CEPPI MICROBICI DI RIFERIMENTO

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1 numero 2 gennaio 2007 CEPPI MICROBICI DI RIFERIMENTO L utilizzo di microrganismi come standard di riferimento è ormai diventato prassi comune nei laboratori microbiologici, dove sono molteplici le applicazioni in campo alimentare, farmaceutico, medico e tessile. Le più tipiche sono riassunte in Tabella 1. Tabella 1: Applicazioni più comuni dei ceppi microbici Test di Fertilità sui terreni di coltura Verifica della Selettività dei terreni di coltura Microbial Limit Test su prodotti farmaceutici Studi di Bioburden Controllo qualità alimenti e acque Verifica dell efficienza dei filtri Controllo dei sistemi di identificazione batterica Verifica dell attività di sostanze battericide o batteriostatiche Gli standard internazionali forniscono indicazioni precise riguardo i microrganismi da utilizzare, specificando le fonti primarie a cui attingere, i ceppi ed i metodi per la loro propagazione e crescita. E il caso, ad esempio, dei test indicati dalle Farmacopee per verificare la fertilità dei terreni di coltura: essi prevedono la semina di microrganismi standardizzati, in numero di CFU inferiore a 100 (Tabella 2). Tabella 2: Microrganismi per test di fertilità (EP, USP) Staphylococcus aureus ATCC 6538 Bacillus subtilis ATCC 6633 Pseudomonas aeruginosa ATCC 9027 Clostridium sporogenes ATCC Candida albicans ATCC Aspergillus niger ATCC KAIROSafe review n. 2, gennaio /6

2 I ceppi ATCC (American Type Colture Collection) sono indicati, oltre che dalle Farmacopee, anche da tutti i più importanti organismi internazionali e sono di gran lunga i più utilizzati, sotto forma di colture stock o di derivati liofilizzati pronti all uso. I singoli laboratori hanno la possibilità di scegliere se fare uso di: colture pure ATCC, mantenendo colture stock a basse temperature (ceppoteche) e successivamente passandole in subculture per l utilizzo di routine, oppure ceppi microbici liofilizzati in pellet, derivati da colture ATCC e pronti da usare. In ogni caso, al momento dell uso le caratteristiche di crescita e di performance dei microrganismi devono essere rimaste quelle della coltura originaria. Occorre quindi valutare attentamente i seguenti fattori: 1. origine del ceppo. Nel caso dei ceppi liofilizzati pronti all uso, essa è garantita dai produttori in possesso della licenza ATCC, che consente di fornire ceppi microbici derivati da colture ATCC e riportanti l emblema ATCC Licensed Derivative ; 2. corretta conservazione; 3. appropriato numero di passaggi dalla coltura di riferimento. 1. ORIGINE DEL CEPPO, LICENZA ATCC PER CEPPI MICROBICI LIOFILIZZATI L utilizzo di ceppi microbici liofilizzati pronti all uso assicura notevole praticità e convenienza, soprattutto perchè evita l applicazione di tecniche di subcoltura laboriose e dispendiose. Le tipologie presenti sul mercato consentono inoltre lo svolgimento di test sia qualitativi che quantitativi. I microrganismi sono forniti con certificato di qualità, che riporta nel dettaglio le caratteristiche del ceppo e i risultati dei test di identificazione. Dato che l utilizzo di microrganismi ATCC rappresenta di per sé una garanzia, ATCC ha avviato un selettivo programma di licenze (ATCC Licensed Derivative Program), con lo scopo di mantenere un controllo costante del trattamento e della distribuzione dei ceppi microbici derivati dalle colture ATCC. Solo le aziende in possesso di tale licenza possono produrre e vendere ceppi microbici utilizzando l emblema ATCC Licensed Derivative, emblema che identifica gli unici ceppi per i quali la qualità ATCC può essere completamente garantita fino all utilizzatore finale. I ceppi liofilizzati prodotti da Mecconti (Scheda 1) riportano l emblema ATCC Licensed Derivative. Avendo dato assolute garanzie riguardo i propri sistemi di gestione, produzione e distribuzione, Mecconti è infatti una delle poche aziende ad essere state KAIROSafe review n. 2, gennaio /6

3 ammesse all ATCC Licensed Derivative Program. KAIROSafe aderisce al medesimo programma in qualità di distributore esclusivo Mecconti, e garantisce ai propri clienti la fornitura di ceppi microbici che riportano l emblema ATCC Licensed Derivative. 2. CONSERVAZIONE DEI MICRORGANISMI I ceppi microbici in pellet liofilizzato sono conservati a -20 C oppure a 2-8 C, a seconda delle indicazioni del produttore. Le colture stock sono invece mantenute a basse temperature, a -80 C o in azoto liquido se il periodo di conservazione è prolungato (un anno o più), mentre per periodi più brevi sono sufficienti i -20 C. Le subcolture su becco di clarino si possono poi conservare a 2-8 C per una-due settimane. Per rendere più agevole il mantenimento di ceppoteche e la successiva produzione di subcolture, procedimento di per sé piuttosto problematico e laborioso, TSC ha sviluppato il sistema Protect (Scheda 2), che associa la presenza di una sostanza criopreservante all adesione dei microrganismi a speciali perline in ceramica porosa. 3. NUMERO DI PASSAGGI Un passaggio è rappresentato dal trasferimento del microrganismo da una coltura vitale ad un terreno fresco sul quale possa crescere. Ogni subcoltura è di per sé un passaggio. La produzione di colture stock a partire dalla coltura pura ATCC rappresenta il primo passaggio. Il secondo passaggio si compie con la subcoltura della coltura stock. La semplice reidratazione di un ceppo liofilizzato in pellet o lo scongelamento di una coltura mantenuta in congelatore non rappresentano un passaggio, a meno che il microrganismo non venga riseminato in terreno fresco. Nel caso dei ceppi liofilizzati pronti all uso, sono disponibili in commercio tipologie con diverso numero di passaggi. Mecconti propone tre formati di ceppi liofilizzati in pellet: MicroPellets: ceppi con 3 passaggi, a titolo noto, conservabili a -20 C. MicroSwabs: ceppi in swab con 4 passaggi, non titolati, conservabili a 2-8 C. MicroSwabs Plus: ceppi in swab con 2 passaggi, non titolati, conservabili a 2-8 C. Diversi organismi internazionali si trovano d accordo nel raccomandare l utilizzo di microrganismi che abbiano subito al massimo cinque passaggi dalla coltura ATCC di riferimento. KAIROSafe review n. 2, gennaio /6

4 SCHEDA PRODOTTO 1 CEPPI MICROBICI LIOFILIZZATI MECCONTI I ceppi microbici Mecconti sono derivati con licenza da colture ATCC l emblema ATCC Licensed Derivative *. e riportano La Certificazione di Qualità accompagna sempre i prodotti, così come le istruzioni d uso, le Schede tecniche e le Schede di sicurezza. Di notevole interesse è l innovativo confezionamento dei ceppi Mecconti, che li distingue dagli altri presenti sul mercato. I microrganismi sono liofilizzati in forma di pellet e sono confezionati singolarmente in modo da ottimizzarne l uso, evitando sprechi o contaminazioni. Mecconti propone i seguenti formati: MicroPellets: ceppi titolati, CFU/0,1 ml (EP e USP) MicroSwabs: ceppi non titolati, > CFU/pellet MicroSwabs Plus: ceppi non titolati, > CFU/pellet, 2 passaggi Ceppi titolati MicroPellets Set costituito da due piccole provette di plastica, una contenente il pellet liofilizzato e l altra 1 ml di liquido per la ricostituzione. Lo scioglimento del pellet è istantaneo e la sospensione ottenuta contiene 10 dosi da CFU. Ceppi non titolati MicroSwabs e MicroSwabs Plus Il pellet titolato si trova all interno di una provetta con tappo-serbatoio, a cui è applicato un tampone ovattato. Il sistema consente lo scioglimento del pellet e i successivi strisci senza alcuna manipolazione da parte dell operatore. I MicroSwabs Plus si differenziano per il ridotto numero di passaggi (2) dal ceppo ATCC di riferimento. * The ATCC Licensed Derivative emblem, the ATCC Licensed Derivative word mark and the ATCC catalog marks are trademarks of ATCC used under license. Kairosafe is licensed to use these trademarks and to sell licensed products manufactured for Mecconti using ATCC materials derived from ATCC cultures. Look for the ATCC Licensed Derivative emblem for products derived from ATCC cultures. I CEPPI MICROBICI MECCONTI SONO DISTRIBUITI IN ITALIA IN ESCLUSIVA DA KAIROSAFE KAIROSafe review n. 2, gennaio /6

5 SCHEDA PRODOTTO 2 PROTECT BEADS Sistema messo a punto da TSC (Technical Service Consultants Ltd), per la conservazione di ceppi batterici, lieviti e funghi in azoto liquido o in congelatore (-20, -70, -80 C) ed il mantenimento di ceppoteche. E adatto anche ai microrganismi più esigenti. Protect TM è costituito da una criovial contenente: soluzione nutriente crio-preservante con glicerolo, che previene il danno cellulare dovuto al congelamento; 20 perline di ceramica porosa colorata, sulla cui ampia superficie aderiscono i microrganismi. Confezione: 100 criovial con portaprovette in polistirene o polistirolo, oppure 1000 criovial in sacchetto. Le perline hanno diversi colori, che permettono di differenziare i microrganismi. I colori sono rosso, giallo, verde, blu e bianco. Il tappo della criovial ha lo stesso colore delle perline all interno. Sono disponibili confezioni con un unico colore, a scelta, o con colori misti. Nella confezione sono incluse anche anse sterili in polistirolo da 1 µl, chiuse in sacchetti da 20 pezzi. La sterilizzazione a raggi gamma garantisce una SAL Utilizzo: Preparazione della ceppoteca - Preparare una sospensione densa di microrganismi nella criovial Protect - Tappare e agitare come indicato nelle istruzioni d uso - Aspirare più liquido possibile ed eliminarlo - Congelare Recupero dei microrganismi - Togliere la criovial Protect dal congelatore e porla in un crioblock (o in analogo sistema per mantenere la bassa temperatura) - Rimuovere la perlina necessaria utilizzando un ago sterile o una pinzetta - Strisciare la perlina su agar o metterla direttamente in brodo - Incubare secondo necessità IL SISTEMA PROTECT E DISTRIBUITO IN ITALIA IN ESCLUSIVA DA KAIROSAFE KAIROSafe review n. 2, gennaio /6

6 Per informazioni e richieste: KAIROSafe S.r.l. Sistiana, 41/D Duino Aurisina (TS) Tel/fax: [email protected] web: Ceppi microbici liofilizzati Terreni di coltura disidratati Terreni di coltura pronti all uso Sistema Protect per conservazione di microrganismi Tamponi Spugnette Piastre da contatto per il monitoraggio microbiologico delle superfici Indicatori biologici per sterilizzazione Reagenti e Consumabili per LAL test Accessori per microbiologia KAIROSafe review n. 2, gennaio /6