Polimorfismo genico dei recehori KIR e trapianto di cellule staminali emopoiemche.

Dimensione: px

Iniziare la visualizzazioe della pagina:

Download "Polimorfismo genico dei recehori KIR e trapianto di cellule staminali emopoiemche."

Marina Manfredi
5 anni fa
Visualizzazioni

1 Polimorfismo genico dei recehori KIR e trapianto di cellule staminali emopoiemche. Michela Falco Laboratorio di Immnologia Clinica e Sperimentale IRCCS Giannina Gaslini, Genova. michelaemma.falco@gmail.com IL RUOLO DELL IMMUNOGENETICA NELLA MEDICINA DEL TERZO MILLENNIO 19 Marzo 2015, Fondazione IME, Roma

2 D. Pende et al. Blood 2009 S. Cooley et al. Blood 2010 C. Fauriat et al. Blood 2010 S. Sivori et al Blood 2011 JM. Venstrom N. Engl. J. Med Stern M. et al. Blood 2008 perché Mpizzare i geni KIR del donatore per trapianto HLA aploidenmco? Numerosi studi correlano il miglior esito (migliore OS, minore rischio di ricaduta) del trapianto quando nel donatore è presente una popolazione NK allorearva il genodpo KIR del donatore è caraferizzato da un valore di B content è alto nel genodpo KIR del donatore è presente KIR2S1 educato

3 POPOLAZIONE NK ALLOREATTIVA donatore Lysis paziente NK Target ikir for HLA La popolazione NK allorearva è cosdtuita da cellule NK che esprimono, sulla loro superficie, unicamente recefori KIR inibitori che riconoscono KIR- L presend nel donatore (educazione dei KIR) e non nel ricevente.

POPOLAZIONE NK ALLOREATTIVA donatore Lysis paziente paziente

ahecchimento ikir for HLA La popolazione NK allorearva è

unicamente recefori KIR inibitori che riconoscono KIR- L presend

4 POPOLAZIONE NK ALLOREATTIVA donatore Lysis paziente paziente Leukemic blast Minore incidenza di ricaduta NK Target T Migliore ahecchimento ikir for HLA La popolazione NK allorearva è cosdtuita da cellule NK che esprimono, sulla loro superficie, unicamente recefori KIR inibitori che riconoscono KIR- L presend nel donatore (educazione dei KIR) e non nel ricevente. DC Minore probabilità di GvHD

$Ricerca del KIR/KIR- L mismatch in gra\ versus host direcmon. Analisi fenompica: determinazione dell effesva presenza della sofopopolazione NK alloreasva.$

5 Analisi della popolazione NK allorearva. Analisi molecolare: analisi degli alleli HLA di Classe I sia del donatore che del ricevente analisi del repertorio KIR del donatore. Ricerca del KIR/KIR- L mismatch in gra\ versus host direcmon. Analisi fenompica: determinazione dell effesva presenza della sofopopolazione NK alloreasva. determinazione della dimensione della sofopopolazione NK alloreasva. Analisi funzionale: capacità di riconoscere ed eliminare le cellule leucemiche del paziente in vitro.

6 donatore ricevente AlloreaRvità C1 recehore 2DL2/L3 ligando HLA- C Asn 80 (C1) alta affinità HLA- C Lys 80 (C2) bassa affinità AlloreaRvità C2 recehore 2DL1 ligando HLA- C Lys 80 (C2) alta affinità AlloreaRvità Bw4 recehore 3DL1 ligando HLA- B e HLA A (Bw4)

7 Analisi degli alleli HLA di Classe I classica del donatore e del ricevente Ricerca del KIR ligand mismatch in GvH direcmon

KIR2DL2/L3) C2 Lys 80 (ligando di KIR2DL1) Polimorfismo aa 77-83 Bw4 (ligando di KIR3DL1) HLA- B*13:02 è Bw4 + ma non è un ligando di

8 Ricerca del KIR- L mismatch in GvHD : importanza della Mpizzazione HLA ad alta risoluzione. HLA$locus A B C alleli proteine nulls Dimorfismo in posizione 80: C1 Asn 80 (ligando di KIR2DL2/L3) C2 Lys 80 (ligando di KIR2DL1) Polimorfismo aa Bw4 (ligando di KIR3DL1) HLA- B*13:02 è Bw4 + ma non è un ligando di KIR3DL1 Bw6 HLA- B*46:01 e HLA- B*73:01 sono alleli HLA- B caraherizzam dall epitopo C1. HLA- A*24, - A*23, - A*32 sono alleli HLA- A caraherizzam dall epitopo Bw4. up date

Come tradurre gli alleli HLA in KIR ligandi? hhp://www.ebi.ac.

9 Come tradurre gli alleli HLA in KIR ligandi? hhp:// IPD KIR database: KIR- L calculator PunM deboli: - Il locus HLA- A non è incluso nell analisi. - HLA- B*13:02 è incluso tra i KIR ligandi di KIR3DL1. - L epitopo C1 che caraferizza HLA- B*46:01 and HLA- B*73:01 non è indicato.

10 Analisi del repertorio dei geni KIR del donatore Ricerca del KIR umle per la presenza della popolazione NK allorearva I geni KIR sono caraferizzad da polimorfismo allelico polimorfismo aplodpico Donatori differend sono caraferizzad da un repertorio KIR differente.

11 ALLO C1 ALLO C2 ALLO Bw4 W. Jiang et al. Genome Res. 2012

12 AlloreaFvità C1 AlloreaSvità C2 AlloreaSvità Bw4

13 Analisi genodpo KIR del donatore determinazione del genodpo (A/A vs B/X) determinazione del valore del B content

14 GENOTIPI KIR A/A 2 aplompi A B/X 2 aplompi B + 1 aplompo A e 1 aplompo B W. Jiang et al. Genome Res. 2012

AploMpi A AploMpi B Parham P and Moffe: A Nat. Rev. Imm. 2013 Frequenza aplodpi A p= 0.

15 AploMpi A AploMpi B Parham P and Moffe: A Nat. Rev. Imm Frequenza aplodpi A p= 0.5 Frequenza aplodpi B q= 0.5 A/A = p 2 = 0.25 B/X = B/B + A/B = q pq = x (0.5 x 0.5) = 0.75

16 ANALISI DEL VALORE DEL B CONTENT W. Jiang et al. Genome Res. 2012

17 ANALISI DEL VALORE DEL B CONTENT B content = 0 A/A B content = 1 B content = 2 B content = 3 B content = 4 B/X B/X B/X B/X

ANALISI DEL GENOTIPO KIR: un esempio banda PCR

3DL3, 3DS1, 2DP1, 3DP1 Regione Centromerica R.

18 ANALISI DEL GENOTIPO KIR: un esempio banda PCR di controllo banda PCR KIR specifica KIR idenmficam: 2DL1, 2DL2, 2DL3, 2DL4, 2DL5A, 2DL5B, 2DS1, 2DS2, 2DS3, 2DS4, 3DL1, 3DL2, 3DL3, 3DS1, 2DP1, 3DP1 Regione Centromerica R.S. Regione Telomerica A apl B apl B apl B apl GenoMpo B/X

19 KIR2DS1 e alloreasvità non classica Ricerca (nel donatore) di KIR2DS1 educato Presenza di KIR2DS1 nel genoma del donatore Educazione delle cellule NK KIR2DS1 + del donatore (analisi HLA- C del donatore) Presenza del ligando (HLA- C C2) nel genoma del ricevente Analisi citofluorimetrica e determinazione della presenza di cellule NK KIR2DS1 + Ricerca di KIR2DS1 EDUCATO e UTILE

20 Donatore: presenza KIR2DS1 nel genoma educazione cellule NK KIR2DS1 EDUCATA ikir e/o NKG2A iporesponsiva ikir e/o NKG2A EDUCATA ikir e/o NKG2A C1 C1 NK KIR2DS1 C2 C2 NK KIR2DS1 C1 C2 NK KIR2DS1 NO lysis NO lysis C1 Target C1 Target C1 LYSIS C1 LYSIS C2 Target C2 Target C1 C2 Lysis? Ricevente: deve avere il ligando di KIR2DS1 (essere C2 posidvo) C2 C1 Target

21 Analisi KIR2DS1

22 CRITERI UTILIZZATI PER LA SELEZIONE DEL MIGLIOR DONATORE HLA APLOIDENTICO ü Presenza di una popolazione NK alloreasva Dimensione della popolazione NK alloreasva ü Valore del B content alto genodpo KIR B/x migliore di A/A ü Presenza di KIR2DS1 educato e udle Dimensione della popolazione KIR2DS1 + ü Alta percentuale di cellule NK e linfocid T γ/δ ü Elevata asvità and- leucemica

23 Grazie a IsMtuto G. Gaslini (GE) Claudia Alicata CrisDna BoSno Lorenzo MoreFa Università di Genova Alessandro MoreFa IRCCS AOU San MarMno- IST (GE) Daniela Pende Raffaella Meazza Paolo Canevali Fabrizio Loiacono Osp. Ped Bambino Gesù (RM) Alice Bertaina Daria Pagliara Barbarella Lucarelli Franco Locatelli IRCCS AOU San MarMno- IST (GE) Anna Maria Raiola Alida DominieFo Andrea Bacigalupo IRCCS S. MaHeo (PV) Tommaso Mina Laura Rubert Chiara Cugno Marco Zecca Policlinico Tor Vergata (RM) Manuela TesD Marco Andreani E. O. Ospedali Galliera (GE) Lucia Garbarino IRCCS S. MaHeo (PV) Miryam MarDneS Maria CrisDna Mingari e a tub voi per l a:enzione.

Documenti analoghi

Polimorfismo dei geni KIR: come studiarlo e perché.

Polimorfismo dei geni KIR: come studiarlo e perché. Michela Falco Laboratorio di Immunologia Clinica e Sperimentale Is6tuto Giannina Gaslini, Genova michelaemma.falco@gmail.com Summer School AIBT 2016