UK Standards for Microbiology Investigations
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- Serafina Capasso
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1 UK Standards for Microbiology Investigations X and V factor test Issued by the Standards Unit, National Infection Service, PHE Bacteriology Test Procedures TP 38 Issue no: 4 Issue date: Page: 1 of 14 Crown copyright 2019
2 Ringraziamenti Si ringraziano per contributi forniti i numerosi operatori dei laboratori clinici, gli specialisti e i laboratori di riferimento che hanno fornito informazioni e commenti durante lo sviluppo di questo documento. Si ringraziano i Revisori Medici per le modifiche apportate ai contenuti clinici. Per ulteriori informazioni contattare Standards Unit National Infection Service Public Health England 61 Colindale Avenue London NW9 5EQ standards@phe.gov.uk Le Procedure Standard del Regno Unito per le Ricerche Microbiologiche (SMI - Standards for Microbiology Investigations) sono sviluppate sotto l'egida della Public Health England (PHE) in collaborazione con il Servizio Sanitario Nazionale (NHS - National Health Service), la Sanità Pubblica del Galles e con le organizzazioni professionali i cui loghi sono di seguito elencati sul sito web Le SMI sono sviluppate, revisionate e controllate da diversi gruppi di lavoro che sono supervisionati da un comitato direttivo (consultare: for-microbiology-investigations-steeringcommittee). Website: Numero di accesso alla pubblicazione PHE: Procedure Standard del Regno Unito per le Ricerche Microbiologiche sono sviluppate con la collaborazione di: I loghi sono aggiornati al momento della pubblicazione. Batteriologia Test ProcedureTest TP 38 Emissione no: 4 IData emissione : Pagina: 2 di 15
3 Contenuti Ringraziamenti... Errore. Il segnalibro non è definito. Contenuti... Errore. Il segnalibro non è definito. Tabella delle modifiche... Errore. Il segnalibro non è definito. Scopo del documento... 7 Introduzione... 7 Informazione tecnica/limitazioni Considerazioni sulla sicurezza Reagenti e strumentazione Microrganismi controllo Procedura e resultati Appendice Bibliografia Batteriologia Test ProcedureTest TP 38 Emissione no: 4 IData emissione : Pagina: 3 di 15
4 Amendment table Ciascun metodo SMI possiede una registrazione separata delle correzioni. Quelle attuali sono specificate in questa pagina. Le precedenti modifiche sono disponibili presso la I documenti nuovi o revisionati devono essere controllati in ciascun laboratorio in accordo con il sistema locale di gestione della qualità. Modifica numero/data 9/ Emissione eliminata numero 3 Emissione inserita numero 4 Anticipated next review date* Sezione(i) interessate Intero documento. Microrganismi controllo di qualità. Modifiche Documento aggiornato Bibliografia aggiornata con valutazioni. Diagramma di flusso aggiornato per includere alternative commerciali. Ceppo NCTC batterico alternativo (NCTC 12975) testato e validato per questo test e test di suscettibilità EUCAST. *Le revisioni possono essere protratte fino a cinque anni in funzione delle risorse disponibili Batteriologia Test ProcedureTest TP 38 Emissione no: 4 IData emissione : Pagina: 4 di 15
5 UK SMI : scopo e obiettivo Utilizzatori delle SMI del RU Nel Regno Unito le SMI sono principalmente destinate come risorsa generale ai professionisti che operano nel campo della medicina di laboratorio e delle malattie infettive. Le SMI forniscono ai clinici informazioni in merito allo standard dei servizi di laboratorio riferibili alle ricerche per la diagnosi delle infezioni nei loro pazienti e le documentazioni forniscono indicazioni che facilitano la prenotazione elettronica di test appropriati. I documenti forniscono gli standard per le ricerche microbiologiche anche ai responsabili della sanità pubblica che devono considerarle come parte delle procedure da adottare per la salute sia clinica che pubblica per la propria popolazione. Informazioni di base per le SMI Le SMI comprendono algoritmi e procedure raccomandate che riguardano tutte le componenti del processo diagnostico dalla fase pre-analitica (sindrome clinica) alle diverse fasi analitiche (prove di laboratorio) e post-analitiche (interpretazione e comunicazione dei risultati).gli algoritmi delle sindromi sono corredati da informazioni più dettagliate contenenti consigli sulle indagini per specifiche malattie e infezioni. Note orientative riguardano il contesto clinico, la diagnosi differenziale e indagini appropriate per particolari condizioni cliniche. Le note orientative descrivono metodologie di laboratorio essenziali che sono alla base della qualità, ad esempio la validazione della prova. La standardizzazione del processo diagnostico conseguente all'adozione delle SMI consente di garantire in tutto il Regno Unito strategie d indagine equivalenti nei diversi laboratori che è una condizione essenziale per interventi di sorveglianza della salute pubblica, e per le attività di ricerca e di sviluppo. Coinvolgimento delle organizzazioni professionali Lo sviluppo delle SMI è condotto in condizione paritaria da PHE, NHS,Royal College of Pathologists e organizzazioni professionali. L'elenco delle organizzazioni partecipanti può essere trovato su sito L'inclusione del logo di un organizzazione in una SMI implica il sostegno degli obiettivi e del processo di preparazione del documento. I rappresentanti delle organizzazioni professionali fanno parte del Comitato Direttivo e dei Gruppi di Lavoro che sviluppano le SMI. Le opinioni dei partecipanti non sono necessariamente quelle espresse da tutta l'organizzazione che essi rappresentano. I rappresentanti agiscono da tramite con funzione di collegamento bi-direzionale per informazione e dialogo. Le attività di rappresentanza sono ricercate tramite un processo di consultazione. Le SMI sono sviluppate, revisionate e aggiornate tramite un ampio processo di consultazione Assicurazione di qualità La NHS Evidence ha accreditato la procedura usata dai SMI Working Groups per produrre le SMI. L accreditamento è applicabile a tutte le linee guida emesse dall Ottobre La procedura per losviluppo delle SMI è certificata dalla ISO 9001:2008. Le SMI rappresentano una procedura standard di buona qualità pratica alla quale si devono attenere per la propria attività tutti i laboratori di microbiologia clinica e di sanità pubblica del Regno Unito. Le SMI sono accreditate dal NICE e rappresentano gli standard minimi di attività, e neppure il più alto livello Microbiology is used as a generic term to include the two GMC-recognised specialties of Medical Microbiology (which includes Bacteriology, Mycology and Parasitology) and Medical Virology. Batteriologia Test ProcedureTest TP 38 Emissione no: 4 IData emissione : Pagina: 5 di 15
6 di complesse indagini di laboratorio. Utilizzando le SMI, i laboratori dovranno tenere conto delle esigenze locali e intraprendere ricerche addizionali qualora opportune. Le SMI aiutano i laboratori a soddisfare i requisiti dell accreditamento con la promozione di procedure d elevata qualità che possono essere verificate. Le SMI forniscono inoltre un punto di riferimento per lo sviluppo del metodo. Le prestazioni della SMI dipendono da personale ben addestrato e dalla qualità dei reagenti e delle attrezzature utilizzate. I laboratori dovrebbero assicurare che tutti i reagenti di tipo commerciale e quelli messi a punto in laboratorio siano stati validati e che i risultati siano idonei allo scopo. I laboratori devono partecipare a programmi di valutazione di qualità esterni ed eseguire le relative procedure del controllo di qualità interno.. Coinvolgimento del paziente e della comunità Nello sviluppo delle SMI i rispettivi Gruppi di Lavoro sono impegnati per favorire il coinvolgimento dei pazienti e dell opinione pubblica. Grazie al coinvolgendo pubblico, di operatori sanitari, ricercatori e organizzazioni di volontariato, la SMI risultante sarà strutturalmente valida e atta a soddisfare le esigenze dell'utente. L opportunità di partecipazione per contribuire alla consultazione è estesa al pubblico con l accesso libero al nostro sito web. Informazione della gestione dei dati sensibili La PHE è un organizzazione che condivide le direttive Caldicott. Ciò significa prendere ogni possibile precauzione per prevenire la diffusione non autorizzata di informazioni sui pazienti e di garantire che le informazioni relative agli stessi siano mantenute in condizioni di sicurezza. Lo sviluppo di metodi SMI è assoggetto agli obiettivi PHE di Uguaglianza I Gruppi di Lavoro SMI del RU sono impegnati a raggiungere gli obiettivi di parità di consultazione efficace con gli appartenenti al pubblico, i partner, le parti interessate ed i gruppi specialistici coinvolti. Dichiarazione legale Mentre ogni cura è stata intrapresa per la preparazione delle SMI, la PHE e ogni altra organizzazione di sostegno, deve, per quanto possibile in base a qualunque legge vigente, escludere la responsabilità per tutte le perdite, costi, reclami, danni o spese derivanti da o connessi all'uso di una SMI o con qualsiasi informazione ivi contenuta. Se si apportano modifiche ad una SMI del RU da un utente finale per uso locale, deve essere chiaro dove nel documento queste sono state apportate e da chi e riconosciuto che la PHE e le organizzazioni partner non devono essere coinvolte da responsabilità per tali modifiche. Per maggiore chiarezza, dal momento che le SMI del Regno Unito sono state sviluppate per l'applicazione nel Regno Unito, qualsiasi applicazione al di fuori del Regno Unito è a rischio dell'utente. Le conoscenze di base e la tassonomia microbica per la SMI del RU sono le più complete possibili, al momento della pubblicazione. Eventuali omissioni e nuove informazioni saranno considerate nel corso della revisione successiva. Queste procedure standard (SMI) possono essere sostituite solo da revisioni dello standard, azione legislativa, o in seguito ad indicazioni da parte dell ente accreditato NICE. Le SMI sono assoggettate a diritti d autore che dovrebbero essere riconosciti ove appropriato Citazione suggerita per questo documento Public Health England. (2019). X and V Factor Test. UK Standards for Microbiology Investigations. TP 38 Emissione 4. Batteriologia Test ProcedureTest TP 38 Emissione no: 4 IData emissione : Pagina: 6 di 15
7 Scope of document La SMI del Regno Unito descrive la differenziazione delle specie Haemophilus mediante il test X e V. Poiché esistono somiglianze nei requisiti dei fattori di crescita delle specie Haemophilus, in situazioni critiche, non è consigliabile che questa procedura sia l'unico criterio per l'identificazione delle specie. Questa SMI deve essere usata congiuntamente con le altre SMI. Introduczione Le specie del genere Haemophilus richiedono uno o entrambi i fattori di crescita X e V che possono essere utilizzati per differenziare le specie. Entrambi questi fattori sono presenti nel sangue. Il Fattore X comprende protoporfirina IX, nota come emina, o altre porfirine contenenti ferro. Queste sono necessarie per la crescita; infatti, i ceppi X-dipendenti non sono in grado di convertire l'acido d-aminolevulinico a protoporfirina Questi sono necessari per la crescita perché i ceppi X-dipendenti non sono in grado di convertire l'acido d-aminolevulinico in protoporfirina. Sono stabili al calore. Fattore V comprende nicotinamide adenin dinucleotide (NAD) o nicotinamide adenina. dinucleotide fosfato (NADP) 1. V factor comprises nicotinamide adenine dinucleotide (NAD) or nicotinamide adenine dinucleotide phosphate (NADP). Questi sono termolabilit 1. I fattori sono incorporati in dischi di carta filtro e posti su terreno privo di sangue seminato in precedenza con il microrganismo da saggiare. Dopo incubazione, registrare la presenza o assenza di crescita intorno ai dischi. La presenza di crescita intorno al disco ma non altrove indica la richiesta di quel particolare fattore. Informazioni tecniche / limitazioni Risultati erronei Il fattore V diffonde più facilmente di X Factor. Se i dischi sono posti troppo vicini tra loro, il fattore V può diffondere verso il disco con fattore X, consentendo una crescita apparentemente dovuta a quest ultimo, ma in realtà dovuta al fattore V 1. Controllo di Qualità dei kit di identificazioni commerciali I produttori commerciali di dischi con fattore X e V non specificano la concentrazione dei fattori. L'accettazione di una serie di dischi dovrebbe essere basata su un test delle prestazioni "in uso" con una gamma di specie Haemophilus piuttosto che un'analisi del contenuto. Ogni lotto o spedizione di dischi con fattore XV deve essere controllato con un controllo positivo e il fattore X e i dischi con fattore V vengono testati con entrambi i controlli positivi e negativi noti prima dell'uso di routine in laboratorio per garantire il controllo di qualità. Terreni Agar media L'uso di agarcioccolato è preferibile per i test sui fattori X e V piuttosto che su agar sangue o terreno contenente sangue a causa del rischio di trascinamento del fattore X. Questo test potrebbe anche essere eseguito utilizzando un agar nutriente di base, ma per il quale i dischi X e V sono stati validati nel caso in cui avesse tracce di fattori di traccia in grado di influenzare i risultati, in genere identificando H. influenzae come H. parainfluenzae 2. Batteriologia Test ProcedureTest TP 38 Emissione no: 4 IData emissione : Pagina: 7 di 15
8 Le istruzioni dei produttori dovrebbero essere seguite quando si esegue questo test. Risultati più accurati si ottengono con il test di sintesi della porfirina (TP 29 - test Porphyrin). Il tampone utilizzato per preparare la piastra per i fattori X e V può anche essere utilizzato per preparare quelle con antibiotici purché i fattori X e V inseriti prima. incubazione I test dei fattori X e V a volte possono dare risultati falsi con V dipendente se incubati in CO 2 2. Problemi con il gruppo di organismi HACEK (a parte le specie Haemophilus) Le Eikenella corrodens sono dipendenti dal fattore X in quanto presentano una crescita attorno al disco X quando vengono testati, il che fornisce un utile test diagnostico. Gli altri microrganismi possono essere X e V-dipendenti o possono richiedere solo il fattore X o V 1. Batteriologia Test ProcedureTest TP 38 Emissione no: 4 IData emissione : Pagina: 8 di 15
9 1 Considerazioni sulla sicurezza 3-20 Haemophilus influenzae è un microrganismo appartenente al Gruppo di Rischio 2, e, in alcuni casi, la tipologia del lavoro può richiedere condizioni del Livello di Contenimento 3. Tutti i laboratori devono trattare i campioni come potenzialmente ad alto rischio. H. influenzae può causare gravi malattie invasive, specialmente nei bambini piccoli. La malattia invasiva è solitamente causata da ceppi capsulati del microrganismo. Sono state segnalate infezioni acquisite in laboratorio 21. Il microrganismo infetta principalmente per via respiratoria (inalazione), autoinoculazione o ingestione del personale di laboratorio 22. Le procedure di laboratorio che danno producono aerosol infettivi devono essereeseguite in cabina microbiologica di sicurezza. La protezione degli occhi deve essere utilizzata laddove esista un rischio noto o potenziale di esposizione agli spruzzi. Fare riferimento alle linee guida attuali sulla manipolazione sicura di tutti i microrganismi e i reagenti documentati in questa SMI del Regno Unito. Le linee guida precedentemente esplicitate devono essere supplementate con la COSHH locale e con la valutazione del rischio. E essenziale la conformità alle normative postali e dei trasporti. 2 Reagents and equipment Colonie batteriche isolate cresciute su terreno solido. Soluzione fisiologica o acqua distillata Tamponi sterili Piastre di agar raccomandata nelle istruzioni dal produttore Dischi o strisce commerciali disponibili impregnate di fattori X, V e XV f Ansa batteriologica con filo metallico diritto/ansa o, in alternative, monouso 3 Quality control organisms Fattore X e V Haemophilus influenzae NCTC or NCTC Solo factor V Haemophilus parainfluenzae NCTC Solo factor X Haemophilus haemoglobinophilus NCTC 8540 Note: Questi ceppi sono stati convalidati da NCTC per dare questo risultato Batteriologia Test ProcedureTest TP 38 Emissione no: 4 IData emissione : Pagina: 9 di 15
10 4 Procedure and results 4.1 Metodo 1,2 Test per Fattore X e V preparare una sospensione lieve del microrganismo di prova toccando uno o più colonie morfologicamente simili con un filo diritto; emulsionare poi in fisiologica normale o acqua distillata immergere un tampone nella sospensione e diffondere in modo uniforme su tutta la superficie di una piastra di agar nutriente. attendere pochi minuti per asciugare la superfice dell agar posizione i dischi X, V e XV sulla superficie agar. Assicurarsi che i dischi siano almeno a una distanza di 1,cm l'uno dall'altro in una configurazione a triangolo equilatero (per evitare la diffusione dai dischi che possono generare falsi risultati) o seguire le istruzioni del produttore premere delicatamente i dischi in modo che aderiscano alla superficie incubare per una notte in 3-5% CO 2 a C Con una buona fonte di luce esaminare le piastre per la crescita intorno ai dischi e interpretare secondo la tabella sottostante. H. influenzae H. parainfluenzae H. haemoglobinophilus (Crescita solo attorno al disco XV) (Crescita attorno ai dichi V XV) (Crescita attorno ai dichi X e XV Interpretazione I microrganismi che richiedono solo il fattore X cresceranno solo attorno ai dischi dei fattori X e XV. I microrganismi che richiedono solo il fattore V cresceranno solo attorno ai dischi V e XV. Se sono richiesti entrambi i fattori X e V, il microrganismo crescerà solo attorno al disco del fattore XV. Haemophilus species Growth around discs X V XV H. influenzae H. parainfluenzae Batteriologia Test ProcedureTest TP 38 Emissione no: 4 IData emissione : Pagina: 10 di 15
11 H. haemoglobinophilus H. aegyptius* H. haemolyticus H. pittmaniae H. parahaemolyticus H. paraphrohaemolyticus H. ducreyi H. sputorum * H. l'aegyptius è indistinguibile da H. influenzae biotipo III con i normali test di laboratorio. Adattato da MacFaddin 1 Batteriologia Test ProcedureTest TP 38 Emissione no: 4 IData emissione : Pagina: 11 di 15
12 Appendice: Test per fattore X e V Isolate discrete colony Light suspension of the test organism by emulsifying in normal saline Soak a swab in the suspension Spread evenly across the entire surface of a nutrient agar plate Position X, V, and XV discs on the agar surface Incubate in 3-5% CO 2 at C overnight Examine for areas of growth Note: X and V factor Haemophilus influenzae NCTC or NCTC12975 V factor only Haemophilus parainfluenzae NCTC X factor only Haemophilus haemoglobinophilus NCTC 8540 The flowchart is for guidance only. Batteriologia Test ProcedureTest TP 38 Emissione no: 4 IData emissione : Pagina: 12 di 15
13 References Modified GRADE table used by UK SMIs when assessing references Grading of Recommendations, Assessment, Development, and Evaluation (GRADE) is a systematic approach to assessing references. A modified GRADE method is used in UK SMIs for appraising references for inclusion. Each reference is assessed and allocated a grade for strength of recommendation (A-D) and quality of the underlying evidence (I-VIII). A summary table which defines the grade is listed below and should be used in conjunction with the reference list. Quality/certainty of evidence A Strongly recommended B* Recommended but other alternatives may be acceptable C* Weakly recommended: seek alternatives D Never recommended Types of evidence I Evidence from randomised controlled trials, meta-analysis and systematic reviews II Evidence from non-randomised studies III Evidence from documents describing techniques, methods or protocols IV Non-analytical studies, eg case reports, reviews, case series V Expert opinion and wide acceptance as good practice but with no study evidence VI Required by legislation, code of practice or national standard/ guideline VII Letter /short communication /editorials /conference communication VIII Electronic citation 1. MacFaddin JF. X and V Factors. Biochemical Tests for Identification of Medical Bacteria. 3rd ed. Philadelphia: Lippincott Williams and Wilkins; p B, III 2. Jones AM. Haemophilus influenzae and H. parainfluenzae: the influence of media and CO 2 on differentiation using X, V and XV discs. MedLab Sci 1982;39: B, III 3. Advisory Committee on Dangerous Pathogens. Infections at work: Controlling the risks. Her Majesty's Stationery Office A, VI 4. Advisory Committee on Dangerous Pathogens. Biological agents: Managing the risks in laboratories and healthcare premises. Health and Safety Executive A, VI 5. Advisory Committee on Dangerous Pathogens. Biological Agents: Managing the Risks in Laboratories and Healthcare Premises. Appendix 1.2 Transport of Infectious Substances - Revision. Health and Safety Executive A, VI Batteriologia Test ProcedureTest TP 38 Emissione no: 4 IData emissione : Pagina: 13 di 15
14 6. Advisory Committee on Dangerous Pathogens. The Approved List of Biological Agents. Health and Safety Executive A, VI 7. British Standards Institution (BSI). BS EN Biotechnology - performance criteria for microbiological safety cabinets A, VI 8. British Standards Institution (BSI). BS 5726: Microbiological safety cabinets. Information to be supplied by the purchaser and to the vendor and to the installer, and siting and use of cabinets. Recommendations and guidance A, VI 9. Centers for Disease Control and Prevention. Guidelines for Safe Work Practices in Human and Animal Medical Diagnostic Laboratories. MMWR Surveill Summ 2012;61: B, V 10. Department for Transport. Transport of Infectious Substances, 2011 Revision A, VI 11. Department of Health. Transport of Infectious Substances. Best Practice Guidance for Microbiology Laboratories. Department of Health A, VI 12. European Parliament. UK Standards for Microbiology Investigations (UK SMIs) use the term "CE marked leak proof container" to describe containers bearing the CE marking used for the collection and transport of clinical specimens. The requirements for specimen containers are given in the EU in vitro Diagnostic Medical Devices Directive (98/79/EC Annex 1 B 2.1) which states: "The design must allow easy handling and, where necessary, reduce as far as possible contamination of, and leakage from, the device during use and, in the case of specimen receptacles, the risk of contamination of the specimen. The manufacturing processes must be appropriate for these purposes" A, VI 13. Health and Safety Executive. Five Steps to Risk Assessment: A Step by Step Guide to a Safer and Healthier Workplace. HSE Books, A, VI 14. Health and Safety Executive. A Guide to Risk Assessment Requirements: Common Provisions in Health and Safety Law. HSE Books, A, VI 15. Health and Safety Executive. Safe use of pneumatic air tube transport systems for pathology specimens A, VI 16. Health and Safety Executive. Control of Substances Hazardous to Health Regulations. The Control of Substances Hazardous to Health Regulations 2002 (as amended). Approved Code of Practice and guidance L5 (sixth edition). HSE Books, A, VI 17. Health Services Advisory Committee. Safe Working and the Prevention of Infection in Clinical Laboratories and Similar Facilities. HSE Books A, VI 18. Home Office. Anti-terrorism, Crime and Security Act A, VI 19. Official Journal of the European Communities. Directive 98/79/EC of the European Parliament and of the Council of 27 October 1998 on in vitro diagnostic medical devices A, VI 20. World Health Organization. Guidance on regulations for the Transport of Infectious Substances A, VI 21. Collins CH, Kennedy.D.A. Laboratory acquired infections. In: Woburn MA, editor. Laboratory acquired infection: History, incidence, causes and prevention. 4 ed.; p B, IV 22. Jacobson JT, Orlob RB, Clayton JL. Infections acquired in cinical laboratories in Utah. Journal of Clinical Microbiology 1985;21: C, IV Batteriologia Test ProcedureTest TP 38 Emissione no: 4 IData emissione : Pagina: 14 di 15
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