: JRC website) Deadline per registrazione: 15/09/2017 Partecipazione Lab EU gratuita Invio campioni: 25-27/09/2017 Deadline per risultati da inviare: 12/10/2017 Report finale: fine Ottobre

34 Disegno del JRC-PT (Fipronil in uova) Materiale: uova liquide da mercato locale 2 campioni ca. 40 g (Sample A e B) non è stato fornito alcun campione dichiarato bianco da usare per lo standard in matrice o prove recupero. Risultati (richiesta la correzione per il recupero) Valore assegnato: determinazione gravimetrica, indipendente dai risultati dei partecipanti. Risultati valutati come z-scores (in accordo con le procedure ISO/IEC 17043:2010) Test di omogeneità e stabilità (IUPAC/ISO/AOAC International Protocol for Proficiency Testing ISO 13528:2005) EUPT AO-12 (2017): 11 Lab IT 10 LU-AO (IZS+APPA) 1 IZS non ha partecipato (matrice non nello scopo Lab) JRC-PT : 11 Lab IT 9 LU-AO (IZS+APPA) 1 LU-AO-olio/LU-FV (ARPA) 3 IZS non hanno partecipato (matrice nello scopo Lab) 1 IZS ha partecipato con 2 diverse tecniche analitiche (12 codici) Laboratori Italiani Lab EUPT AO-12 (2017-uova) JRC-PT (Fipronil-uova) Istituto Superiore di Sanità LNR-AO X X APPA Bolzano LU X X ARPA Lazio (LT) LU no LU AO X (non nello scopo) IZS Abruzzo e Molise LU X X IZS Lazio e Toscana (Roma) LU X X IZS Lombardia ed Emilia Romagna LU X X IZS del Mezzogiorno LU X IZS Piemonte - Liguria - Valle d'aosta (GE) LU non nello scopo X IZS Piemonte - Liguria - Valle d'aosta (CN) LU non nello scopo X IZS Puglia e Basilicata LU X X IZS Sardegna LU X IZS Sicilia LU X IZS Umbria e Marche LU X X IZS delle Venezie LU X X 34

35 Risultati del PT: JRC-PT (Fipronil in uova) Partecipanti: laboratori EU 85 (22 MS; Norvegia, Serbia, Albania) Sample A: non regolamentare Sample B: regolamentare (valore + incertezza < MRL). Campione bianco: la quantità in tracce di Fipronil Sulfone usata per la determinazione finale del Sample A 94% dei partecipanti hanno dimostrato ottima capacità analitica nell applicazione del MRL (0.005 mg/kg: Fipronil + Fipronil Sulfone espresso in Fipronil) fissato dal Reg. (EC) n. 396/2005 Nessun contributo dipendente da tipo di metodo, standard interno o dalla tecnica analitica usata 79/85 Lab (93%) hanno correttamente individuato uno dei 2 campioni test come non regolamentare ( non compliant ). 1 Lab analizza solo Fipronil (Lab IT: 78) 6/85 Lab underperformance ( 2 Lab IT: 18 e 48) Deviazione Standard robusta del PT: 16-18% JRC-PT : Codice Laboratorio partecipante (2017-Determination of the Fipronil content in eggs) Lab 18 Lab 23 Lab 40 Lab 45 Lab 48 Lab 53 Lab 63 Lab 68 Lab 78 Lab 80 Lab 83 Lab 101 Principi attivi determinati Assigned value (gravimetric) (mg/kg) MRL z-score (Fit For Purpose, 25%) campione A - risultati (mg/kg) campione B Sample A: spiked Fipronil (F) 10,39 0,2 0,2-0,5 1,2 3,1-1,5 0,3 0,9-0,2-1,3-0,5 0,8 Fipronil Sulfone (FS) 6,73 0,005* 9,1 0-0,6 0,9 1,9 0,2-0,2 0,6 n.d. -0,3-0,4-0,3 SUM (F+ FS) 16,88 3,6 0-0,5 1 2,7-0,9 0,1 0,8 n.d. -0,9-0,4 0,4 Sample B: unspiked Fipronil (F) (< 2,5 mg/kg) (< 2 mg/kg) (< 2,5 mg/kg) (0,27mg/kg) (< 2 mg/kg) (< 2 mg/kg) (< 2 mg/kg) (< 2,5 mg/kg) Fipronil Sulfone (FS) 1,11 0,005* (3,6 mg/kg) (< 2 mg/kg) (< 2,5 mg/kg) (1,4 mg/kg) (1,8 mg/kg) (< 2 mg/kg) (< 2 mg/kg) (1,5 mg/kg) (< 2 mg/kg) (< 2,5 mg/kg) (1,3 mg/kg) SUM (F+ FS) (3,47 mg/kg) (< 5 mg/kg) (< 5 mg/kg) (1,4 mg/kg) (2,07 mg/kg) (< 2 mg/kg) (< 4 mg/kg) (1,4 mg/kg) (< 4 mg/kg) (< 5 mg/kg) (1,3 mg/kg) 35

36 Risultati dei Lab IT: JRC-PT (Fipronil in uova) JRC-PT : Codice Laboratorio partecipante (2017-Determination of the Fipronil content in eggs) Lab 18 Lab 23 Lab 40 Lab 45 Lab 48 Lab 53 Lab 63 Lab 68 Lab 78 Lab 80 Lab 83 Lab 101 Principi attivi determinati Assigned value (gravimetric) (mg/kg) MRL z-score (Fit For Purpose, 25%) campione A - risultati (mg/kg) campione B Sample A: spiked Fipronil (F) 10,39 0,2 0,2-0,5 1,2 3,1-1,5 0,3 0,9-0,2-1,3-0,5 0,8 Fipronil Sulfone (FS) 6,73 0,005* 9,1 0-0,6 0,9 1,9 0,2-0,2 0,6 n.d. -0,3-0,4-0,3 SUM (F+ FS) 16,88 3,6 0-0,5 1 2,7-0,9 0,1 0,8 n.d. -0,9-0,4 0,4 Sample B: unspiked Fipronil (F) (< 2,5 mg/kg) (< 2 mg/kg) (< 2,5 mg/kg) (0,27mg/kg) (< 2 mg/kg) (< 2 mg/kg) (< 2 mg/kg) (< 2,5 mg/kg) Fipronil Sulfone (FS) 1,11 0,005* (3,6 mg/kg) (< 2 mg/kg) (< 2,5 mg/kg) (1,4 mg/kg) (1,8 mg/kg) (< 2 mg/kg) (< 2 mg/kg) (1,5 mg/kg) (< 2 mg/kg) (< 2,5 mg/kg) (1,3 mg/kg) SUM (F+ FS) (3,47 mg/kg) (< 5 mg/kg) (< 5 mg/kg) (1,4 mg/kg) (2,07 mg/kg) (< 2 mg/kg) (< 4 mg/kg) (1,4 mg/kg) (< 4 mg/kg) (< 5 mg/kg) (1,3 mg/kg) EUPT AO-12: Codice Laboratorio partecipante (2017-whole liquid egg) Performance dei laboratori italiani n z-score Accettabili ( z 2) n z-score Questionabili (2< z < 3) n z-score Non Accettabili ( z 3) Lab 57 Lab 62 Lab 88 NO Lab 111 Lab 38 Lab 47 NO NO Lab 10 Lab 23 NO Risultati da Annex 1 + z-score (Fit For Purpose, 25%) (n.d.) 2 (n.d.) 0 2 (n.d.) 1 (n.d.) 1 (n.d.) Categoria A n.d. - Falsi Negativi (escluso Spinosad) n.a. = non analizzati (escluso Spinosad) % analiti target fortificati determinati (90%) % analiti target list Annex 1 analizzati (90%) Falsi Positivi (n=0) AZ 2 "Average of the Squared z-scores" ,00 0,47 B B 1,09 B B B CONSIDERAZIONI FINALI: 9 Lab IT hanno ottime performance 1 Lab non analizza la definizione di residuo «Fipronil» 2 Lab z-scores «Non accettabili» - Lab con prestazioni da migliorare anche in EUPT AO-12 36

37 Grazie per l attenzione! Domande? Patrizia Pelosi patrizia.pelosi@iss.it 37