AVVERTENZA del 23/03/16

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1 ELITechGroup S.p.A. C.so Svizzera, Torino ITALY Uffici: Tel Fax E. mail: sito WEB: AVVERTENZA del 23/03/16 IMPORTANTE PER GLI UTILIZZATORI DEL PRODOTTO: «MYCOPLASMA pn. Q - PCR Alert AmpliMIX» ref. A seguito del nuovo confezionamento del prodotto, sono state apportate delle modifiche al Manuale d Istruzioni per l Uso (IFU) SCH mrts094m. Il kit (codice ) comprende ora anche il prodotto «MYCOPLASMA pn. Q - PCR Alert AmpliPROBE» (in precedenza identificato dal codice RTS094-P). Dal confezionamento del prodotto è stata eliminata la busta esterna di alluminio. Il confezionamento del prodotto (codice ) è quindi costituito esclusivamente da una scatola di plastica rigida contenente tutte le provette dei reagenti. Tutte le modifiche introdotte sono riportate dettagliatamente nel Manuale d Istruzioni per l Uso (IFU). Le modifiche apportate al prodotto non influiscono in alcun modo sulla formulazione dei suoi reagenti, sul loro protocollo di utilizzo e sulle prestazioni analitiche. Per questo motivo la presente IFU può essere utilizzata anche in associazione con la precedente versione del prodotto. NOTA BENE LA REVISIONE DI QUESTO IFU E COMPATIBILE ANCHE CON LA VERSIONE PRECEDENTE DEL KIT THE REVIEW OF THIS IFU IS ALSO COMPATIBLE WITH THE PREVIOUS VERSION OF THE KIT CET IFU MIS A JOUR ANNULE ET REMPLACE ET EST PARFAITEMENT COMPATIBLE AVEC LA VERSION PRECEDENTE DU KIT LA REVISIÓN DE ESTE IFU ES COMPATIBLE TAMBIÉN CON LA VERSIÓN ANTERIOR DEL KIT A REVISÃO DO ESTE IFU ÉTAMBÉM COMPATÍVEL COM A VERSÃO ANTERIOR DO KIT DIE REVIEW VON DIESER IFU IST KOMPATIBLE MIT DER VORIGE VERSION VON DEM TEST-KIT Avvertenza nr. SCH mrts094m del 23/03/16 Pag. 1/1

2 ELITechGroup S.p.A. C.so Svizzera, Torino ITALY Offices: Tel Fax E. mail: WEB site: MYCOPLASMA pn. Q - PCR Alert Kit Ref. RTS035 Composto da: Composed by: Composé par: Compuesto por: Composta por: Komponiert von: (MYCOPLASMA pn. AmpliMIX) (MYCOPLASMA pn. AmpliPROBE) Q - PCR Alert AmpliMASTER (M) (P) RTS000 _Front

3 MYCOPLASMA pn. Q - PCR Alert AmpliMIX SOMMARIO USO PREVISTO pag. 1 PRINCIPIO DEL SAGGIO pag. 2 DESCRIZIONE DEL PRODOTTO pag. 2 MATERIALE INCLUSO NEL PRODOTTO pag. 2 MATERIALE RICHIESTO NON INCLUSO NEL PRODOTTO pag. 2 ALTRI PRODOTTI RICHIESTI pag. 3 AVVERTENZE E PRECAUZIONI pag. 3 CAMPIONI E CONTROLLI pag. 5 PROCEDURA pag. 6 LIMITI DELLA PROCEDURA pag. 11 CARATTERISTICHE DELLE PRESTAZIONI pag. 12 BIBLIOGRAFIA pag. 14 PROBLEMI E SOLUZIONI pag. 15 LEGENDA DEI SIMBOLI pag. 16 USO PREVISTO ELITechGroup S.p.A. C.so Svizzera, Torino ITALY Uffici: Tel Fax E. mail: emd.support@elitechgroup.com sito WEB: C Il prodotto è parte di un saggio qualitativo di amplificazione degli acidi nucleici per la ricerca del DNA di Mycoplasma pneumoniae (M. pneumoniae) in campioni di DNA estratto da lavaggi bronco-alveolari (BAL), bronco-tracheo aspirati (BA). Il prodotto trova impiego, insieme ai dati clinici e ad altri esami di laboratorio, nella diagnosi e nel monitoraggio dell'infezione da M. pneumoniae. PRINCIPIO DEL SAGGIO La procedura prevede l'esecuzione di una reazione di amplificazione real time in micropiastra con un termostato programmabile con sistema ottico di rilevamento della fluorescenza (thermal cycler per real time). In ogni pozzetto si effettua una reazione di amplificazione specifica per una regione del gene codificante la citoadesina P1 di M. pneumoniae (ripetuta tre volte nel genoma batterico) e per una regione del gene umano della beta Globina (Controllo Interno di idoneità del campione) utilizzando il DNA estratto dai campioni in esame. La sonda specifica per M. pneumoniae marcata con il fluoroforo FAM è attivata quando ibrida con il prodotto specifico della reazione di amplificazione per M. pneumoniae. La sonda specifica per il Controllo Interno marcata con il fluoroforo VIC è attivata quando ibrida con il prodotto della reazione di amplificazione per il Controllo Interno. L emissione della fluorescenza aumenta con l'aumentare dei prodotti specifici della reazione di amplificazione ed è misurata e registrata dallo strumento. L'elaborazione dei dati permette di determinare la presenza del DNA di M. pneumoniae nel campione di partenza. La standardizzazione del sistema è stata eseguita su strumenti Applied Biosystems della serie DESCRIZIONE DEL PRODOTTO Il prodotto fornisce due dei tre reagenti necessari per la ricostituzione della miscela di reazione completa e l esecuzione del saggio: MYCO. pn. AmpliMIX Miscela di oligonucleotidi di innesco (primer) AmpliMIX per l'amplificazione real time in soluzione stabilizzante, prealiquotata in quattro provette monouso. Ogni provetta contiene 110 µl di soluzione, sufficiente per 24 test. MYCO. pn. AmpliPROBE Miscela di sonde fluorescenti AmpliPROBE per l'amplificazione real time in soluzione stabilizzante, prealiquotata in quattro provette monouso. Ogni provetta contiene 110 µl di soluzione, sufficiente per 24 test. Gli oligonucleotidi di innesco e la sonda per M. pneumoniae (marcata con il fluoroforo FAM e bloccata dal gruppo MGB-NFQ) sono specifici per una regione del gene codificante la citoadesina P1 di M. pneumoniae. Gli oligonucleotidi di innesco e la sonda per il controllo interno di idoneità del campione (marcata con il fluoroforo VIC e bloccata dal gruppo MGB-NFQ) sono specifici per la regione promotore e 5' UTR del gene umano della beta Globina. Il prodotto consente di effettuare 96 determinazioni, standard e controlli compresi. MATERIALE INCLUSO NEL PRODOTTO Componente Descrizione Quantità Composizione Etichettatura MYCO. pn. AmpliMIX MYCO. pn. AmpliPROBE miscela di oligonucleotidi di innesco miscela di sonde fluorescenti marcate con FAM / MGB-NFQ e con VIC / MGB-NFQ 4 x 110 µl 4 x 110 µl Oligonucleotidi, TRIS base, TRIS cloridrato, Glicerolo, Triton X-100 Oligonucleotidi fluorescenti, TRIS base, TRIS cloridrato, Glicerolo, Triton X SCH mrts094m 02/02/16 Revisione 04 Pag. 1/17 SCH mrts094m 02/02/16 Revisione 04 Pag. 2/17

4 MATERIALE RICHIESTO NON INCLUSO NEL PRODOTTO - Cappa a flusso laminare. - Guanti senza polvere monouso in nitrile o simili. - Miscelatore vortex. - Microcentrifuga da banco ( RPM). - Micropipette e puntali sterili con filtro per aerosol o a dispensazione positiva (0,5-10 µl, 2-20 µl, 5-50 µl, µl, µl). - Acqua pura per biologia molecolare. - Termostato programmabile con sistema ottico di rilevamento della fluorescenza. ALTRI PRODOTTI RICHIESTI I reagenti per l'estrazione del DNA dai campioni da analizzare, il controllo positivo di estrazione, i reagenti ottimizzati per l'amplificazione e il controllo positivo di amplificazione non sono inclusi in questo prodotto. Per eseguire queste fasi analitiche è richiesto l impiego dei seguenti prodotti della ELITechGroup S.p.A.: «EXTRAcell» (codice EXTD02), kit di estrazione del DNA da campioni cellulari; «CPE - Internal Control» (codice CTRCPE), controllo positivo di estrazione di DNA plasmidico per estrazioni del DNA da campioni non cellulari. «Q - PCR Alert AmpliMASTER» (codice RTS000), miscela di reagenti ottimizzati per l'amplificazione real time; Nel caso sia previsto l'uso di uno strumento 7300 Real-Time PCR System, si consiglia l'impiego del prodotto generico «Q - PCR Microplates» (ELITechGroup S.p.A., codice RTSACC01) micropiastre con pozzetti da 0,2 ml e fogli adesivi per l'amplificazione real time. «MYCOPLASMA pn. - Positive Control» (codice CTR094), controllo positivo di DNA plasmidico. AVVERTENZE E PRECAUZIONI Questo prodotto è riservato esclusivamente all'uso in vitro. Avvertenze e precauzioni generali Manipolare e smaltire tutti i campioni biologici come se fossero in grado di trasmettere agenti infettivi. Evitare il contatto diretto con i campioni biologici. Evitare di produrre schizzi o aerosol. Il materiale che viene a contatto con i campioni biologici deve essere trattato con ipoclorito di sodio al 3% per almeno 30 minuti oppure trattato in autoclave a 121 C per un'ora prima di essere smaltito. Manipolare e smaltire tutti i reagenti e tutti i materiali usati per effettuare il saggio come se fossero potenzialmente infettivi. Evitare il contatto diretto con i reagenti. Evitare di produrre schizzi o aerosol. I rifiuti devono essere trattati e smaltiti secondo le opportune regole di sicurezza. Il materiale monouso combustibile deve essere incenerito. I rifiuti liquidi contenenti acidi o basi devono essere neutralizzati prima dell'eliminazione. Indossare indumenti protettivi e guanti adatti e proteggersi gli occhi / la faccia. Non pipettare a bocca alcuna soluzione. Non mangiare, bere, fumare o applicare cosmetici nelle aree di lavoro. Lavarsi bene le mani dopo avere maneggiato i campioni e i reagenti. Eliminare i reagenti avanzati ed i rifiuti secondo le norme vigenti. Leggere tutte le istruzioni fornite nel prodotto prima di eseguire il saggio. Attenersi alle istruzioni fornite nel prodotto durante l'esecuzione del saggio. Rispettare la data di scadenza del prodotto. Utilizzare solo i reagenti presenti nel prodotto e quelli consigliati dal produttore. Non scambiare reagenti provenienti da lotti diversi. Non utilizzare reagenti provenienti da prodotti di altri produttori. Avvertenze e precauzioni per la biologia molecolare Le procedure di biologia molecolare, come l'estrazione, la trascrizione inversa, l'amplificazione e la rivelazione di acidi nucleici, richiedono personale addestrato per evitare il rischio di risultati errati, in particolare a causa della degradazione degli acidi nucleici dei campioni o della contaminazione dei campioni da parte di prodotti di amplificazione. E' necessario disporre di aree separate per l'estrazione / allestimento delle reazioni di amplificazione e per l'amplificazione / rivelazione dei prodotti di amplificazione. Mai introdurre un prodotto di amplificazione nell'area per l'estrazione / allestimento delle reazioni di amplificazione. E' necessario disporre di camici, guanti e strumenti dedicati per l'estrazione / allestimento delle reazioni di amplificazione e per l'amplificazione / rivelazione dei prodotti di amplificazione. Mai trasferire camici, guanti e strumenti dall'area per l'amplificazione / rivelazione dei prodotti di amplificazione all'area per l'estrazione / allestimento delle reazioni di amplificazione. I campioni devono essere dedicati esclusivamente a questo tipo di analisi. I campioni devono essere manipolati sotto una cappa a flusso laminare. Provette contenenti campioni diversi non devono mai essere aperte contemporaneamente. Le pipette utilizzate per manipolare i campioni devono essere dedicate solo a questo uso. Le pipette devono essere del tipo a dispensazione positiva o utilizzare puntali con filtro per aerosol. I puntali utilizzati devono essere sterili, esenti da DNasi ed RNasi, esenti da DNA ed RNA. I reagenti devono essere manipolati sotto una cappa a flusso laminare. I reagenti necessari per l'amplificazione devono essere preparati in modo da essere utilizzati in una singola sessione. Le pipette utilizzate per manipolare i reagenti devono essere dedicate solo a questo uso. Le pipette devono essere del tipo a dispensazione positiva o utilizzare puntali con filtro per gli aerosol. I puntali utilizzati devono essere sterili, esenti da DNasi ed RNasi, esenti da DNA ed RNA. I prodotti di amplificazione devono essere manipolati in modo da limitarne al massimo la dispersione nell'ambiente per evitare la possibilità di contaminazioni. Le pipette utilizzate per manipolare i prodotti di amplificazione devono essere dedicate solo a questo uso. Avvertenze e precauzioni specifiche per i componenti Le provette contenenti l'amplimix e l AmpliPROBE sono monouso e pertanto devono essere utilizzate una volta sola nella preparazione della miscela di reazione. SCH mrts094m 02/02/16 Revisione 04 Pag. 3/17 SCH mrts094m 02/02/16 Revisione 04 Pag. 4/17

5 CAMPIONI E CONTROLLI PROCEDURA Campioni Questo prodotto deve essere utilizzato con DNA estratto dai seguenti campioni biologici: lavaggi bronco-alveolari (BAL), bronco-tracheo aspirati (BA). I campioni di lavaggio bronco-alveolare e di bronco-tracheo aspirato destinati all estrazione del DNA devono essere raccolti secondo le indicazioni del laboratorio in Soluzione fisiologica sterile, trasportati a +2 / +8 C e conservati a +2 / +8 C per un massimo di tre giorni. Non congelare i campioni di escreato, di lavaggio bronco-alveolare e di bronco-tracheo aspirato in modo da evitare la lisi delle cellule e la perdita di titolo del DNA batterico. Le istruzioni per il pretrattamento del campione clinico e per l'estrazione del DNA sono contenute nel Manuale di istruzioni per l'uso del kit «EXTRAcell». Sostanze interferenti Il DNA estratto dal campione di partenza non deve contenere emoglobina o mucoproteine per evitare fenomeni di inibizione e la comparsa di frequenti risultati non validi. Non sono disponibili dati riguardo eventuali fenomeni di inibizione da parte di farmaci antivirali, antibiotici, chemioterapici o immunosopressori. Controlli di amplificazione E' assolutamente necessario convalidare ciascuna sessione di amplificazione allestendo una reazione di controllo negativo e una reazione di controllo positivo. Per il controllo negativo utilizzare acqua pura per biologia molecolare (non fornita nel prodotto) da aggiungere alla reazione al posto del DNA estratto dal campione. Per il controllo positivo utilizzare il prodotto «MYCOPLASMA pn. - Positive Control». Controlli di qualità E' consigliato convalidare l'intera procedura di analisi di ciascuna sessione, estrazione ed amplificazione, utilizzando un campione negativo e un campione positivo già testati o del materiale di riferimento calibrato. Impostazione della sessione di amplificazione real time (Da eseguire nell'area di amplificazione / rivelazione dei prodotti di amplificazione). Prima di iniziare la sessione, riferendosi alla documentazione dello strumento, è necessario: - accendere il thermal cycler per real time, accendere il computer di controllo, lanciare il software dedicato e aprire una sessione "absolute quantification"; - impostare il "detector" per la sonda per M. pneumoniae con il "reporter" = "FAM" e il "quencher" = "none" (NFQ è un quencher non fluorescente) e chiamarlo MYCO.PN. ; - impostare il "detector" per la sonda per il Controllo Interno con il "reporter" = "VIC" e il "quencher" = "none" (NFQ è un quencher non fluorescente) e chiamarlo CI ; - per ciascun pozzetto in uso della micropiastra, impostare i "detector" (tipo di fluorescenza da misurare), il "passive reference" = "ROX" (normalizzazione della fluorescenza misurata) e il tipo di reazione (campione, controllo negativo di amplificazione, controllo positivo di amplificazione). Compilare il Piano di lavoro allegato al fondo di questo manuale di istruzioni per l'uso trascrivendo queste informazioni oppure stampare l'organizzazione della micropiastra. Il Piano di lavoro dovrà essere seguito con attenzione durante il trasferimento nei pozzetti della miscela di reazione e dei campioni. Si illustra sotto, a titolo di esempio, come può essere organizzata l'analisi di 14 campioni. C1 C9 C2 C10 C3 C11 C4 C12 C5 C13 C6 C14 C7 CN C8 CP Legenda: C1 - C14: Campioni da analizzare; CN: Controllo negativo di amplificazione; CP: Controllo positivo di amplificazione. Riferendosi alla documentazione dello strumento, impostare sul thermal cycler i parametri del ciclo termico indicando 45 cicli, un volume di reazione di 25 µl e, quando possibile, l'opzione "9600 emulation". Ciclo termico di amplificazione Fase Temperature Tempi Decontaminazione 50 C 2 min Denaturazione iniziale 95 C 10 min. 45 cicli 95 C 15 sec. 60 C 1 min. SCH mrts094m 02/02/16 Revisione 04 Pag. 5/17 SCH mrts094m 02/02/16 Revisione 04 Pag. 6/17

6 Allestimento dell'amplificazione (Da eseguire nell'area di estrazione / allestimento della reazione di amplificazione) Prima di iniziare la sessione è necessario: - prelevare e scongelare le provette con i campioni da analizzare. Agitare gentilmente le provette, centrifugarle per 5 secondi per riportare sul fondo il contenuto e tenerle in ghiaccio; - prelevare e scongelare le provette di AmpliMIX necessarie per la sessione ricordando che il contenuto di ciascuna provetta è sufficiente per allestire 24 reazioni. Agitare gentilmente le provette, centrifugarle per 5 secondi per riportare sul fondo il contenuto e tenerle in ghiaccio; - prelevare e scongelare un numero di provette di AmpliPROBE uguale a quello delle provette di AmpliMIX. Agitare gentilmente le provette, centrifugarle per 5 secondi per riportare sul fondo il contenuto e tenerle in ghiaccio; - prelevare un numero di provette di AmpliMASTER uguale a quello delle provette di AmpliMIX. Scrivere con inchiostro indelebile "MYCO. pn." e la data sull'etichetta delle provette. Centrifugare le provette per 5 secondi per riportare sul fondo il contenuto e tenerle in ghiaccio; - prelevare e scongelare la provetta di Positive Control. Agitare gentilmente le provette, centrifugarle per 5 secondi per riportare sul fondo il contenuto e tenerle in ghiaccio; - prelevare la Amplification microplate che sarà utilizzata nella sessione facendo attenzione a maneggiarla con guanti senza polvere e a non danneggiare i pozzetti. 1. Trasferire 100 µl di AmpliMIX nella provetta di AmpliMASTER. Mescolare bene pipettando per tre volte il volume di 100 µl nella mix. 2. Trasferire 100 µl di AmpliPROBE nella provetta di AmpliMASTER. Mescolare bene pipettando per tre volte il volume di 100 µl nella mix. 3. Miscelare per 5 secondi con il vortex a bassa velocità, evitando di produrre schiuma. 4. Centrifugare le provette per 5 secondi per riportare sul fondo il contenuto. 5. Trasferire, depositandoli accuratamente sul fondo, 20 µl della miscela di reazione così ottenuta nei pozzetti della Amplification microplate come stabilito precedentemente sul Piano di lavoro. Nota bene: Se non si utilizza tutta la miscela di reazione, conservare il volume rimasto al buio a - 20 C per un massimo di un mese nella provetta "MYCO. pn.". Congelare e scongelare la miscela di reazione SOLO UNA VOLTA. 6. Trasferire, depositandoli accuratamente nella miscela di reazione, 5 µl di DNA estratto del primo campione nel corrispondente pozzetto della Amplification microplate come stabilito precedentemente sul Piano di lavoro, procedere ugualmente con tutti gli altri DNA estratti. 7. Trasferire, depositandoli accuratamente nella miscela di reazione, 5 µl di Acqua pura per biologia molecolare (non fornita nel prodotto) nel pozzetto della Amplification microplate del controllo negativo di amplificazione come stabilito precedentemente sul Piano di lavoro. 8. Trasferire, depositandoli accuratamente nella miscela di reazione, 5 µl di Positive Control nel corrispondente pozzetto della Amplification microplate come stabilito precedentemente sul Piano di lavoro. 9. Sigillare accuratamente la Amplification microplate con Amplification sealing sheet. 10. Trasferire la Amplification microplate nel thermal cycler per real time posto nell'area di amplificazione / rivelazione dei prodotti di amplificazione e avviare il ciclo termico di amplificazione. Analisi qualitativa dei risultati I valori registrati della fluorescenza emessa dalla sonda specifica per M. pneumoniae (detector FAM MYCO.PN. ) e dalla sonda specifica per il Controllo Interno (detector VIC CI ) nelle reazioni di amplificazione devono essere analizzati con il software dello strumento. Prima di eseguire l'analisi, riferendosi alla documentazione dello strumento, è necessario: - impostare manualmente l'intervallo di calcolo del Livello di fluorescenza di fondo (Baseline) dal ciclo 6 al ciclo 15*; *Nota bene: Nel caso di un campione positivo ad alto titolo di M. pneumoniae, la fluorescenza FAM della sonda specifica per M. pneumoniae può cominciare a crescere prima del 15 ciclo. In questo caso l'intervallo di calcolo del Livello di fluorescenza di fondo deve essere adattato dal ciclo 6 al ciclo in cui la fluorescenza FAM comincia a crescere. - impostare manualmente la Soglia (Threshold) per la fluorescenza FAM MYCO.PN. a 0,2; - impostare manualmente la Soglia (Threshold) per la fluorescenza VIC CI a 0,1. I valori di fluorescenza emessi dalle sonde specifiche nella reazione di amplificazione e il valore Soglia di fluorescenza permettono di determinare il Ciclo Soglia (Threshold cycle, Ct), il ciclo in cui è stato raggiunto il valore Soglia di fluorescenza. Nella reazione di amplificazione con il Positive Control, il valore di Ct della sonda specifica per M. pneumoniae è utilizzato per convalidare l amplificazione e la rivelazione come descritto nella tabella seguente: Reazione Positive Control M. pneumoniae (FAM MYCO.PN. ) Risultato del saggio Amplificazione / Rivelazione Ct 25 POSITIVO CORRETTA Se il risultato della reazione di amplificazione del Positive Control è Ct > 25 o Ct Non determinato (Undetermined), non è stata rivelata in modo corretto la presenza di DNA bersaglio. Si sono verificati problemi nella fase di amplificazione o di rivelazione (preparazione errata della miscela di reazione, dispensazione errata della miscela di reazione o del controllo positivo, degradazione della sonda o del controllo positivo, impostazione errata della posizione del controllo positivo, impostazione errata del ciclo termico) che possono causare risultati errati. La sessione non è valida e deve essere ripetuta dalla fase di amplificazione. Nella reazione di amplificazione di Controllo negativo, il valore di Ct della sonda specifica per M. pneumoniae è utilizzato per convalidare l amplificazione e la rivelazione come descritto nella tabella seguente: Reazione Controllo negativo M. pneumoniae (FAM MYCO pn. ) Risultato del saggio Amplificazione / Rivelazione Ct Non determinato NEGATIVO CORRETTA Se il risultato della reazione di amplificazione del Controllo negativo è diverso da Ct Non determinato (Undetermined), è stata rivelata la presenza di DNA bersaglio. Si sono verificati problemi nella fase di amplificazione (contaminazione) che possono causare risultati errati e falsi positivi. La sessione non è valida e deve essere ripetuta dalla fase di amplificazione. SCH mrts094m 02/02/16 Revisione 04 Pag. 7/17 SCH mrts094m 02/02/16 Revisione 04 Pag. 8/17

7 Nelle reazioni di amplificazione di ciascun campione, i valori di Ct della sonda specifica per M. pneumoniae sono utilizzati per rivelare la presenza di DNA bersaglio, mentre i valori di Ct della sonda specifica per il Controllo Interno sono utilizzati per convalidare l estrazione, l amplificazione e la rivelazione. Questo prodotto è in grado di rivelare una quantità minima di circa 10 copie di DNA di M. pneumoniae per reazione di amplificazione, corrispondenti a circa 3 genomi Equivalenti per reazione, (limite di rivelazione del prodotto, vedi paragrafo sulle Caratteristiche delle prestazioni). I risultati come Ct delle reazioni di amplificazione di ciascun campione sono utilizzati come descritto nella tabella seguente: M. pneumoniae (FAM MYCO.PN. ) Ct Non determinato Ct Determinato Reazione del campione Controllo Interno (VIC CI ) Ct > 35 o Ct Non determinato Idoneità del campione Risultato del saggio DNA di M. pneumoniae non idoneo non valido - Ct 35 idoneo valido, negativo NON RIVELATO Ct > 35 o Ct Non determinato idoneo* valido, positivo PRESENTE Ct 35 idoneo valido, positivo PRESENTE Calcolo dei limiti di rivelazione Il limite di rivelazione, quando si utilizza una particolare metodica di estrazione e riferito ad una particolare unità di misura, può essere calcolato a partire dal limite di rivelazione del prodotto secondo questa formula: Ve x 3 geq Limite di rivelazione (geq / estrazione) = Va x Ee Ee è l'efficienza dell estrazione, per esempio con il prodotto «EXTRAcell» il parametro Ee è uguale a 1,0 (efficienza pari a circa il 100%). Ve è il volume totale del prodotto di estrazione, per esempio con il prodotto «EXTRAcell» il parametro Ve è uguale a 100 µl. Va è il volume del prodotto di estrazione usato nella reazione di amplificazione: con questo prodotto il parametro Va è uguale a 5 µl. Quando si utilizzano i kit di estrazione della ELITechGroup S.p.A. il limite è: Kit di estrazione «EXTRAcell» Formula semplificata Limite di rivelazione = 60 geq / estrazione Se il risultato della reazione di amplificazione di un campione è Ct Non determinato per la sonda specifica di M. pneumoniae e Ct > 35 o Ct Non determinato per la sonda specifica per il Controllo Interno, non è stato possibile rivelare in modo efficiente il DNA del Controllo Interno. In questo caso si sono verificati problemi nella fase di amplificazione (amplificazione non efficiente o nulla) o nella fase di estrazione (perdita del DNA, presenza di inibitori, DNA del campione degradato o campione di partenza con un numero di cellule insufficiente) che possono causare risultati errati e falsi negativi. Il campione non è idoneo, il saggio non è valido e deve essere ripetuto a partire dall estrazione di un nuovo campione. Se il risultato della reazione di amplificazione di un campione è Ct Non determinato per la sonda specifica di M. pneumoniae e Ct 35 per la sonda specifica per il Controllo Interno, il DNA di M. pneumoniae non è stato rivelato nel DNA estratto dal campione ma non si può escludere che sia presente ad un titolo inferiore al limite di rivelazione del prodotto (vedi paragrafo sulle Caratteristiche delle prestazioni). In questo caso il risultato sarebbe un falso negativo. I risultati ottenuti con questo saggio devono essere interpretati considerando tutti i dati clinici e gli altri esami di laboratorio relativi al paziente. *Nota bene: Quando nella reazione di amplificazione relativa ad un campione è stata rivelata la presenza di DNA di M. pneumoniae, l'amplificazione del Controllo Interno può dare come risultato un Ct > 35 o Ct Non determinato. Infatti la reazione di amplificazione a bassa efficienza del Controllo Interno può essere annullata dalla competizione con la reazione di amplificazione ad alta efficienza di M. pneumoniae. In questo caso il campione è comunque idoneo e il risultato positivo del saggio è valido. SCH mrts094m 02/02/16 Revisione 04 Pag. 9/17 SCH mrts094m 02/02/16 Revisione 04 Pag. 10/17

8 LIMITI DELLA PROCEDURA CARATTERISTICHE DELLE PRESTAZIONI Utilizzare con questo prodotto soltanto il DNA estratto dai seguenti campioni umani: lavaggi broncoalveolari (BAL), bronco-tracheo aspirati (BA). Non utilizzare con questo prodotto DNA estratto contaminato da emoglobina o mucoproteine: emoglobina e mucoproteine inibiscono la reazione di amplificazione degli acidi nucleici e possono causare risultati non validi. Non sono disponibili dati riguardo eventuali fenomeni di inibizione da parte di farmaci antivirali, antibiotici, chemioterapici o immunosopressori. I risultati ottenuti con questo prodotto dipendono dalla corretta raccolta, trasporto, conservazione e preparazione dei campioni; per evitare risultati errati è quindi necessario porre particolare cura durante queste fasi e seguire attentamente le istruzioni fornite con i prodotti per l'estrazione degli acidi nucleici. La metodica di amplificazione real time degli acidi nucleici utilizzata in questo prodotto, a causa della sua elevata sensibilità analitica, è soggetta a contaminazione da parte di campioni clinici positivi per M. pneumoniae, dei controlli positivi e degli stessi prodotti della reazione di amplificazione. Le contaminazioni portano a risultati falsi positivi. Le modalità di realizzazione del prodotto sono in grado di limitare le contaminazioni; tuttavia questi fenomeni possono essere evitati solo con una buona pratica delle tecniche di laboratorio e seguendo attentamente le istruzioni fornite in questo manuale. Questo prodotto richiede personale addestrato alla manipolazione di campioni biologici in grado di trasmettere agenti infettivi e di preparati chimici classificati pericolosi per evitare incidenti con conseguenze potenzialmente gravi per l'utilizzatore o altre persone. Questo prodotto richiede indumenti di lavoro e aree di lavoro adeguate alla manipolazione di campioni biologici in grado di trasmettere agenti infettivi e di preparati chimici classificati pericolosi per evitare incidenti con conseguenze potenzialmente gravi per l'utilizzatore o altre persone. Questo prodotto richiede personale addestrato per le procedure di biologia molecolare, come l'estrazione, l'amplificazione e la rivelazione di acidi nucleici per evitare risultati errati. Questo prodotto richiede aree separate per l'estrazione / allestimento delle reazioni di amplificazione e per l'amplificazione / rivelazione dei prodotti di amplificazione per evitare risultati falsi positivi. Questo prodotto richiede indumenti di lavoro e strumenti dedicati per l'estrazione / allestimento delle reazioni di amplificazione e per l'amplificazione / rivelazione dei prodotti di amplificazione per evitare risultati falsi positivi. Un risultato negativo ottenuto con questo prodotto indica che il DNA di M. pneumoniae non è stato rivelato nel DNA estratto dal campione ma non si può escludere che il DNA di M. pneumoniae sia presente ad un titolo inferiore al limite di rivelazione del prodotto (vedi paragrafo sulle Caratteristiche delle prestazioni); in questo caso il risultato sarebbe un falso negativo. Come per qualunque altro dispositivo diagnostico, i risultati ottenuti con questo prodotto devono essere interpretati considerando tutti i dati clinici e gli altri esami di laboratorio relativi al paziente. Come per qualunque altro dispositivo diagnostico, esiste un rischio residuo di ottenere risultati non validi, falsi positivi e falsi negativi con questo prodotto. Questo rischio residuo non può essere eliminato o ridotto ulteriormente. Questo rischio residuo in situazioni particolari, come le diagnosi di urgenza, può contribuire a decisioni errate con conseguenze potenzialmente gravi per il paziente. Sensibilità analitica: limite di rivelazione La sensibilità analitica di questo saggio permette di identificare la presenza di circa 10 molecole di DNA bersaglio nei 5 µl di DNA estratto aggiunti alla reazione di amplificazione. La sensibilità analitica del saggio, come limite di rivelazione, è stata testata utilizzando un DNA plasmidico contenente il prodotto di amplificazione la cui concentrazione iniziale è stata misurata spettrofotometricamente. Il DNA plasmidico è stato diluito ad un titolo di 10 copie / 5 µl in DNA genomico umano ad un titolo di 500 ng / 5 µl. Questo campione è stato impiegato in 50 replicati per eseguire l'amplificazione con i prodotti ELITechGroup S.p.A. (vedi paragrafo sui prodotti accessori). I risultati finali sono riassunti nella tabella seguente. Campioni N positivi negativi 10 copie DNA plasmidico ng di DNA genomico umano Sensibilità diagnostica: efficienza di rivelazione su diversi genotipi / sottotipi La sensibilità diagnostica del saggio, come efficienza di rivelazione su diversi genotipi / sottotipi, è stata valutata per confronto di sequenze con banche dati nucleotidiche. L'esame delle regioni scelte per l'ibridazione degli oligonucleotidi di innesco AmpliMIX e della sonda fluorescente AmpliPROBE sull'allineamento delle sequenze disponibili in banca dati del gene codificante la citoadesina P1 di M. pneumoniae ha dimostrato la loro conservazione e l'assenza di mutazioni significative. La sensibilità diagnostica del saggio, come efficienza di rivelazione su diversi genotipi / sottotipi è stata valutata eseguendo l'analisi su campioni positivi per M. pneumoniae. La sensibilità diagnostica del saggio è stata valutata utilizzando come materiale di riferimento campioni certificati positivi per il DNA di M. pneumoniae, ceppo FH, ATCC (Vircell SL, Spagna), di M. pneumoniae, NCTC (Minerva Biolabs GmbH, Germania) e di M. pneumoniae da un campione clinico. Ciascun campione è stato impiegato per eseguire l'amplificazione con i prodotti ELITechGroup S.p.A.. I risultati sono riportati nella tabella seguente. Campioni N positivi negativi M. pneumoniae ceppo FH M. pneumoniae NCTC M. pneumoniae da campione clinico Specificità analitica: marcatori potenzialmente interferenti La specificità analitica del saggio, come assenza di crossreattività con altri marcatori potenzialmente interferenti, è stata valutata per confronto di sequenze con banche dati nucleotidiche. L'esame dell'allineamento delle sequenze degli oligonucleotidi di innesco delle AmpliMIX e delle sonde fluorescenti AmpliPROBE con le sequenze disponibili in banca dati di organismi diversi da M. pneumoniae, tra cui quelle dei genomi completi di Chlamydophila pneumoniae e Legionella pneumophila, ha dimostrato la loro specificità e l'assenza di omologie significative. SCH mrts094m 02/02/16 Revisione 04 Pag. 11/17 SCH mrts094m 02/02/16 Revisione 04 Pag. 12/17

9 La specificità analitica del saggio, come assenza di crossreattività con altri marcatori potenzialmente interferenti, è stata verificata eseguendo l'analisi su campioni positivi per il DNA di Chlamydophila pneumoniae, Legionella pneumophila e Mycoplasma hominis. La specificità analitica del saggio è stata valutata utilizzando come materiale di riferimento campioni certificati positivi ad alto titolo per il DNA di Chlamydophila pneumoniae, ceppo CM-1, ATCC VR-1360 (Vircell SL, Spagna) e per il DNA di Legionella pneumophila, sierogruppo 1, ATCC (Minerva Biolabs GmbH, Germania). Questi microrganismi causano infezioni respiratorie e si trovano frequentemente negli stessi campioni clinici. Ciascun campione è stato impiegato per eseguire l'intera procedura di analisi, estrazione e amplificazione, con i prodotti ELITechGroup S.p.A. I risultati sono riportati nella tabella seguente. Campioni N positivi negativi Chlamydophila pneumoniae Legionella pneumophila La specificità analitica del saggio è stata valutata utilizzando come materiale di riferimento campioni clinici certificati positivi per il DNA di Mycoplasma hominis. Ciascun campione è stato impiegato per eseguire l'intera procedura di analisi, estrazione e amplificazione, con i prodotti ELITechGroup S.p.A.. I risultati sono riportati nella tabella seguente. Campioni N positivi negativi Campioni positivi per il DNA di M. hominis Specificità diagnostica: campioni negativi La specificità diagnostica del saggio, come conferma di campioni clinici negativi, è stata verificata eseguendo l'analisi di un pannello di campioni cellulari negativi per il DNA di M. pneumoniae ed è risultata uguale al 96,1%. La specificità diagnostica è stata valutata utilizzando come materiale di riferimento un pannello di campioni clinici di BAL e BA negativi per il DNA di M. pneumoniae testati con una metodica di amplificazione nested. Ciascun campione del pannello è stato impiegato per eseguire l'intera procedura di analisi, estrazione e amplificazione, con i prodotti ELITechGroup S.p.A.. I risultati sono riportati nella tabella seguente. Campioni N positivi negativi Campioni negativi per il DNA di M. pneumoniae Robustezza: effetto della matrice del Positive Control La robustezza del saggio, come effetto della matrice che porta a risultati falsi negativi, è stata verificata eseguendo l'analisi di un pannello di estratti da campioni clinici resi positivi per il DNA di M. pneumoniae ad un titolo vicino al limite di rivelazione. L'effetto della matrice del campione è stato valutato utilizzando come materiale di riferimento campioni di DNA estratto da BAL e BA negativi per il DNA di M. pneumoniae (testati con una metodica di amplificazione nested) e positivizzati con il DNA plasmidico diluito ad un titolo di 30 copie / 5 µl (3 volte il limite di rivelazione). Questi campioni sono stati impiegati per eseguire l'amplificazione con i prodotti ELITechGroup S.p.A. I risultati sono riportati nella tabella seguente. Campioni N positivi negativi Estratti positivizzati per il DNA di M. pneumoniae Nota bene: I dati e i risultati completi delle prove eseguite per la valutazione delle caratteristiche delle prestazioni del prodotto sono registrati nella Sezione 7 del Fascicolo Tecnico di Prodotto "MYCOPLASMA pn. Q - PCR Alert AmpliMIX, FTP RTS094. BIBLIOGRAFIA B. de Barbeyrac et al. (1993) Clin Inf Dis 17: S83 - S89 Due campioni hanno dato un risultato positivo discordante con i prodotti ELITechGroup S.p.A. Questi campioni sono stati ritestati ed hanno dato un risultato negativo. I campioni sono stati valutati a livello quantitativo e hanno dimostrato un titolo inferiore a 10 geq / reazione che è al di sotto del limite di rivelazione del prodotto e del sistema di amplificazione nested utilizzato per testare i campioni. A titoli così bassi i campioni possono produrre risultati positivi in modo casuale. Tre campioni hanno dato un risultato non valido. SCH mrts094m 02/02/16 Revisione 04 Pag. 13/17 SCH mrts094m 02/02/16 Revisione 04 Pag. 14/17

10 PROBLEMI E SOLUZIONI LEGENDA DEI SIMBOLI DNA bersaglio non rivelato nella reazione del Positive Control Possibili cause Errore nella preparazione della miscela di reazione. Errore nella dispensazione nella micropiastra. Soluzioni Controllare i volumi di reagenti dispensati durante la preparazione della miscela di reazione. Dispensare con cura le reazioni nella micropiastra seguendo il piano di lavoro. Controllare i volumi di miscela di reazione dispensati. Controllare il volume di controllo positivo dispensato. Numero di catalogo. Limite superiore di temperatura. Codice del lotto. Degradazione della sonda. Degradazione del controllo positivo Utilizzare una nuova aliquota di sonda. Utilizzare una nuova aliquota di controllo positivo. Da utilizzare prima del (ultimo giorno del mese). Errore nell impostazione dello strumento. DNA bersaglio rivelato nella reazione di Controllo negativo Controllare la posizione impostata sullo strumento delle reazioni del controllo positivo. Controllare il ciclo termico impostato sullo strumento. Dispositivo medico diagnostico in vitro. Conforme ai requisiti della Direttiva Europea 98\79\CE relativa ai dispositivi medici diagnostici in vitro. Possibili cause Errore nella dispensazione nella micropiastra. Soluzioni Evitare di spargere il contenuto delle provette dei campioni. Cambiare sempre puntale tra un campione e l altro. Dispensare con cura campioni, controllo negativo e controllo positivo nella micropiastra seguendo il piano di lavoro. CONT Contenuto sufficiente per "N" test. Contenuto. Errore durante l impostazione dello strumento. Controllare la posizione di campioni, controllo negativo, e controllo positivo impostata sullo strumento. Attenzione, consultare le istruzioni per l uso. Micropiastra sigillata male. Sigillare con attenzione la micropiastra. Contaminazione dell'acqua pura per biologia molecolare. Utilizzare una nuova aliquota di acqua. Fabbricante. Contaminazione della mix di amplificazione. Utilizzare una nuova aliquota di mix di amplificazione. Contaminazione dell'area per l'estrazione / allestimento delle reazioni di amplificazione. Presenza di fluorescenza di fondo elevata nelle reazioni Pulire superfici e strumenti con detergenti acquosi, lavare camici, sostituire provette e puntali in uso. Possibili cause Errore nella impostazione della "baseline". Soluzioni Impostare l'intervallo di calcolo della "baseline" in un ambito di cicli in cui la fluorescenza di fondo sia già stabilizzata (controllare le registrazioni "component") e la fluorescenza del segnale non abbia ancora cominciato a crescere, per esempio dal ciclo 9 al ciclo 15. L'acquisto di questo prodotto permette all'acquirente di utilizzarlo per l'amplificazione e la rivelazione di sequenze di acidi nucleici al fine di fornire servizi di diagnostica umana in vitro. Questo diritto è conferito solo se il prodotto fornito è utilizzato insieme ai prodotti licenziati "Positive Control" della ELITechGroup S.p.A.. Nessun diritto generale o altra licenza di alcun tipo diversa da questo specifico diritto d'uso è conferito per mezzo dell'acquisto. SCH mrts094m 02/02/16 Revisione 04 Pag. 15/17 SCH mrts094m 02/02/16 Revisione 04 Pag. 16/17

11 PIANO DI LAVORO A B C D E F G H SCH m 02/02/16 Revisione 04 Pag. 17/17

12 Q - PCR Alert AmpliMASTER reagenti ottimizzati per l'amplificazione real time RTS000 Q - PCR Alert AmpliMASTER reagenti ottimizzati per l'amplificazione real time RTS000 SOMMARIO USO PREVISTO pag. 1 DESCRIZIONE DEL PRODOTTO pag. 1 MATERIALE INCLUSO NEL PRODOTTO pag. 2 MATERIALE RICHIESTO NON INCLUSO NEL PRODOTTO pag. 2 ALTRI PRODOTTI RICHIESTI pag. 2 AVVERTENZE E PRECAUZIONI pag. 3 PROCEDURA pag. 4 LEGENDA DEI SIMBOLI pag. 4 USO PREVISTO ELITechGroup S.p.A. C.so Svizzera, Torino ITALY Uffici: Tel Fax E. mail: emd.support@elitechgroup.com sito WEB: +2 C +8 C Il prodotto «Q - PCR Alert AmpliMASTER» è parte di saggi quantitativi di amplificazione degli acidi nucleici per la ricerca e il dosaggio di un DNA bersaglio con la metodica dell'amplificazione real time in campioni di DNA estratto o di cdna ottenuto per trascrizione inversa da RNA estratto e per la determinazione allelica con la metodica dell'amplificazione real time in campioni di DNA estratto. Il prodotto è un accessorio dei prodotti della serie «Q - PCR Alert AmpliMIX», «Q - PCR Standard» e «Positive Control» dell ELITechGroup S.p.A. Il prodotto trova impiego nell'allestimento di saggi diagnostici basati sulla metodica dell'amplificazione real time. Prodotto formato intero codice RTS000 MATERIALE INCLUSO NEL PRODOTTO Componente Descrizione Quantità Composizione Etichettatura AmpliMASTER miscela di reagenti ottimizzati 4 x 340 µl TRIS base, TRIS cloridrato, Glicerolo, Cloruro di magnesio, Desossiribonucleotidi trifosfati, ROX, Uracil-N-glicosidasi, Taq DNA polimerasi MATERIALE RICHIESTO NON INCLUSO NEL PRODOTTO - Cappa a flusso laminare. - Guanti monouso senza polvere in nitrile o simili. - Miscelatore vortex. - Microcentrifuga da banco ( RPM). - Micropipette e puntali sterili con filtro per aerosol o a dispensazione positiva (0,5-10 µl, 2-20 µl, 5-50 µl, µl, µl). - Acqua per biologia molecolare. - Termostato programmabile con sistema ottico di rilevamento della fluorescenza (thermal cycler per real time). ALTRI PRODOTTI RICHIESTI I reagenti di innesco (oligonucleotidi), i reagenti di rivelazione (sonde fluorescenti), i DNA standard a quantità nota e i controlli positivi di DNA plasmidico non sono inclusi in questo prodotto. Per eseguire queste fasi analitiche è richiesto l impiego dei seguenti prodotti accessori dell ELITechGroup S.p.A.: serie «Q - PCR Alert AmpliMIX», oligonucleotidi di innesco per l'amplificazione real time e sonde fluorescenti per l'amplificazione real time. serie «Q - PCR Standard», DNA plasmidico a quantità nota per ottenere la curva standard. serie «Positive Control», controllo positivo di DNA plasmidico. Nel caso sia previsto l'uso di uno strumento 7300 Real-Time PCR System, è necessario l'impiego del prodotto generico «Q - PCR Microplates» (ELITechGroup S.p.A., codice RTSACC01) micropiastre con pozzetti da 0,2 ml e fogli adesivi per l'amplificazione real time. Nel caso sia previsto l'uso di uno strumento 7500 Fast Dx Real-Time PCR Instrument, è necessario l'impiego del prodotto generico «Q - PCR Microplates Fast» (ELITechGroup S.p.A., codice RTSACC02) micropiastre con pozzetti da 0,1 ml e fogli adesivi per l'amplificazione real time. - DESCRIZIONE DEL PRODOTTO Il prodotto nel formato intero (codice RTS000) fornisce la miscela di reagenti ottimizzati per l'amplificazione real time AmpliMASTER, in una soluzione stabilizzante aliquotata in quattro provette e pronta all'uso. La miscela di reagenti fornisce il sistema tampone, il magnesio cloruro, i nucleotidi trifosfati, il fluoroforo ROX di riferimento passivo per la normalizzazione della fluorescenza, l'enzima Uracil-N-glicosidasi (UNG) per l'inattivazione delle contaminazioni da prodotto di amplificazione, l'enzima Taq DNA polimerasi ad attivazione termica (hot start). Nota bene: le Micropiastre per amplificazione non devono essere utilizzate con gli strumenti Applied Biosystems della serie 7000 che montano il blocco termico "FAST". Il prodotto nel formato intero (codice RTS000) consente di effettuare 96 determinazioni, standard e controlli compresi. SCH mrts000 03/03/16 Revisione 06 Pag. 1/4 SCH mrts000 03/03/16 Revisione 06 Pag. 2/4

13 Q - PCR Alert AmpliMASTER reagenti ottimizzati per l'amplificazione real time RTS000 Q - PCR Alert AmpliMASTER reagenti ottimizzati per l'amplificazione real time RTS000 AVVERTENZE E PRECAUZIONI PROCEDURA Questo prodotto è riservato esclusivamente all'uso in vitro. Avvertenze e precauzioni generali Manipolare e smaltire tutti i campioni biologici come se fossero in grado di trasmettere agenti infettivi. Evitare il contatto diretto con i campioni biologici. Evitare di produrre schizzi o aerosol. Il materiale che viene a contatto con i campioni biologici deve essere trattato con ipoclorito di sodio al 3% per almeno 30 minuti oppure trattato in autoclave a 121 C per un'ora prima di essere smaltito. Manipolare e smaltire tutti i reagenti e tutti i materiali usati per effettuare il saggio come se fossero potenzialmente infettivi. Evitare il contatto diretto con i reagenti. Evitare di produrre schizzi o aerosol. I rifiuti devono essere trattati e smaltiti secondo le opportune regole di sicurezza. Il materiale monouso combustibile deve essere incenerito. I rifiuti liquidi contenenti acidi o basi devono essere neutralizzati prima dell'eliminazione. Indossare indumenti protettivi e guanti adatti e proteggersi gli occhi / la faccia. Non pipettare a bocca alcuna soluzione. Non mangiare, bere, fumare o applicare cosmetici nelle aree di lavoro. Lavarsi bene le mani dopo avere maneggiato i campioni e i reagenti. Eliminare i reagenti avanzati ed i rifiuti secondo le norme vigenti. Leggere tutte le istruzioni fornite nel prodotto prima di eseguire il saggio. Attenersi alle istruzioni fornite nel prodotto durante l'esecuzione del saggio. Rispettare la data di scadenza del prodotto. Utilizzare solo i reagenti presenti nel prodotto e quelli consigliati dal produttore. Non scambiare reagenti provenienti da lotti diversi. Non utilizzare reagenti provenienti da prodotti di altri produttori. Avvertenze e precauzioni per la biologia molecolare Le procedure di biologia molecolare, come l'estrazione, la trascrizione inversa, l'amplificazione e la rivelazione di acidi nucleici, richiedono personale addestrato per evitare il rischio di risultati errati, in particolare a causa della degradazione degli acidi nucleici dei campioni o della contaminazione dei campioni da parte di prodotti di amplificazione. E' necessario disporre di aree separate per l'estrazione / allestimento delle reazioni di amplificazione e per l'amplificazione / rivelazione dei prodotti di amplificazione. Mai introdurre un prodotto di amplificazione nell'area per l'estrazione / allestimento delle reazioni di amplificazione. E' necessario disporre di camici, guanti e strumenti dedicati per l'estrazione / allestimento delle reazioni di amplificazione e per l'amplificazione / rivelazione dei prodotti di amplificazione. Mai trasferire camici, guanti e strumenti dall'area per l'amplificazione / rivelazione dei prodotti di amplificazione all'area per l'estrazione / allestimento delle reazioni di amplificazione. I campioni devono essere dedicati esclusivamente a questo tipo di analisi. I campioni devono essere manipolati sotto una cappa a flusso laminare. Provette contenenti campioni diversi non devono mai essere aperte contemporaneamente. Le pipette utilizzate per manipolare i campioni devono essere dedicate solo a questo uso. Le pipette devono essere del tipo a dispensazione positiva o utilizzare puntali con filtro per aerosol. I puntali utilizzati devono essere sterili, esenti da DNasi ed RNasi, esenti da DNA ed RNA. I reagenti devono essere manipolati sotto una cappa a flusso laminare. I reagenti necessari per l'amplificazione devono essere preparati in modo da essere utilizzati in una singola sessione. Le pipette utilizzate per manipolare i reagenti devono essere dedicate solo a questo uso. Le pipette devono essere del tipo a dispensazione positiva o utilizzare puntali con filtro per gli aerosol. I puntali utilizzati devono essere sterili, esenti da DNasi ed RNasi, esenti da DNA ed RNA. I prodotti di amplificazione devono essere manipolati in modo da limitarne al massimo la dispersione nell'ambiente per evitare la possibilità di contaminazioni. Le pipette utilizzate per manipolare i prodotti di amplificazione devono essere dedicate solo a questo uso. Il prodotto «Q - PCR Alert AmpliMASTER» deve essere utilizzato con i prodotti della serie «Q - PCR Alert AmpliMIX» per ottenere la miscela di reazione. L'AmpliMASTER è pronta all'uso, pertanto deve essere utilizzata direttamente nella preparazione della miscela di reazione. La procedura completa, che prevede l'allestimento e l'esecuzione di una reazione di amplificazione real time in micropiastra con un termostato programmabile con sistema ottico di rilevamento della fluorescenza (thermal cycler per real time), è descritta in modo dettagliato nel manuale di istruzioni per l'uso allegato ai prodotti della serie «Q - PCR Alert AmpliMIX». Le caratteristiche delle prestazioni e i limiti della procedura dei saggi completi di ricerca e dosaggio del DNA bersaglio sono descritte in modo dettagliato nei manuali di istruzioni per l'uso allegati ai prodotti della serie «Q - PCR Alert AmpliMIX». CONT Numero di catalogo. Limiti di temperatura. Codice del lotto. LEGENDA DEI SIMBOLI Da utilizzare prima del (ultimo giorno del mese). Dispositivo medico diagnostico in vitro. Conforme ai requisiti della Direttiva Europea 98\79\CE relativa ai dispositivi medici diagnostici in vitro. Contenuto sufficiente per "N" test. Contenuto. Attenzione, consultare le istruzioni per l uso. Fabbricante. L'acquisto di questo prodotto permette all'acquirente di utilizzarlo per l'amplificazione e la rivelazione di sequenze di acidi nucleici al fine di fornire servizi di diagnostica umana in vitro. Questo diritto è conferito solo se il prodotto fornito è utilizzato insieme ai prodotti licenziati "Positive Control" o Q - PCR Standard dell ELITechGroup S.p.A. Nessun diritto generale o altra licenza di alcun tipo diversa da questo specifico diritto d'uso è conferito per mezzo dell'acquisto. SCH mrts000 03/03/16 Revisione 06 Pag. 3/4 SCH mrts000 03/03/16 Revisione 06 Pag. 4/4