IDENTIFICAZIONE DI SPECIE YERSINIA DALLE FECI

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1 METODO NAZIONALE STANDARD IDENTIFICAZIONE DI SPECIE YERSINIA DALLE FECI BSOP ID 21 Emesso da Standards Unit, Evaluations and Standards Laboratory Centre for Infections Revisione no: 2 Data di revisione Emesso da: Standard Unit, Evaluations and Standards Laboratory Pagina 1 di 11 Riferimento no: BSOP ID 21i2

2 STATO DEI METODI NAZIONALI STANDARD I Metodi Nazionali Standard, che includono le procedure operative standard (POS) algoritmi e linee guida, promuovono l adozione di elevati livelli di qualità, contribuendo ad assicurare la possibilità di confronto delle informazioni diagnostiche ottenute in laboratori diversi. Ciò consente la standardizzazione della sorveglianza sostenuta dalla ricerca, sviluppo e verifica, promovendo nello stesso tempo la salute pubblica e la fiducia del paziente nelle proprie strutture sanitarie. I metodi sono ben referenziati e rappresentano un buono standard minimo per la microbiologia clinica e per la salute pubblica. Comunque, utilizzando i Metodi Nazionali Standard, i laboratori dovranno tenere in considerazione le esigenze locali e potranno intraprendere ricerche addizionali. I metodi forniscono inoltre un punto di riferimento per un loro sviluppo successivo. I Metodi Nazionali Standard sono stati sviluppati, revisionati ed aggiornati con una procedura aperta di consenso ove le opinioni di tutti i partecipanti sono state tenute in adeguata considerazione ed i documenti elaborati riflettono il consenso della maggior parte degli stessi. I rappresentanti di alcune organizzazioni professionali, incluse quelle il cui logo appare sulla prima pagina, sono membri dei gruppi di lavoro che sviluppano i Metodi Nazionali Standard. L inclusione del logo di una organizzazione nella prima pagina implica sostegno agli obiettivi ed al processo di preparazione dei metodi standard. I componenti di queste organizzazioni scientifiche hanno partecipato allo sviluppo dei Metodi Nazionali Standard ma le loro opinioni personali non rispecchiano necessariamente quelle dell organizzazione di cui sono membri. L elenco attuale delle organizzazioni professionali partecipanti può essere ottenuto tramite all indirizzo standards@hpa.org.uk. Le prestazioni dei metodi standard sono condizionate dalla qualità di reagenti, strumentazione, procedure commerciali o prove messe a punto in loco. I laboratori dovrebbero assicurare che queste siano state validate e dimostrate idonee allo scopo prefissato. Devono essere adottate procedure di controllo di qualità interno ed esterno. Nonostante siano state osservate le più scrupolose attenzioni nella preparazione di questa pubblicazione, la Health Protection Agency o qualsiasi organizzazione di sostegno non può essere ritenuta responsabile dell accuratezza o dell utilizzo o di qualsiasi conseguenza derivante dall uso o da modifiche delle informazioni contenute in questo documento. Queste procedure sono intese solamente come una risorsa generale per i professionisti che esercitano in questo settore, operanti nel Regno Unito, pertanto si dovrà ricorrere ad altri consulenti quando ritenuto necessario. Se si apportano modifiche a questa pubblicazione, si deve porre in evidenza dove sono state apportate modifiche al documento originale. La Health Protection Agency (HPA) dovrà essere informata in ogni circostanza. La HPA è una organizzazione indipendente che ha lo scopo di proteggere la salute della popolazione. Ad essa confluiscono esperienze professionali già appartenenti ad organizzazioni ufficiali. Maggiori informazioni riferibili alla HPA possono essere ottenute al sito La HPA è un organizzazione che mira ad essere completamente in accordo con le direttive Caldicott. Ciò significa prendere ogni possibile precauzione per prevenire la diffusione non autorizzata di informazioni sui pazienti e di garantire che le informazioni relative agli stessi siano mantenute in condizioni di sicurezza 1. Maggiori dettagli possono essere ottenuti dal sito web. Contributi allo sviluppo dei documenti possono essere forniti contattando l indirizzo standards@hpa.org.uk. Per cortesia prendere nota che la bibliografia è attualmente formattata con il software Reference Manager. Se si modifica o si cancella il testo senza avere installato nel computer il Reference Manager; la bibliografia non sarà aggiornata automaticamente. Riferimento suggerito per questo documento: Health Protection Agency (2007). Identification of Yersinia species from faeces. National Standard Method BSOP ID 21 Emissione 2. IDENTIFICAZIONE DI SPECIE YERSINIA NELLE FECI Revisione no: 2 Data di revisione Emesso da: Standard Unit, Evaluations and Standards Laboratory Pagina 2 di 11

3 INDICE STATO DEI METODI NAZIONALI STANDARD... 2 INDICE... 3 PROCEDURA DI MODIFICA SCOPO DEL DOCUMENTO... 5 INTRODUZIONE... 5 INFORMAZIONE TECNICA CONSIDERAZIONI SULLA SICUREZZA MICRORGANISMI BERSAGLIO IDENTIFICAZIONE ASPETTO MICROSCOPICO TERRENI DI ISOLAMENTO PRIMARIO ASPETTO COLONIA PROCEDURE DI PROVA IDENTIFICAZIONE SUCCESSIVA CONSERVAZIONE ED INVIO IDENTIFICAZIONE DI SPECIE YERSINIA - DIAGRAMMA DI FLUSSO REFERTAZIONE..., IDENTIFICAZIONE PRELIMINARE CONFERMA IDENTIFICAZIONE MEDICO MICROBIOLOGO CCDC CENTRO PER INFEZIONI GRUPPO CONTROLLO INFEZIONI RIFERIMENTI LABORATORIO DI RIFERIMENTO RINGRAZIAMENTI E CONTATTI BIBLIOGRAFIA IDENTIFICAZIONE DI SPECIE YERSINIA NELLE FECI Revisione no: 2 Data di revisione Emesso da: Standard Unit, Evaluations and Standards Laboratory Pagina 3 di 11

4 PROCEDURA DI MODIFICA Documento di riferimento controllato Titolo del documento controllato BSOP D 21 Identificazione delle specie Yersinia nelle feci Ciascun Metodo Nazionale Standard possiede una registrazione separata con le modifiche. Le modifiche di questa revisione sono riportate in questa pagina. Le precedenti modifiche sono disponibili presso la standards@hpa.org.uk. Qualora vi sia una revisione di pagine o vengano emesse pagine nuove il proprietario di ciascun documento controllato dovrebbe aggiornare la copia in laboratorio. Modifica Numero/ Data Emissione no. Scartata Inserita Emissione no. Pagina Sessione(i) interessate Modifica 2/ Prima pagina Aggiunto il logo dell Irlanda del Nord 7 Diagramma di flusso Titolo cambiato e diagramma di flusso in formato Visio. Diagramma di flusso aggiornato 9 6 Riferimenti Inserito collegamento ai manuali d uso del laboratorio di riferimento 11 Bibliografia Bibliografia revisionata ed aggiornata Tutte Tutte Inseriti collegamenti PDF per i documenti dei MNS IDENTIFICAZIONE DI SPECIE YERSINIA NELLE FECI Revisione no: 2 Data di revisione Emesso da: Standard Unit, Evaluations and Standards Laboratory Pagina 4 di 11

5 IDENTIFICAZIONE DELLE SPECIE YERSINIA ISOLATE DALLE FECI SCOPO DEL DOCUMENTO Questo Metodo Nazionale Standard (MNS) descrive l identificazione della Yersinia enterocolitica e della Yersinia pseudotuberculosis isolate dalle feci. I microrganismi possono essere isolati da altri campioni quali sangue, linfonodi e ascessi. INTRODUZIONE Tassonomia Il genere Yersinia appartiene alla famiglia delle Enterobatteriaceae e comprende 11 specie. Caratteristiche Le specie Yersinia sono costituite da bastoncini Gram-negativi. Sul terreno CIN (cefsulodina, Irgasan, novobiocina) la Y. enterocolitica forma colonie con aspetto ad occhio di toro. Sullo stesso terreno le colonie di Y. pseudotuberculosis sono più piccole con centro di colore rosso intenso ed un bordo sottile circondato da un alone traslucido. Le specie Yersinia sono anaerobie facoltative, ossidasi-negative e fermentano il glucosio senza o con ridotta produzione di gas. Non sono mobili a 37 C, con l eccezione della Y. pestis, ma lo sono a C. Le caratteristiche fenotipiche sono spesso dipendenti dalla temperatura e di solito sono meglio espresse a C che non a 37 C 2. Principi di identificazione Gli isolati da campioni di feci nelle colture primarie sono identificati dall aspetto delle colonie cresciute sui terreni selettivi e dalle prove biochimiche. Se è richiesta la conferma dell identificazione, gli isolati devono essere inviati al Laboratorio di Riferimento. Eseguire tutte le prove di identificazione preferibilmente da agar non-selettivo. INFORMAZIONE TECNICA N/D IDENTIFICAZIONE DI SPECIE YERSINIA NELLE FECI Revisione no: 2 Data di revisione Emesso da: Standard Unit, Evaluations and Standards Laboratory Pagina 5 di 11

6 1 CONSIDERAZIONI SULLA SICUREZZA 3-13 Microrganismi di Gruppo di Rischio 2. Fare riferimento alle linee guida sulla sicurezza nella manipolazione dei microrganismi del Gruppo di Rischio 2 documentati in questo MNS. Eseguire le procedure di laboratorio che generano aerosol infettivi in cabina di sicurezza microbiologica. Le linee guida precedentemente esplicitate devono essere supplementate con la COSHH locale e con la valutazione del rischio. E essenziale il rispetto delle regolamentazioni di spedizione postale e di trasporto. 2 MICRORGANISMI BERSAGLIO 2 Specie Yersinia isolate dalle feci che possono essere causa di infezione nell uomo Yersinia pseudotuberculosis Yersinia enterocolitica 3 IDENTIFICAZIONE 3.1 ASPETTO MICROSCOPICO Gram stain (consultare BSOPTP 39 - Staining Procedures) Bastoncini Gram-negativi 3.2 TERRENI DI ISOLAMENTO PRIMARIO Agar cefsulodina, Irgasan (triclosan), novobiocina (CIN) incubato in aerobiosi a C per ore. 3.3 ASPETTO COLONIE Sull agar CIN le colonie tipiche di Y. enterocolitica presentano un centro di colore rosso intenso circondato da un alone trasparente che conferisce l aspetto di un occhio di bue. Le colonie di Y. pseudotuberculosis sono più piccole, di colore rosso intenso con bordo sottile circondate da un alone trasparente. 3.4 PROCEDURE DI PROVA Identificazione con confezione commerciale 3.5 IDENTIFICAZIONE SUCCESSIVA N/D 3.6 CONSERVAZIONE ED INVIO Se richiesto, purificare un isolato su becco di clarino di agar nutriente per l invio al Laboratorio di Riferimento IDENTIFICAZIONE DI SPECIE YERSINIA NELLE FECI Revisione no: 2 Data di revisione Emesso da: Standard Unit, Evaluations and Standards Laboratory Pagina 6 di 11

7 4 IDENTIFICAZIONE DI SPECIE YERSINIA DALLE FECI - DIAGRAMMA DI FLUSSO Campioni clinici Piastra isolamento primario Agar CIN Tipica colonia ad occhio di toro Colorazione Gram su coltura pura Bastoncini Gram negativi Altro Scartare Successiva identificazione se clinicamente richiesta. Identificazione con confezione commerciale o altre prove biochimiche o inviare al Laboratorio di Riferimento. Se opportuno, salvare un isolato purificato su agar a becco di clarino Revisione no: 2 Data di revisione Emesso da: Standard Unit, Evaluations and Standards Laboratory Pagina 7 di 11

8 5 REFERTAZIONE 5.1 IDENTIFICAZIONE PRELIMINARE Se riscontrate appropriate caratteristiche della crescita, aspetto delle colonie, Gram delle colture. 5.2 CONFERMA IDENTIFICAZIONE Dopo i risultati ottenuti con confezione commerciale 5.3 MEDICO MICROBIOLOGO Informare il medico microbiologo di tutte le colture positive da siti normalmente sterili e di tutti gli isolati presunti o confermati di specie Yersinia ritenute patogene o potenzialmente patogene. Informare il medico microbiologo di tutti gli isolati presunti o confermati di Y. enterocolitica e Y. pseudotuberculosis secondo i protocolli locali, se nel modulo di richiesta sono segnalate importanti informazioni quali: Enterocolite o adenite mesenterica Setticemia Epifenomeni mediati dal sistema immunologico (eritema nodoso, artrite reumatoide) Persone trasfuse con sangue od emoderivati, affette da sovraccarico di ferro e/o sottoposte a terapia con chelanti per alcune patologie (emoglobinopatie) con emosiderosi da trasfusione o emocromatosi primitiva Casi clinici associati a lavoro agricolo, veterinario o personale di laboratorio Intossicazione alimentare Ricerche in situazioni epidemiche 5.4 CCDC Seguire i protocolli locali per la refertazione al clinico Fare riferimento al Memorandum locale di Informazione. 5.5 CENTRO PER INFEZIONI 14 Fare riferimento alle linee guida attuali del CDSC ed alle indicazioni del COSURV. 5.6 GRUPPO CONTROLLO INFEZIONI Informare il gruppo di controllo delle infezioni di nuovi o presunti isolati di Y. enterocolitica e Y. pseudotuberculosis.. Revisione no: 2 Data di revisione Emesso da: Standard Unit, Evaluations and Standards Laboratory Pagina 8 di 11

9 6 SEGNALAZIONI 6.1 LABORATORIO DI RIFERIMENTO Per informazioni sugli accertamenti disponibili, tempi di risposta, procedure di trasporto ed altre, riguardanti il laboratorio di riferimento, rivolgersi a: Laboratory of Enteric Pathogens Centre for infections Health Protection Agency 61 Colindale Avenue London NW9 5HT Contattare il centralino principale del Centro per le Infezioni: Tel. +44 (0) Revisione no: 2 Data di revisione Emesso da: Standard Unit, Evaluations and Standards Laboratory Pagina 9 di 11

10 7 RINGRAZIAMENTI E CONTATTI Questo Metodo Nazionale Standard è stato sviluppato, revisionato e controllato dallo Standard Methods Working Group for Bacteriology ( bacteriology.asp). Si ringraziano per la collaborazione i numerosi operatori dei laboratori di batteriologia e le organizzazioni specialistiche che hanno fornito informazioni e commenti durante lo sviluppo di questo documento, ed il Redattore Medico per la revisione finale. I Metodi Nazionali Standard sono emessi dalla Standards Unit, Evaluations and Standards Laboratory, Centre for Infections, Health Protection Agency London. Per altre informazioni prendere contatti con: Standards Unit Evaluations and Standards Laboratory Centre for Infections Health Protection Agency Colindale London NW9 5EQ standards@hpa.org.uk Revisione no: 2 Data di revisione Emesso da: Standard Unit, Evaluations and Standards Laboratory Pagina 10 di 11

11 BIBLIOGRAFIA 1. Department of Health NHS Executive: The Caldicott Committee. Report on the review of patientidentifiable information. London. December Bercovier H, Mollaret HH. Genus XIV Yersinia. In: Krieg NR, Holt JG editors. Bergey's Manual of Systematic Bacteriology.Vol 1. Baltimore: Williams and Wilkins; p Advisory Committee on Dangerous Pathogens Approved List of Biological Agents. p Public Health Laboratory Service Standing Advisory Committee on Laboratory Safety. Safety Precautions: Notes for Guidance. 4 th ed. London: Public Health Laboratory Service (PHLS); Control of Substances Hazardous to Health Regulations General COSHH. Approved Code of Practice and Guidance, L5. Suffolk: HSE Books; Health and Safety Executive. 5 steps to risk assessment: a step by step guide to a safer and healthier workplace, IND (G) 163 (REVL). Suffolk: HSE Books; Health and Safety Executive. A guide to risk assessment requirements: common provisions in health and safety law, IND (G) 218 (L). Suffolk: HSE Books; Health Services Advisory Committee. Safety in Health Service laboratories. Safe working and the prevention of infection in clinical laboratories and similar facilities. 2 nd ed. Suffolk: HSE Books; NHS Estates. Health Building Note 15. Facilities for pathology services. 2nd ed. London: The Stationary Office; BS EN 12469: Biotechnology - performance criteria for microbiological safety cabinets. London: British Standards Institution (BSI); BS 5726: Microbiological safety cabinets. Part 2. Recommendations for information to be exchanged between purchaser, vendor and installer and recommendations for installation. London: British Standards Institution (BSI); BS 5726: Microbiological safety cabinets. Part 4. Recommendations for selection, use and maintenance. London: British Standards Institution (BSI); Advisory Committee on Dangerous Pathogens. The management, design and operation of microbiological containment laboratories. Suffolk: HSE Books; Health Protection Agency. Laboratory Reporting to the Health Protection Agency. Guide for diagnostic laboratories. February Revisione no: 2 Data di revisione Emesso da: Standard Unit, Evaluations and Standards Laboratory Pagina 11 di 11 Riferimento no: BSOP ID 21i2