Paolo Chiarugi. U.O. Analisi Chimico-Cliniche. AOUP Pisa

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1 VEQ Proteine Specifiche Ciclo 2016 Paolo Chiarugi U.O. Analisi Chimico-Cliniche AOUP Pisa

2 Proteine Specifiche o Aspecifiche? PROTEINA Val.Rif. (g/l) Sintesi Alfa 1 - Antitripsina 0,9-2,0 Fegato Alfa 1 Glicoproteina Acida 0,5-1,2 Fegato Alfa 2 - Macroglobulina 1,3 3,0 Fegato Aptoglobina 0,3 2,0 Fegato Beta 2 - Microglobulina 0,0008 0,0025 Ubiquitaria C3 0,9 1,8 Fegato C4 0,1 0,4 Fegato Ceruloplasmina 0,2 0,6 Fegato Cistatina C 0,0006 0,0014 Ubiquitaria Fattore Reumatoide <10 UI/mL S.I. IgA 0,7 4,0 S.I. IgE <0,00043 S.I. IgG 7 16 S.I. IgM 0,4 2,3 S.I. Kappa-Catena Leggera 2-4 S.I. Lambda-Catena Leggera 1 2,4 S.I. Proteina C Reattiva < 0,005 Fegato Prealbumina 0,2 0,4 Fegato Proteina Legante il Retinolo 0,03 0,06 Fegato Recettore Solubile Transferrina 0,0008 0,0018 Ubiquitaria Transferrina 2,0 3,6 Fegato

3 VEQ Proteine Specifiche

4 PCR 98,2 Transferrina 88,8 Frequenza di dosaggio Fattore Reumatoide IgG IgA IgM Alfa 1 Glicoproteina Acida 76,2 83,2 83,2 82,6 87,1 C4 69,1 C3 69,1 Beta 2 - Microglobulina 55,9 IgE Aptoglobina Lambda - Catena Leggera Kappa - Catena Leggera Alfa 1 - Antitripsina Ceruloplasmina Prealbumina Kappa - Cat.Leg. Rif. alle IgG Cistatina C Lambda - Cat.Leg. Rif. alle IgG 9,1 8,8 8,8 28,5 27,6 43,8 39,1 37,1 37,1 35,3 340 CENTRI PARTECIPANTI, 18 REGIONI: Lombardia: 46% Toscana: 21% Piemonte: 7,5% Abruzzo: 6,6% Marche: 5% Alfa 2 - Macroglobulina 8,8 Recettore Solubile Transferrina 6,8 Proteina Legante Retinolo 4,

5 Metodi usati test, campioni 7 su 8 METODO % VARIANTI STRUMENTO e/o REAGENTE + USATO AGGLUTINAZIONE 0,4 11 SIEMENS CARD 0,1 4 I-CHROMA BODITECH CHEMILUM. 1,2 12 IMMULITE 2000 MEDICAL SYSTEM COLORIMETRICO 0,004 2 CHEMACOMP 100 G.D. DRY CHEMISTRY 0,4 4 VITROS ORTHO ELFA 1,13 2 VIDAS BIOMERIEUX IMMUNODIFF. 1,7 13 LIOFILCHEM IMMUNOENZ. 0,15 7 CHORUS DIESSE IMMUNOFLUOR. 0,2 4 AIA TOSOH IMMUNOPREC. 0,005 1 NYCOCARD SENTINEL IMMUNOTURB. 64,4 167 COBAS ROCHE MEIA 0,07 2 AXSYM ABBOTT NEFELOMETRICO 28,5 34 B.N. SIEMENS

6 % Metodi usati per analisi TURBIDIM. NEFELOM. RID ALTRO Alfa 1 - Antitripsina Alfa 1 Glicoproteina Acida Alfa 2 - Macroglobulina Aptoglobina Beta 2 - Microglobulina C C Ceruloplasmina Cistatina C Fattore Reumatoide IgA IgE IgG IgM Kappa - Cat.Leg. Rif. alle IgG Kappa - Catena Leggera Lambda - Cat.Leg. Rif. alle IgG Lambda - Catena Leggera PCR Prealbumina Proteina Legante Retinolo Recettore Solubile Transferrina Transferrina

7 CRM 470: la nuova era delle proteine specifiche

8 Cause d inaccuratezza Trasferimento dei valori da CRM a calibratori e controlli Eterogeneità delle proteine Effetto matrice

9 ERM-DA470k/IFCC

10 Principali metodi usati IMMUNODIFFUSIONE RADIALE % VARIANTI STRUMENTO e/o REAGENTI + USATI 1,7 13 SIEMENS LIOFILCHEM MEDIC HUMATECH BIODEVICE NEFELOMETRIA 28,5 34 VISTA BN II IMAGE ARRAY 360 TURBIDIMETRIA 64,4 167 COBAS/MODULAR ARCHITECT ADVIA AU, LX, CX, DX ILAB KONELAB SIEMENS SIEMENS BECKMAN BECKMAN ROCHE ABBOTT SIEMENS BECKMAN IL/BIOKIT SCLAVO

11 Immunodiffusione Radiale

12 Nefelometria

13 Turbidimetria

14 Curva di Heidelberger-Kendall

15 CV (media) Alfa 1 - Antitripsina Alfa 1 Glicoproteina Acida Alfa 2 - Macroglobulina Aptoglobina Beta 2 - Microglobulina C C Ceruloplasmina Cistatina C Fattore Reumatoide

16 CV (media) IgA IgE IgG IgM Kappa - Cat.Leg. Rif. alle IgG Kappa - Catena Leggera Lambda - Cat.Leg. Rif. alle IgG Lambda - Catena Leggera PCR Prealbumina Proteina Legante il retinolo Recettore Solubile Transferrina Transferrina

17 CV 2016 Analita Media Min Max Alfa 1 - Antitripsina 5,2 2,8 10,3 Alfa 1 Glicoproteina Acida 6,8 4,3 10,3 Alfa 2 - Macroglobulina 15,8 15,0 16,6 Aptoglobina 5,0 2,2 11,3 Beta 2 - Microglobulina 9,0 4,5 22,2 C3 4,6 2,4 7,6 C4 5,5 3,7 10,7 Ceruloplasmina 7,9 2,7 13,7 Cistatina C 11,7 6,4 18,2 Fattore Reumatoide 8,3 3,0 20,3 IgA 4,8 2,2 23,4 IgE 9,3 3,9 19,7 IgG 4,4 1,8 18,7 IgM 5,1 1,6 21,9 Kappa - Cat.Leg. Rif. alle IgG 5,0 4,3 6,5 Kappa - Catena Leggera 6,3 4,3 9,2 Lambda - Cat.Leg. Rif. alle IgG 4,9 3,2 10,8 Lambda - Catena Leggera 6,5 4,7 8,8 PCR 6,0 3,2 16,5 Prealbumina 6,7 2,8 12,1 Proteina Legante Retinolo 6,3 6,3 6,3 Recettore Solubile 8,2 0,4 11,1 Transferrina 4,8 1,7 13,9

18 CV 2016 Metodo Media Min Max CHEMILUM. 11,4 7,6 20,0 CHEMILUM. LIAISON 22,2 22,2 22,2 DRY CHEMISTRY 10,8 7,7 16,5 ELETTROCHEMIL ROCHE 6,8 5,3 8,6 ELFA 13,4 6,0 22,2 IMMUNODIFF. 19,1 9,7 23,4 IMMUNOT.ROCHE COBAS /MODULAR 4,0 2,2 9,1 IMMUNOTURB SIEMENS 5,1 3,2 6,5 IMMUNOTURB ADVIA SIEMENS 3,9 2,6 6,0 IMMUNOTURB SIEMENS 8,6 5,4 14,0 IMMUNOTURB ABBOTT ARCHITECT 5,2 3,1 10,0 IMMUNOTURB BECKMAN RF LATEX 4,9 4,1 5,5 IMMUNOTURB. 7,6 3,5 16,7 IMMUNOTURB. ABBOTT ARCHITECT 3,5 2,1 6,0 IMMUNOTURB. ADVIA SIEMENS 4,9 2,7 7,1 IMMUNOTURB. BECKMAN AU 4,5 3,2 5,8 IMMUNOTURB. BECKMAN AU 4,1 3,0 6,0 IMMUNOTURB. BECKMAN LX/CX/DX 3,5 1,6 10,1 IMMUNOTURB. I.L./BIOKIT 5,2 2,4 8,9 IMMUNOTURB. INTEGRA 9,9 4,3 16,4 IMMUNOTURB.ABBOTT ARCHITECT 7,7 4,3 11,4 IMMUNOTURB.BECKMAN AU 3,5 2,3 4,0 IMMUNOTURB.ROCHE COBAS 6-3,4 2,9 3,7 NEFEL. BECKMAN IMAGE 4,9 4,2 6,5 NEFELOM.BECKMAN IMAGE 5,0 4,1 6,7 NEFELOM. BECKMAN 5,6 3,3 7,6 NEFELOM. BECKMAN IMAGE 5,3 3,1 6,5 NEFELOM. SIEMENS 5,8 0,4 11,1 NEFELOM. SIEMENS BN 7,7 3,6 20,3 NEFELOMET.- BECKMAN 6,8 2,8 10,3 NEFELOMETRICO 5,9 2,8 18,7 NEFELOMETRICO BECKMAN 4,7 2,7 6,9 NEFELOMETRICO/BECKMAN 10,1 8,3 13,7

19 CV 2016 Prestazione Metodo Max IgA IMMUNODIFF. 23,4 Beta 2 - Microglobulina CHEMILUM. LIAISON 22,2 Beta 2 - Microglobulina ELFA 22,2 IgM IMMUNODIFF. 21,9 Fattore Reumatoide NEFELOM. SIEMENS BN 20,3 Beta 2 - Microglobulina CHEMILUM. 20,0 IgE ELFA 19,7 Alfa 1 - Antitripsina (Nefelom. Siemens) NEFELOMETRICO 18,7 IgG IMMUNODIFF. 18,7 Cistatina C NEFELOM. SIEMENS BN 18,2 Fattore Reumatoide IMMUNOTURB. 16,7 Alfa 2 - Macroglobulina NEFELOM. SIEMENS BN 16,6 PCR DRY CHEMISTRY 16,5 PCR IMMUNOTURB. INTEGRA 16,4 IgE CHEMILUM. 14,1 Fattore Reumatoide IMMUNOTURB SIEMENS 14,0 Transferrina IMMUNOTURB. 13,9 Fattore Reumatoide NEFELOMETRICO/BECKMAN 13,7 Ceruloplasmina NEFELOMETRICO 13,7 Prealbumina NEFELOM. SIEMENS BN 12,1

20 VEQ Immunoglobuline

21 IgG mg/dl NEFELOM. TURBIDIM. RID Campione: 1 NEFELOM. TURBIDIM. RID Campione: NEFELOM. TURBIDIM. RID Campione: 3 NEFELOM. TURBIDIM. RID Campione: 4 Media ±DS

22 CV% IgG CV B Nefelom. Turbidim. RID

23 PCR mg/l NEFELOM. TURBIDIM. DRY CHEM. Campione: 1 NEFELOM. TURBIDIM. DRY CHEM. Campione: NEFELOM. TURBIDIM. DRY CHEM. Campione: 3 NEFELOM. TURBIDIM. DRY CHEM. Campione: 4 Media ±DS

24 CV% PCR 0,5. CV B Nefelom. Turbidim. Dry Chemistry

25 PCR ultrasensibile

26 Fattore Reumatoide

27 Fattore Reumatoide UI/mL 90 NEFELOM. TURBIDIM. AGGLUTIN. Campione: 2 NEFELOM. TURBIDIM. AGGLUTIN. Campione: NEFELOM. TURBIDIM. AGGLUTIN. Campione: 4 NEFELOM. TURBIDIM. AGGLUTIN. Campione: 5 Media ±DS

28 CV% Fattore Reumatoide CV B Nefelom. Turbidim. Agglutinaz.

29 Fattore Reumatoide (Turbidim.) UI/mL ROCHE SIEMENS BECKMAN Campione: 1 ROCHE SIEMENS BECKMAN Campione: ROCHE SIEMENS BECKMAN Campione: 3 ROCHE SIEMENS BECKMAN Campione: 4 Media ±DS

30 Fattore Reumatoide Standardizzazione non ERM-DA470 Non dosabile come IgM in unità di massa Persistenza di metodi qualitativi - semiquantitativi

31 CV% CV B Recenti esordienti NEFELOMETRICO SIEMENS Recettore Solubile Transferrina Cistatina C

32 Leggere le catene leggere CATENE LEGGERE LEGATE K(2-4)g/L (1-2,4)g/L LIBERE K(3-19)mg/L (6-26)mg/L POLICLONALI MONOCLONALI POLICLONALI MONOCLONALI ANTISIERI ANTI-CL TOTALI ANTISIERI ANTI-CL LIBERE

33 Leggere le catene leggere LEGATE POLICLONALI Dosaggio CL totali k o λ come se fossero tutte libere CATENE LEGGERE MONOCLONALI POLICLONALI ANTISIERI ANTI-CL TOTALI LIBERE MONOCLONALI Dosaggio immunoglobuline che montano CL k o λ Fattore di conversione = 150 (PM IgG ) / 46 (2xPM CL ) 3

34 Leggere le catene leggere

35 CV% Kappa catena leggera CV B K(nefelom.) K(turbidim.) K(rif.IgG)

36 CV% Lambda catena leggera L(nefelom.) L(turbidim.) L(rif.IgG) 6 4 CV B

37 CL totali Dosaggio CL totali. Utilità clinica: Rapporto k/ come indizio di monoclonalità Parametro di follow-up per CM già tipizzate

38 CL libere

39 CL libere

40 CL libere

41 CL libere: discrepanza tra letteratura e pratica Nonostante il crescente numero di pubblicazioni in materia e l adattabilità del metodo sui principali strumenti, la maggior parte dei laboratori ignora il dosaggio delle CLL nel siero continuando ad utilizzare il dosaggio di CL totali, equivoco e destinato ad obsolescenza.

42 CL libere: VEQ Variabilità fra strumenti Problema dell eccesso di antigene

43 Coming soon (?): Hevylite

44 Proteine specifiche: conclusioni Variabilità inter- e intra-metodo: Limiti di standardizzazione Metodi manuali Vecchie e nuove proteine: Nuove esigenze cliniche Svecchiamento del repertorio