Tissue transglutaminase (ttg) levels paralleles intraepithelial lymphocytes (IELs) in patients suitable with gluten related seronegative problems: preliminary report Università degli studi di Bari DETO Buffelli F., Ierardi E., Losurdo G., Di Leo A., Giorgio F., Amoruso A., Montenegro L., Piscitelli D., Fiore M.G., Resta L.
Celiachia Enteropatia cronica causata da ingestione di glutine, termine con cui si intendono una serie di peptidi (gliadine e prolamine) contenuti in frumento, orzo e segale Caratterizzata da atrofia dei villi della mucosa del tenue, infiltrato infiammatorio e malassorbimento
Celiachia sieronegativa Negatività anticorpi IgA antitransglutaminasi Positività dell esame istologico su biopsia duodenale, con infiltrato infiammatorio di linfociti intraepiteliali CD3+(25 per 100 enterociti), atrofia anche lieve dei villi o brush border disuniforme Aplotipo DQ2 o DQ8, (tale criterio non è costante).
Transglutaminasi In uno studio del 2008 su 18 casi di soggetti sieronegativi per anti-ttg2 con aumentato infiltrato di IEL γδ, 12 (66%) presentavano depositi sottoepiteliali di transglutaminasi IgA (Troncone, J Pediatr Gastroenterology Nutr, 2008) Un gruppo italiano, infine, ha misurato l mrna codificante la ttg in un gruppo di soggetti con celiachia conclamata (e non con MCS) su biopsia duodenale a fresco, valutando che i livelli erano aumentati del 100% rispetto ai controlli negativi (Esposito C et al, Am J Gastroenterol, 2003).
Scopo dello studio Scopo dello studio sarà indagare la transglutaminasi come possibile marker associato alle celiachie sieronegative, attraverso la determinazione del corrispondente mrna su tessuto paraffinato Un eventuale iperespressione del parametro analizzato rispetto ad un gruppo di controllo di soggetti con mucosa sana, potrebbe rivelarsi un indagine diagnostica specifica, utilizzabile anche per soggetti già sottoposti a dieta senza glutine, permettendo di evitare le pratiche di challenge per la conferma diagnostica
Criteri d inclusione Sintomatologia dispeptica o diarroica; Segni clinici di malassorbimento; Negatività degli anticorpi IgA antitransglutaminasi; Patologie autoimmuni e non associate alla celiachia.
Criteri d esclusione Malattia di Crohn o Rettocolite ulcerosa; Infezione da Helicobacter pylori; Deficit congeniti del sistema immunitario (l unico immunodeficit ammesso è stato il deficit selettivo di IgA, poiché spesso associato alla MC); Gastroenterite infettiva; Infestazione da Giardia Lamblia. L adozione di tali criteri di esclusione ha permesso di eliminare alcuni fattori confondenti, poiché causa di duodenite aspecifica o infiltrato infiammatorio di IEL. Inoltre le condizioni sopra elencate potevano essere fonte di un aumento dei livelli di transglutaminasi, poiché tale enzima è coinvolto nei meccanismi di riparazione tissutale in corso di flogosi indipendentemente dalla causa della stessa (Elli L et al, Dig Liv Dis, 2009).
Materiali e metodi (1) 20 pazienti reclutati (16 F, 4 M). Al fine di valutare quantitativamente l infiltrato di IEL, su ciascun campione istologico è stata eseguita la reazione immunoistochimica per CD3 e CD8. I soggetti sono poi stati suddivisi in tre gruppi a seconda della conta degli IELs: IELs inferiori a 15 per 100 enterociti; IELs compresi tra 15 e 25 per 100 enterociti; IELs superiori a 25 per cento enterociti.
cd 3 inferiore a 10 IEL cd 3 15-25 IEL cd 3 maggiore di 25 IEL
Materiali e metodi (2) Per confrontare i valori ottenuti grazie alla biologia molecolare, sono stati recuperati anche campioni paraffinati di II duodeno di soggetti sani (7 controlli negativi) e di soggetti con diagnosi certa di celiachia (10 controlli positivi). Il materiale bioptico incluso in paraffina è stato tagliato in 10 fettine di 10 µm e l mrna codificante per ttg estratto e quantificato tramite RT-PCR (real time polymerase chain reaction) mediante tecnica già descritta in letteratura (Ierardi E et al, Scand J Gastroenterol, 2010).
Materiali e metodi (3) L analisi statistica è stata condotta con l analisi della varianza ANOVA e con il test di Bonferroni per i confronti multipli
Risultati (1) Considerando pari a 1 il valore dei controlli negativi, questi sono i valori calcolati di media e deviazione standard per ciascun gruppo IEL < 15 IEL 15-25 IEL > 25 Controlli positivi Media 1,99 5,06 6,9 9,8 Errore standard 0,2 1,50 2,5 0,8
Risultati (2) L analisi statistica evidenziava le seguenti differenze significative Controlli negativi = < IEL < 15 IEL 15-25 IEL > 25 < = Controlli positivi
Conclusioni I risultati suggeriscono che la ttg è aumentata sia nelle celiachie sieropositive sia in quelle sieronegative, con una buona correlazione con la conta degli IEL È stato evidenziato un aumento della ttg nel gruppo IEL 15-25, che potrebbe indicare l esistenza di una zona grigia per le celiachie sieronegative.