ISTRUZIONI PER L USO

Prodotti per immunodiagnostica VITROS Confezione di reagente 25-OH Vitamina D totale Prodotti per immunodiagnostica VITROS Calibratori 25-OH Vitamina D totale 684 2894 684 2893 Impiego previsto Solo per uso diagnostico in vitro. Prodotti per immunodiagnostica VITROS - Confezione di reagente 25-OH Vitamina D totale Per la determinazione quantitativa di 25-OH vitamina D totale nel siero e nel plasma umani (eparina e EDTA) utilizzando i Sistemi per immunodiagnostica ECi/ECiQ VITROS, il Sistema per immunodiagnostica 3600 VITROS e il Sistema integrato 5600 VITROS. I risultati del test 25-OH Vitamina D totale VITROS vengono utilizzati nella valutazione della sufficienza di vitamina D. I risultati del test possono essere usati insieme ad altri dati clinici o di laboratorio per aiutare il medico nella gestione del paziente. Prodotti per immunodiagnostica VITROS - Calibratori 25-OH Vitamina D totale Da usare nella calibrazione dei Sistemi per immunodiagnostica VITROS ECi/ECiQ, del Sistema per immunodiagnostica VITROS 3600 e del Sistema integrato VITROS 5600, per la determinazione quantitativa di 25-OH vitamina D totale nel siero e nel plasma umani (EDTA e eparina). Spiegazione in breve La vitamina D è un ormone steroideo solubile nel grasso che si trova in due forme vitamina D2 (ergocalciferolo) e vitamina D3 (colecalciferolo). La vitamina D viene sintetizzata dal colesterolo quando la pelle viene esposta alla luce solare UVB o tramite la dieta. La vitamina D viene idrossilata nel fegato per formare 25-OH vitamina D che viene ulteriormente idrossilata nei reni per formare la forma biologicamente attiva, vitamina D 1,25-(OH)2. L'ormone attivo viene strettamente regolato dai livelli di ormone paratiroideo del plasma e dai livelli di calcio e fosforo nel siero. La forma attiva, 1,25-(OH)2 vitamina D, aumenta l'assorbimento intestinale di calcio e fosforo, entrambi necessari per regolare il metabolismo delle ossa. I metaboliti della vitamina D sono legati a una proteina legante della vitamina D e circolano in tutto il corpo. La concentrazione di vitamina D 1,25-(OH)2 è di 1000 volte inferiore rispetto alla 25-OH vitamina D e ha un'emivita di 4 ore. A causa della sua emivita di 2 3 settimane, la 25-OH vitamina D è il metabolita che è l'indicatore clinico più affidabile dello stato della vitamina D. 1 Inoltre, i livelli di 25-OH vitamina D sono indicativi dei livelli di immagazzinamento di vitamina D nel corpo e sono correlati ai sintomi clinici di deficienza di vitamina D. Alla fine del 18 secolo, la vitamina D è stata riconosciuta per la prima volta come un componente essenziale nella dieta per la prevenzione del rachitismo. Recentemente, la ricerca ha indicato che la deficienza di vitamina D può essere collegata a patologie croniche come il cancro (mammella, colon e prostata), a patologie cardiovascolari, osteoporosi, osteomalacia e varie patologie autoimmuni. 2 Principi della procedura Il test 25-OH Vitamina D totale VITROS viene eseguito usando la confezione di reagenti 25-OH Vitamina D totale VITROS e i Calibratori 25-OH Vitamina D totale VITROS sui sistemi per immunodiagnostica VITROS ECi/ECiQ, il Sistema per immunodiagnostica VITROS 3600 e il Sistema integrato VITROS 5600 mediante la tecnologia Intellicheck. Viene utilizzata una tecnica per immunodosaggi competitiva che implica il rilascio di 25-OH vitamina D nel campione dalla proteina legante usando un denaturante a ph basso e la successiva competizione della 25-OH vitamina D libera con il reagente 25-OH vitamina D marcata con perossidasi da rafano (HRP) per l'anti-vitamina D monoclonale legata ai pozzetti. Si procede, quindi, a un lavaggio per rimuovere i materiali non legati. Il coniugato di HRP legato viene misurato mediante una reazione luminescente. 3 Ai pozzetti vengono aggiunti reagente contenente substrati luminogenici (derivato del luminol e sale peracido) ed agente di trasferimento degli elettroni. La perossidasi di rafano nel coniugato legato catalizza l'ossidazione del derivato del luminol, dando origine a produzione di luce. L'agente di trasferimento degli elettroni (un'acetanilide sostituita) provoca un aumento del livello di luce prodotta e ne prolunga l'emissione. I segnali luminosi vengono letti dal sistema. Il quantitativo di coniugato con HRP legato è indirettamente proporzionale alla concentrazione di 25-OH vitamina D presente. Versione 2.0 Pubb. n. GEM1360_WW_IT 1 di 13

ISTRUZIONI PER L USO Avvertenze e precauzioni Tipo di test Sistema * Tempo di incubazione Dosaggio immunometrico competitivo ECi/ECiQ, 3600, 5600 * Non tutti i prodotti e i sistemi sono disponibili in tutti i Paesi. Tempo per il 1 risultato Temperatura test Volume del campione di reazione 16 minuti 24 minuti 37 C 60 μl Schema della reazione Avvertenze e precauzioni AVVERTENZA: Materiale potenzialmente infettivo Gli emoderivati forniti come parte dei calibratori 25-OH Vitamina D totale VITROS provengono da donatori umani testati individualmente con metodi approvati dalla FDA (immunodosaggio enzimatico) e risultati negativi per l antigene di superficie dell epatite B, per gli anticorpi del virus dell immunodeficienza umana (HIV 1 + 2) e del virus dell epatite C (HCV). Trattare come materiale infettivo. Il trattamento di materiali di origine umana richiede particolare attenzione. Considerare tutti i campioni come potenziale fonte di infezione. Nessun metodo sperimentale può garantire con assoluta certezza l'assenza del virus dell'epatite di tipo B, HCV, dell'hiv 1+2 o di altri agenti infettivi. I rifiuti solidi e liquidi provenienti da campioni e componenti del test devono essere manipolati, utilizzati, conservati ed eliminati in conformità alle procedure previste dalle direttive e normative nazionali in materia di sicurezza biologica (ad es. le linee guida M29 del CLSI). 4 AVVERTENZA: Contiene ProClin 950 (CAS 2682-20-4) La confezione di reagenti 25-OH Vitamina D totale VITROS e i Calibratori 25-OH Vitamina D totale VITROS contengono ProClin 950. R43: può provocare sensibilizzazione in caso di contatto con la pelle. S24: evitare il contatto con la pelle. S37: usare guanti adatti. Reattivi Contenuto del pacchetto di reagente 1 confezione di reagente contenente: 100 pozzetti rivestiti (streptavidina, batterica, si lega a 0,33 pmol pecora IgG/pozzetto) 6,9 ml di reattivo coniugato (HRP-25-OH VitD) con siero equino e gammaglobuline bovine 10,0 ml reagente di dissociazione in soluzione tampone Manipolazione del pacchetto di reagente La confezione del reagente viene fornita pronta per l'uso. La confezione contiene reattivi liquidi omogenei che non richiedono agitazione o miscelazione prima di essere caricati nel sistema. 2 di 13 Pubb. n. GEM1360_WW_IT Versione 2.0

Raccolta, preparazione e conservazione dei campioni Come con tutte le soluzioni di immunodosaggio che utilizzano proteine, una manipolazione errata della confezione di reagente può causare la formazione di schiuma sulla superficie del reagente. Non agitare, perché potrebbero formarsi schiuma o bolle. Se le confezioni di reagente vengono lasciate cadere o agitate, potrebbe comparire una piccolissima quantità di schiuma non rilevabile dal sistema. Le confezioni di reagente contenenti la schiuma non rilevata dal sistema possono presentare uno scostamento negativo. Se si utilizza una confezione di reagente che è stata fatta cadere o è stata agitata prima della sedimentazione, verificarne le prestazioni analizzando in modalità duplicata i campioni per il controllo qualità (alta/bassa) dopo il caricamento della confezione nel sistema. Conservazione e preparazione del pacchetto di reagente Reattivo Condizioni di conservazione Stabilità Sigillate Refrigerato 2 8 C Data di scadenza Aperti Sul sistema Sistema acceso 8 settimane Aperti Refrigerato 2 8 C 8 settimane La confezione di reagente 25-OH Vitamina D totale VITROS può essere utilizzata fino alla data di scadenza stampata sulla confezione se conservata e utilizzata come previsto. Non utilizzare oltre la data di scadenza indicata. Non congelare confezioni di reagente chiuse. Caricare le confezioni di reagente direttamente dal frigorifero in modo da limitare la formazione di condensa. Conservare le confezioni di reagente chiuse in frigorifero in un'apposita scatola sigillata contenente anche essiccante secco. Contenuto del calibratore 1 kit di Calibratori 25-OH Vitamina D totale VITROS 1 e 2 (liquido, vitamina D 25-OH in siero umano con agente antimicrobico, 2,0 ml); valori nominali 28 e 120 ng/ml (70 e 300 nmol/l) Scheda di calibrazione del lotto Scheda del protocollo 16 etichette con codice a barre per i calibratori (8 per ogni calibratore) Manipolazione del calibratore Usare soltanto con confezioni di reagente aventi lo stesso numero di lotto. Mescolare accuratamente capovolgendo e portare a 15 30 C prima dell'uso. Ogni confezione contiene un quantitativo sufficiente per almeno 6 determinazioni per ogni calibratore. Manipolare i calibratori in contenitori chiusi al fine di evitare contaminazione ed evaporazione. Per evitare l evaporazione, limitare il tempo di presenza dei calibratori sul sistema. Fare riferimento alle istruzioni per il funzionamento del sistema. Riportare a 2 8 C quanto prima dopo l'uso o caricare il volume necessario per una sola rilevazione. Conservazione e preparazione del calibratore Calibratore Condizioni di conservazione Stabilità Sigillate Refrigerato 2 8 C Data di scadenza Aperti Refrigerato 2 8 C 13 settimane Aperti Congelato -20 C 13 settimane I Calibratori 25-OH Vitamina D totale VITROS vengono forniti pronti per l'uso. I Calibratori 25-OH Vitamina D totale VITROS possono essere utilizzati fino alla data di scadenza stampata sulla confezione se conservati e utilizzati come previsto. Non utilizzare oltre la data di scadenza indicata. Il test 25-OH Vitamina D totale VITROS utilizza 120 μl di calibratore per ogni determinazione. I Calibratori 25-OH Vitamina D totale VITROS possono essere utilizzati direttamente sul Sistema per immunodiagnostica VITROS e il Sistema integrato VITROS. In alternativa, trasferire un aliquota di ogni calibratore in un contenitore per campione (tenendo conto del volume di riempimento minimo del contenitore) che può essere dotato di codifica a barre con le etichette fornite. Per informazioni dettagliate sul volume minimo di riempimento di cuvette o contenitori, consultare le istruzioni operative del sistema. I Calibratori 25-OH Vitamina D totale VITROS elaborati automaticamente in duplicato. Raccolta, preparazione e conservazione dei campioni Preparazione del paziente Non è necessaria alcuna preparazione specifica del paziente. Versione 2.0 Pubb. n. GEM1360_WW_IT 3 di 13

ISTRUZIONI PER L USO Procedura per l esecuzione dell analisi Campioni consigliati Siero Plasma eparinato Plasma con EDTA Campioni non consigliati Non utilizzare campioni torbidi. La torbidità dei campioni può influire sui risultati del test. Il plasma citrato non è un tipo di campione consigliato. Precauzioni speciali IMPORTANTE: È stato riscontrato che alcuni sistemi di prelievo dei campioni alterano l'integrità di altri analiti e test. 5 Data la varietà di apparecchi per il prelievo dei campioni disponibili, Ortho-Clinical Diagnostics Inc. non è in grado di fornire indicazioni definitive per quanto riguarda la reattività dei suoi prodotti con questi apparecchi. Controllare che i sistemi utilizzati siano compatibili con il test. Prelievo e preparazione dei campioni Prelevare i campioni utilizzando i metodi standard. 6,7 I campioni devono essere separati completamente da tutto il materiale cellulare. In caso contrario, si potrebbero ottenere risultati erronei. Mescolare accuratamente i controlli capovolgendoli e portarli a 15 30 C prima dell'uso. Il test 25-OH Vitamina D totale VITROS utilizza 60 μl di campione per ogni determinazione. Questo dosaggio non tiene in considerazione il volume minimo di riempimento del contenitore di campioni prescelto. Per informazioni dettagliate sul volume minimo di riempimento di cuvette o contenitori, consultare le istruzioni operative del sistema. Condizioni di manipolazione e di conservazione Collocare i campioni in contenitori chiusi per evitare la contaminazione e l'evaporazione. Seguire le procedure del proprio laboratorio per evitare la contaminazione crociata dei campioni dei pazienti. Il tempo di permanenza dei campioni all'interno del sistema prima dell'analisi va limitato per evitare l'evaporazione. Fare riferimento alle istruzioni per il funzionamento del sistema. Riportare a 2 8 C quanto prima dopo l'uso o caricare il volume necessario per una sola rilevazione. I campioni di siero e di plasma possono essere conservati per un periodo massimo di 7 giorni a temperature di 2 8 C, oppure per 4 settimane a temperature di -20 C. Evitare congelamenti e scongelamenti ripetuti. Procedura per l esecuzione dell analisi Materiali forniti Prodotti per immunodiagnostica VITROS - Confezione di reagente 25-OH Vitamina D totale Prodotti per immunodiagnostica VITROS - Calibratori 25-OH Vitamina D totale Materiali richiesti (non forniti) Prodotti per immunodiagnostica VITROS - Reattivo di segnale Prodotti per immunodiagnostica VITROS - Reattivo di lavaggio universale Materiali per il controllo qualità Prodotti per immunodiagnostica VITROS - Contenitore per confezioni di reagente con essiccante Istruzioni per l uso Verificare periodicamente il materiale a disposizione per semplificare la gestione dei reagenti e accertarsi che i lotti disponibili di reagenti di segnale VITROS, di reagenti universali di lavaggio VITROS e di reagenti calibrati siano sufficienti all'esecuzione delle analisi programmate. Quando si esegue una serie di test su un singolo campione, accertarsi che il volume di campione sia sufficiente ad effettuare i test richiesti. Per informazioni dettagliate, fare riferimento alle istruzioni per il funzionamento del sistema. Nota: Non utilizzare i prodotti se sono visibilmente danneggiati. Diluizione dei campioni I campioni possono essere diluiti manualmente fino a x2 con siero umano adatto con una concentrazione bassa di analiti prima del test. 4 di 13 Pubb. n. GEM1360_WW_IT Versione 2.0

Calibrazione Diluizione manuale dei campioni 1. Diluire il campione con un campione di siero del paziente con una bassa concentrazione di 25-OH vitamina D. 2. Rieseguire l'analisi. 3. Se necessario, correggere la concentrazione di 25-OH vitamina D nei diluenti. Moltiplicare i risultati per il fattore di diluizione e sottrarre la concentrazione dal campione di diluente (se applicabile) per ottenere una stima della concentrazione di 25-OH vitamina D del campione originale. Nome predefinito del test Il nome predefinito del test che appare sul referto del paziente è VITAMIN D TOTAL. L abbreviazione predefinita che appare sui menu di selezione dei test e sui referti di laboratorio è. Se necessario, è possibile riconfigurare tali impostazioni. Per informazioni dettagliate, fare riferimento alle istruzioni per il funzionamento del sistema. Calibrazione Procedura di calibrazione La calibrazione è specifica per i singoli lotti; le confezioni di reagenti e i calibratori vengono associati in base al numero del lotto. Confezioni di reagente appartenenti allo stesso lotto possono utilizzare la stessa calibrazione. Per ogni nuovo lotto di reagente viene definita una curva di calibrazione principale (curva dose-risposta che copre l'intero range di calibrazione). Le concentrazioni dei calibratori del relativo lotto vengono determinate in base a questa curva. Accertarsi che sul sistema sia disponibile la calibrazione principale per ogni nuovo lotto di reagente. Processare i calibratori analogamente ai campioni. Non è necessario programmare la calibrazione se si usano etichette con codici a barre. Caricare i calibratori nell ordine voluto: la calibrazione parte automaticamente. Una volta processati i calibratori, il segnale previsto per ogni calibratore viene confrontato con il segnale effettivamente ottenuto. La curva di calibrazione principale viene quindi riposizionata in modo da riflettere le differenze fra il segnale effettivo e quello previsto. La validità di tale curva di calibrazione viene valutata rispetto ad un gruppo di parametri di qualità e, se rientra nei limiti di accettabilità, viene memorizzata per essere successivamente utilizzata con qualsiasi confezione di reattivo dello stesso lotto. Non è possibile descrivere interamente la qualità della calibrazione tramite un singolo parametro. Per determinare la validità della calibrazione, si deve utilizzare il rapporto della calibrazione abbinato a valori di controllo accettabili. Dopo un periodo di tempo predeterminato o quando viene caricato un nuovo lotto di reagente, è necessario effettuare la ricalibrazione. I risultati della calibrazione sono valutati in base a un range di parametri di qualità. La mancata corrispondenza anche con un solo parametro di qualità definito verrà indicata nel report di calibrazione. Per le procedure da attuare in seguito a una calibrazione non andata a buon fine, vedere le istruzioni di funzionamento del sistema. Per istruzioni sulla procedura di calibrazione, consultare le istruzioni dettagliate del sistema. Frequenza di calibrazione Eseguire la calibrazione quando si cambia la confezione di reagente e il lotto del calibratore. Effettuare la calibrazione ogni 28 giorni. Effettuare la calibrazione dopo l'esecuzione di procedure di manutenzione specifiche. Effettuare la calibrazione se i risultati del controllo qualità non rientrano nell'intervallo accettabile. Per ulteriori informazioni sui casi in cui è necessario effettuare la calibrazione, fare riferimento alle istruzioni per il funzionamento del sistema. Tracciabilità della calibrazione Per la calibrazione del dosaggio 25-OH vitamina D totale VITROS possono essere utilizzati calibratori di riferimento interni ai quali siano stati assegnati valori per la correlazione a campioni misurati tramite LC-MS-MS. Modello di calibrazione Una funzione di adattamento con curva logistica a quattro parametri modificata è utilizzata per creare una curva di calibrazione principale. Il processo di calibrazione ridimensiona la curva di calibrazione principale per stabilire una curva valida di calibrazione memorizzata per il Sistema per immunodiagnostica e i Sistemi integrati VITROS. Intervallo di misura (dinamico) ECi/ECiQ, 3600, 5600 Sistema Intervallo di misurazione (dinamico) 8,00* 150 ng/ml (20,0 375 nmol/l) * Il limite inferiore dell intervallo misurabile riportato dal software del sistema è basato sul limite di quantificazione. Versione 2.0 Pubb. n. GEM1360_WW_IT 5 di 13

ISTRUZIONI PER L USO Controllo di qualità Controllo di qualità Scelta del materiale del controllo qualità Con il Sistema per immunodiagnostica e i Sistemi integrati VITROS si raccomanda l uso di controlli con livelli adeguati di 25-OH vitamina D. La compatibilità delle prestazioni dei liquidi di controllo in commercio con questo test va valutata prima di utilizzarli per il controllo di qualità. I materiali di controllo possono mostrare differenze rispetto ad altri metodi per la 25-OH vitamina D se contengono concentrazioni elevate di conservanti, stabilizzanti o altri additivi non fisiologici o comunque se non sono costituiti da una vera matrice di campione umano. Per tutti i materiali da usarsi nel controllo qualità con il test 25-OH Vitamina D totale VITROS, è necessario stabilire degli intervalli di valori specifici. Raccomandazioni sulle procedure per il controllo di qualità La buona prassi di laboratorio richiede l'esecuzione di controlli per la verifica delle prestazioni del test. Scegliere livelli di controllo per la verifica delle concentrazioni rilevanti da un punto di vista clinico. Per verificare le prestazioni del sistema, analizzare i materiali di controllo: dopo la calibrazione; nel rispetto delle normative locali o almeno una volta ogni giorno che viene eseguito il test; dopo l'esecuzione delle procedure di manutenzione specificate. Se le procedure di controllo di qualità interne richiedono un uso più frequente dei controlli, attenersi a tali procedure. Analizzare i materiali di controllo qualità adoperando lo stesso metodo utilizzato per i campioni di paziente. Se i risultati dei controlli sono al di fuori degli intervalli ritenuti accettabili, cercare le cause prima di decidere se includere i dati nel referto per il paziente. Per raccomandazioni generali sul controllo di qualità, fare riferimento alle linee guida pubblicate in materia. 8 Per informazioni più dettagliate, fare riferimento alle istruzioni per il funzionamento del sistema. Preparazione e conservazione dei materiali del controllo di qualità Per la preparazione, la conservazione e la stabilità, si rimanda alle istruzioni fornite dal produttore. Risultati I risultati vengono calcolati in modo automatico dal sistema per immunodiagnostica VITROS e dai sistemi integrati VITROS. Unità e conversione di unità I risultati di un analita vengono riportati in unità ng/ml o nmol/l. Per configurare le unità, fare riferimento alle istruzioni per il funzionamento del sistema. Convenzionale Alternativo ng/ml (nmol/l 0,4) nmol/l (ng/ml 2,5) Limiti della procedura Interferenti noti Il test 25-OH Vitamina D totale VITROS è stato valutato per interferenze compatibilmente con il protocollo CLSI EP7. 9 Le sostanze rilevate comunemente sono state testate su 2 lotti di reagenti. Dei composti testati, il paricalcitolo (Zemplar) può interferire con il test 25-OH Vitamina D totale VITROS. Analizzando il paricalcitolo (Zemplar) ai livelli indicati si è osservato uno scostamento positivo. Per un elenco degli altri composti che sono stati testati e che non hanno evidenziato interferenze, consultare Sostanze che non interferiscono. Interferente Concentrazione interferente Conc analita * Unità = ng/ml Unità = nmol/l Scostamento Scosta- ** Conc analita * mento ** Paricalcitolo (Zemplar) 24 ng/ml 57,6 nmol/l 10,5 125 26,3 313 * Concentrazione di test media di determinazioni replicate effettuate con 2 lotti di reattivi diversi. ** Stima della differenza media osservata. 6 di 13 Pubb. n. GEM1360_WW_IT Versione 2.0

Valore atteso Nota: Altri limiti Questi risultati sono rappresentativi. Il grado d'interferenza a concentrazioni diverse da quelle indicate può non essere prevedibile da questi risultati. Nella popolazione di pazienti possono essere presenti altre sostanze interferenti. I risultati di questo o altro test diagnostico devono essere adoperati e interpretati solo nel contesto del quadro clinico globale. È noto che determinati farmaci e condizioni cliniche alterano le concentrazioni di 25-OH vitamina D in vivo. Per ulteriori informazioni, consultare uno dei prospetti disponibili. 10 12 Gli anticorpi eterofili in campioni di siero e plasma possono causare interferenze negli immunodosaggi. 13 Questi anticorpi possono essere presenti nei campioni ematici provenienti da individui in regolare contatto con animali o trattati con prodotti sierici animali. I risultati che sono contraddittori con le osservazioni cliniche indicano che sono necessari altri test. Valore atteso Si raccomanda ad ogni laboratorio di stabilire i propri valori previsti per la popolazione servita. Una revisione della letteratura più recente 14 suggerisce che i livelli di 25-OH vitamina D sono: Livello ng/ml Intervallo nmol/l Deficienza <20 <50 Inventario 20 29 50 72,5 Sufficienza 30 100 75 250 Tossicità potenziale >100 >250 È stato condotto uno studio su 399 adulti apparentemente sani di età 21 79. I campioni provenivano da individui che vivono nelle regioni del Nord, del Sud e del Centro degli Stati Uniti e raccolti sia in estate che in inverno. Questi campioni sono stati testati usando il test 25-OH Vitamina D totale VITROS e i valori osservati sono stati riepilogati di seguito: Valori osservati ng/ml nmol/l 25-OH vitamina D media 33,4 83,5 Intervallo osservato dal 2,5 a 97,5 percentile 14,7 68,3 36,8 171 Prestazioni metodologiche Limite di rilevamento Il limite di rilevamento (LoD) per il test 25-OH Vitamina D totale VITROS è 7,43 ng/ml (18,6 nmol/l), determinato in modo consistente con il documento CLSI EP17 15 e con le proporzioni di falsi positivi (α) inferire al 5% e di falsi negativi (β) inferiore al 5%; basato su 600 determinazioni, con 1 bianco e 5 campioni di basso livello. Il limite di bianco (LoB) è 2,64 ng/ ml (6,60 nmol/l). Il limite di quantificazione (LoQ) è 8,00 ng/ml (20,0 nmol/l) determinato dalla concentrazione più bassa alla quale I requisiti di precisione vengono ancora soddisfatti e rientrano nell intervallo lineare del test. A 8,00 ng/ml (20,0 nmol/l), l'imprecisione osservata (%CV) era di 23,0 30,0% tra lotti e analizzatori. Limite di bianco, limite di rilevamento e limite di quantificazione LoB LoD * LoQ ng/ml nmol/l ng/ml nmol/l ng/ml nmol/l 2,64 6,60 7,43 18,6 8,00 20,0 * Le proporzioni di falsi positivi (α) e falsi negativi (β) erano inferiori al 5%, sulla base di 600 determinazioni, con 1 bianco e 5 campioni di basso livello. Accuratezza (confronto tra i metodi) L accuratezza è stata valutata secondo il documento CLSI EP9. 16 I grafici e le tabelle mostrano i risultati di uno studio di confronto tra metodi utilizzando campioni di siero dei pazienti analizzati sul Sistema per immunodiagnostica 3600 VITROS a confronto con i campioni analizzati usando il test LC-MS/MS e il test DiaSorin LIAISON. Per determinare la correlazione Versione 2.0 Pubb. n. GEM1360_WW_IT 7 di 13

ISTRUZIONI PER L USO Prestazioni metodologiche tra i il Sistema di immunodiagnostica VITROS e il Sistema integrato e i due metodi è stato utilizzato il metodo di regressione di Passing e Bablok. 17 La tabella mostra inoltre i risultati di studi di confronto tra metodi utilizzando campioni di siero dei pazienti analizzati sul Sistema per immunodiagnostica 3600 VITROS a confronto con i campioni analizzati usando il Sistema per immunodiagnostica ECi/ECiQ VITROS e il Sistema integrato 5600 VITROS. Per determinare il rapporto tra i due metodi è stato utilizzato il metodo di regressione di Passing e Bablok. 17 Unità convenzionali Unità alternative VITROS 3600 (ng/ml) VITROS 3600 (nmol/l) Metodo comparativo: Test LC-MS/MS (ng/ml) Metodo comparativo: Test LC-MS/MS (nmol/l) Sistema 3600 a confronto con LC-MS/MS n Coefficiente di correlazione Unità convenzionali (ng/ml) Intervallo di campioni Intercetta Unità alternative (nmol/l) Intervallo di campioni Intercetta 154 1,09 0,90 8,48 141 0,49 21,2 353 1,26 Sistemi 5600 e 3600 152 1,01 0,97 8,48 108 1,49 21,2 270 3,86 ECi/ECiQ a confronto con 3600 155 0,94 0,96 8,48 141 1,35 21,2 353 3,36 Unità convenzionali Unità alternative VITROS 3600 (ng/ml) VITROS 3600 (nmol/l) Metodo comparativo: Test DiaSorin LIAISON (ng/ml) Metodo comparativo: Test Diasorin LIAISON (nmol/l) Sistema 3600 a confronto con DiaSorin LIAISON n Pendenza Pendenza Coefficiente di correlazione Unità convenzionali (ng/ml) Intervallo di campioni Intercetta Unità alternative (nmol/l) Intervallo di campioni Intercetta 152 0,90 0,92 8,79 108 3,09 22,0 270 7,66 Sistemi 5600 e 3600 152 1,01 0,97 8,48 108 1,49 21,2 270 3,86 ECi/ECiQ a confronto con 3600 Precisione 155 0,94 0,96 8,48 141 1,35 21,2 353 3,36 Sistema per immunodiagnostica VITROS ECi/ECiQ La precisione è stata stimata conforme al documento NCCLS EP5. 18 Sono state testate 2 repliche in ognuno dei 4 campioni paziente e 1 campione di controllo disponibile in commercio in 2 momenti separati nell'arco della giornata per 8 di 13 Pubb. n. GEM1360_WW_IT Versione 2.0

Prestazioni metodologiche almeno 20 giorni. L'esperimento è stato effettuato utilizzando 2 lotti di reagente in 2 sistemi differenti. I dati rappresentano le prestazioni del prodotto. Sistema per immunodiagnostica VITROS 3600 e sistema integrato VITROS 5600 La precisione è stata stimata conforme al documento NCCLS EP5. 18 Sono state testate 2 repliche in ognuno dei 4 campioni paziente e 1 campione di controllo disponibile in commercio in 2 momenti separati nell'arco della giornata per almeno 20 giorni. L'esperimento è stato effettuato utilizzando 3 lotti di reagente in 2 sistemi differenti. I dati rappresentano le prestazioni del prodotto. Sistema ECi/ECiQ Lotto 1 ECi/ECiQ Sistema 2 Lotto 2 3600 Lotto 1 3600 Lotto 3 5600 Lotto 2 Concentrazione 25-OH Vitamina D totale media Unità = ng/ml Intra-ciclo * Intra-calibrazione ** Intra-laboratorio *** DS CV (%) DS CV (%) DS CV (%) N. osserv. N. giorni 9,78 1,370 13,9 2,450 24,9 2,510 25,9 80 20 22,5 1,66 7,4 3,14 14,0 3,43 15,3 80 20 31,1 2,25 7,2 3,86 12,4 4,13 13,3 80 20 70,0 3,86 5,5 5,86 8,4 6,24 8,9 80 20 121 4,1 3,4 6,1 5,1 6,7 5,5 80 20 9,12 1,820 20,4 2,580 28,8 2,640 28,4 80 20 20,7 2,46 12,0 3,32 16,2 3,43 16,4 80 20 28,1 3,06 11,0 3,34 12,0 3,43 12,1 80 20 65,0 5,20 8,10 5,66 8,80 5,94 9,1 80 20 108 4,1 3,8 5,5 5,2 5,9 5,4 80 20 8,99 1,500 19,3 2,180 27,9 3,270 32,1 80 20 22,9 2,26 10,5 2,90 13,5 4,04 16,5 80 20 31,6 2,66 8,9 3,36 11,2 4,65 14,0 80 20 72,2 4,30 6,1 5,73 8,1 6,80 9,2 80 20 123 4,8 3,9 6,5 5,3 7,4 6,0 80 20 7,31 2,240 30,4 2,470 33,6 2,470 34,0 80 20 21,0 3,22 15,3 3,29 15,6 3,32 15,8 80 20 29,5 3,35 11,3 3,43 11,6 3,62 12,3 80 20 71,1 5,93 8,3 6,07 8,5 5,92 8,4 80 20 120 5,8 4,7 5,9 4,9 5,8 4,8 80 20 9,78 1,970 19,3 2,300 22,5 2,380 25,4 80 20 23,5 2,43 10,1 2,95 12,2 2,93 12,8 80 20 31,9 2,52 7,7 3,22 9,9 3,13 10,1 80 20 69,4 3,75 5,3 4,82 6,8 4,39 6,5 80 20 117 6,1 5,1 6,5 5,4 6,4 5,6 80 20 * Nella stessa seduta analitica (ripetibilità). Precisione media tra duplicati in tutte le analisi. ** Nella stessa calibrazione. Precisione totale con componenti pesati nel ciclo di analisi, variazione tra un'analisi e l'altra e tra un giorno e l'altro. *** Nello stesso laboratorio. Misura dell'effetto della ricalibrazione sulla precisione totale, calcolata nell'ambito di un singolo lotto di reattivo, utilizzando dati di almeno 4 calibrazioni. Sistema ECi/ECiQ Lotto 1 Concentrazione 25-OH Vitamina D totale media Unità = nmol/l Intra-ciclo * Intra-calibrazione ** Intra-laboratorio *** DS CV (%) DS CV (%) DS CV (%) N. osserv. N. giorni 24,5 3,43 13,9 6,13 24,9 6,28 25,9 80 20 56,3 4,15 7,4 7,85 14,0 8,58 15,3 80 20 77,8 5,63 7,2 9,65 12,4 10,3 13,3 80 20 175 9,65 5,5 14,7 8,4 15,6 8,9 80 20 303 10,3 3,4 15,3 5,1 16,8 5,5 80 20 Versione 2.0 Pubb. n. GEM1360_WW_IT 9 di 13

ISTRUZIONI PER L USO Prestazioni metodologiche Sistema ECi/ECiQ Sistema 2 Lotto 2 3600 Lotto 1 3600 Lotto 3 5600 Lotto 2 Specificità Concentrazione 25-OH Vitamina D totale media Unità = nmol/l Intra-ciclo * Intra-calibrazione ** Intra-laboratorio *** DS CV (%) DS CV (%) DS CV (%) N. osserv. N. giorni 22,5 3,75 20,4 5,45 28,8 8,18 28,4 80 20 57,3 5,65 12,0 7,25 16,2 10,1 16,4 80 20 79,0 6,65 11,0 8,40 12,0 11,6 12,1 80 20 181 10,8 8,10 14,3 8,80 17,0 9,1 80 20 308 12,0 3,8 16,3 5,2 18,5 5,4 80 20 18,3 5,60 19,3 6,18 27,9 6,18 32,1 80 20 52,5 8,05 10,5 8,23 13,5 8,30 16,5 80 20 73,8 8,38 8,9 8,58 11,2 9,05 14,0 80 20 178 14,8 6,1 15,2 8,1 14,8 9,2 80 20 300 14,5 3,9 14,8 5,3 14,5 6,0 80 20 22,8 4,55 30,4 6,45 33,6 6,60 34,0 80 20 51,8 6,15 15,3 8,30 15,6 8,58 15,8 80 20 70,3 7,65 11,3 8,35 11,6 8,58 12,3 80 20 163 13,0 8,3 14,2 8,5 14,9 8,4 80 20 270 10,3 4,7 13,8 4,9 14,8 4,8 80 20 24,5 4,93 19,3 5,75 22,5 5,95 25,4 80 20 58,8 6,08 10,1 7,38 12,2 7,33 12,8 80 20 79,8 6,30 7,7 8,05 9,9 7,83 10,1 80 20 174 9,38 5,3 12,1 6,8 11,0 6,5 80 20 293 15,3 5,1 16,3 5,4 16,0 5,6 80 20 * Nella stessa analisi (ripetibilità). Precisione media tra duplicati in tutte le analisi. ** Nella stessa calibrazione. Precisione totale con componenti pesati nel ciclo di analisi, variazione tra un'analisi e l'altra e tra un giorno e l'altro. *** Nello stesso laboratorio. Misura dell'effetto della ricalibrazione sulla precisione totale, calcolata nell'ambito di un singolo lotto di reattivo, utilizzando dati di almeno 4 calibrazioni. Sostanze che non interferiscono Il test 25-OH Vitamina D totale VITROS è stato valutato per interferenze compatibilmente con il protocollo CLSI EP7. 9 Tra i componenti testati, nessuno è stato trovato responsabile di uno scostamento >10% con il test alle concentrazioni di 25-OH vitamina D indicate pari a 30 80 ng/ml (75 200 nmol/l). Composto Concentrazione Paracetamolo 1324 μmol/l 200 μg/ml Acido acetilsalicilico 3,62 mmol/l 65,16 mg/dl Bilirubina (non coniugata) 513 μmol/l 30 mg/dl Bilirubina (coniugata) 513 μmol/l 30 mg/dl Biotina 61,35 nmol/l 1,5 μg/dl Emoglobina (emolisato) 0,124 mmol/l 200 mg/dl Ibuprofene 0,576 mmol/l 12 mg/dl Trioleina 33,0 mmol/l 3000 mg/dl Sostanze endogene che non interferiscono Il test 25-OH Vitamina D totale VITROS è stato valutato per interferenze compatibilmente con il protocollo CLSI EP7 A2 Sezione 8. 9 I campioni erano stati raccolti da un normale gruppo e da un gruppo affetto da patologia o un sottogruppo clinico e testato per i livelli totali di 25-OH vitamina D. I campioni sono stati testati con un test comparativo: È stato valutato il valore LC-MS/MS, la distribuzione dello scostamento con il test comparativo di normale e patologico. L'intervallo di confidenza non mostra alcuna differenza statistica nei risultati. 10 di 13 Pubb. n. GEM1360_WW_IT Versione 2.0

Bibliografia Sottogruppo clinico Colesterolo HAMA Fattore reumatoide Proteine totali Trigliceridi Testato livello elevato 306 mg/dl 160.000 IU/mL 3800 IU/mL 12,5 g/dl 491 mg/dl Reattività crociata La reattività crociata del test 25-OH vitamina D totale VITROS è stata valutata tramite l aggiunta delle seguenti sostanze ai campioni contenenti 25-OH vitamina D. Composto Concentrazione Concentrazione di 25-OH vitamina D per campione Risultato media 25-OH vitamina D per pool di reattivo crociato ng/ml nmol/l ng/ml nmol/l % reattività crociata Vitamina D 2 (Ergocalciferolo) 100 ng/ml 8,81 22,0 9,77 24,4 1,0 Vitamina D 3 (Colecalciferolo) 100 ng/ml 8,81 22,0 9,66 24,2 0,9 Vitamina D 25-OH 2 100 ng/ml 8,10 20,3 113 283 104,9 Vitamina D 25-OH 3 100 ng/ml 8,10 20,3 107 268 98,9 1,25 (OH) 2 Vitamina D 2 0,2 ng/ml * 8,81 22,0 10,1 25,3 645,0 1,25 (OH) 2 Vitamina D 3 0,2 ng/ml * 8,10 20,3 8,09 20,2-5,0 24,25 (OH) 2 Vitamina D 3 10 ng/ml * 7,92 19,8 11,4 28,5 34,8 Vitamina D 3-epi 25-OH 3 100 ng/ml 7,92 19,8 45,3 113 37,4 * I livelli testati erano da 2x a 4x, i livelli endogeni tipici di analita. 19,20 La reattività crociata è stata definita come risultato medio ottenuto per pool di reattivo crociato diviso per la concentrazione del reattivo crociato in termini di percentuale. % reattività crociata = Valore medio con aggiunta (ng/ml)-valore medio senza aggiunta (ng/ml) x 100 Concentrazione del reattivo crociato (ng/ml) Bibliografia 1. Jeffrey K. C. Lai et al.:. Assessing vitamin D status: Pitfalls for the unwary. Mol. Nutr. Food Res. 2010, 54, 1 10. 2. Michael F. Holick. Vitamin D Deficiency. The New England Journal of Medicine. (2007) 357:266-281. 3. Summers M et al. Luminogenic Reagent Using 3-Chloro 4-Hydroxy Acetanilide to Enhance Peroxidase/Luminol Chemiluminescence. Clin Chem. 41:S73; 1995. 4. CLSI. Protection of Laboratory Workers from Occupationally Acquired Infections; Approved Guideline - Third Edition.CLSI document M29-A3 (ISBN 1-56238-567-4). CLSI, 940 West Valley Road, Suite 1400, Wayne, Pennsylvania 19087-1898 USA, 2005. 5. Calam RR. Specimen Processing Separator Gels: An Update. J Clin Immunoassay. 11:86 90; 1988. 6. CLSI. Procedures for the Collection of Diagnostic Blood Specimens by Venipuncture; Approved Standard Sixth Edition. CLSI document H3-A6 (ISBN 1-56238-650-6). CLSI, 940 West Valley Road, Suite 1400, Wayne, Pennsylvania 19087-1898, USA 2007. 7. CLSI/NCCLS. Procedures and Devices for the Collection of Diagnostic Capillary Blood Specimens; Approved Standard Fifth Edition. CLSI/NCCLS document H4-A5 [ISBN 1-56238-538-0]. CLSI/NCCLS, 940 West Valley Road, Suite 1400, Wayne, PA 19087-1898 USA, 2004. 8. CLSI. Statistical Quality Control for Quantitative Measurements: Principles and Definitions; Approved Guideline - Third Edition. CLSI document C24-A3 [ISBN 1-56238-613-1]. CLSI, 940 West Valley Road, Suite 1400, Wayne, PA 19087-1898 USA, 2006. 9. CLSI. Interference Testing in Clinical Chemistry; Approved Guideline Second Edition. CLSI document EP7-A2 (ISBN 1-56238-584-4). CLSI, 940 West Valley Road, Suite 1400, Wayne, Pennsylvania 19087-1898 USA, 2005. 10. Young DS. Effects of Drugs on Clinical Laboratory Tests. ed. 4. Washington, D.C.: AACC Press; 1995. 11. Friedman RB, Young DS. Effects of Disease on Clinical Laboratory Tests. ed. 3. Washington, D.C.: AACC Press; 1997. 12. Tryding N, Tufvesson C, Sonntag O (eds). Drug Effects in Clinical Chemistry. ed. 7. Stockholm: The National Corporation of Swedish Pharmacies, Pharmasoft AB, Swedish Society for Clinical Chemistry; 1996. Versione 2.0 Pubb. n. GEM1360_WW_IT 11 di 13

ISTRUZIONI PER L USO Glossario dei simboli 13. Levinson SS. The Nature of Heterophilic Antibodies and Their Role in Immunoassay Interference. J Clin Immunoassay. 15:108 115; 1992. 14. Holick, MF et al. Evaluation, Treatment, and Prevention of Vitamin D Deficiency: an Endocrine Society Clinical PracticeGuideline; J Clin Endocrin Metab. July 2011, 96(7). 15. CLSI/NCCLS. Protocols for Determination of Limits of Detection and Limits of Quantitation; Approved Guideline. CLSI/ NCCLS document EP17-A [IBSN 1-56238-551-8]. CLSI/NCCLS, 940 West Valley Road, Suite 1400, Wayne, Pennsylvania 19087-1898 USA, 2004. 16. CLSI. Method Comparison and Bias Estimation Using Patient Samples; Approved Guideline Second Edition (Interim Revision). CLSI document EP9-A2-1R(Interim Review). Wayne, PA: CLSI, 2010. 17. Passing H, Bablok W. A New Biometrical Procedure of testing the Equality of Measurements from Two Different Analytical Methods. J. Clin Chem Biochem. 21: 709-720, 1983. 18. CLSI/NCCLS. Evaluation of Precision Performance of Quantitative Measurement Methods; Approved Guideline Second Edition. CLSI/NCCLS document EP5-A2. Wayne, PA: NCCLS, 2004. 19. Juttmann JR, Visser TJ, Buurman C, Kam De E, Birkenhager JC. Seasonal fluctuations in serum concentrations of vitamin D metabolites in normal subjects. British Medical Journal 282:1349-1352; 1981. 20. Holick MF. The Use and Interpretation of Assays for Vitamin D and its Metabolites. Boston University School of Medicine, Vitamin D, Skin, and Bone Reasearch Laboratory, Boston MA 02118, The Journal of Nutrition 120:1464-1469, 1990. Glossario dei simboli Revisioni Data revisione Versione Modifiche tecniche apportate* 2012-06-22 2.0 Prima versione del documento 2012-05-15 1.0 Solo inglese * Le barre delle modifiche indicano la posizione del testo aggiornato rispetto alla versione precedente del documento. 12 di 13 Pubb. n. GEM1360_WW_IT Versione 2.0

Revisioni Quando le presenti Istruzioni per l'uso saranno sostituite da quelle aggiornate, apporre la propria firma e la data e conservare in base alle direttive locali o ai regolamenti del laboratorio. Firma Data Condizioni di fornitura: tutte le forniture sono regolate dai termini e dalle condizioni di vendita di Ortho-Clinical Diagnostics e dei suoi distributori. Copie di tali condizioni sono disponibili su richiesta. Distribuito negli USA da: Ortho-Clinical Diagnostics, Inc. 100 Indigo Creek Drive Rochester, NY 14626 Ortho-Clinical Diagnostics Johnson & Johnson 50-100 Holmers Farm Way High Wycombe Buckinghamshire HP12 4DP United Kingdom VITROS è un marchio di Ortho-Clinical Diagnostics, Inc. I marchi di terzi usati in questo manuale sono marchi di proprietà dei rispettivi proprietari. Ortho-Clinical Diagnostics, Inc., 2012. Versione 2.0 Pubb. n. GEM1360_WW_IT 13 di 13