Abbott. Procedura di preparazione manuale dei campioni per i dosaggi Abbott RealTime RNA B6L /R Abbott/Printed in Germany

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1 Abbott mtm Procedura di preparazione manuale dei campioni per i dosaggi Abbott RealTime RNA ABBOTT Max-Planck-Ring Wiesbaden Germany Abbott/Printed in Germany B6L /R2 Novembre 2006

2 ANNOTAZIONI Procedura di preparazione manuale dei campioni per i dosaggi Abbott RealTime RNA

3 Indice Introduzione Diritti di proprietà Marchi di fabbrica Descrizione Principi di funzionamento Tipi di campione Precauzioni per il trattamento Area per la preparazione dei reagenti Area per la preparazione dei campioni Area per l'amplificazione Contaminazione e inibizione Materiale ed attrezzatura necessari Materiale monouso Materiali supplementari Reagenti del sistema Abbott msample Preparation (n. di listino 4J70-24) Istruzioni per la conservazione Protocollo di estrazione Allestimento Lisi Primo lavaggio con mwash Secondo lavaggio con mwash Primo lavaggio con mwash Secondo lavaggio con mwash Prima fase con melution Seconda fase con melution Pulizia Riassunto del protocollo Procedura di preparazione manuale dei campioni per i dosaggi Abbott RealTime RNA i

4 Indice ANNOTAZIONI ii Procedura di preparazione manuale dei campioni per i dosaggi Abbott RealTime RNA

5 Introduzione La Abbott Molecular ringrazia per aver scelto il sistema Abbott msample Preparation per il proprio laboratorio molecolare e sarà lieta di assisterla in ogni modo possibile. Per ottenere l'assistenza, è sufficiente chiamare il personale Abbott. Nel presente manuale sono riportate le seguenti informazioni: Diritti di proprietà, a pagina 2 Descrive le condizioni per l'uso delle informazioni, dei documenti e delle illustrazioni presenti in questo manuale. Marchi di fabbrica, a pagina 2 Descrizione, a pagina 3 Principi di funzionamento, a pagina 3 Tipi di campione, a pagina 3 Precauzioni per il trattamento, a pagina 4 Materiale ed attrezzatura necessari, a pagina 8 Istruzioni per la conservazione, a pagina 9 Protocollo di estrazione, a pagina 10 Pulizia, a pagina 16 Riassunto del protocollo, a pagina 17 Procedura di preparazione manuale dei campioni per i dosaggi Abbott RealTime RNA 1

6 Diritti di proprietà Marchi di fabbrica Copyright 2005, Abbott Laboratories, Abbott Park, Illinois. Tutti i diritti riservati. Tutti i nomi ed i marchi di fabbrica dei prodotti della Abbott Laboratories sono di proprietà o su licenza della Abbott Laboratories, delle sue società affiliate o consociate. Non è permesso l'uso di nessun marchio di fabbrica Abbott, della ragione sociale, della veste commerciale o della denominazione del prodotto senza previa autorizzazione scritta della Abbott Laboratories, eccezion fatta per l'identificazione del prodotto o dei servizi offerti dalla Abbott Laboratories. Tutti gli altri marchi di fabbrica, nomi dei prodotti e denominazioni commerciali sono proprietà delle rispettive società. Tutti i diritti riservati. Tranne nei casi summenzionati, non si fa concessione alcuna per quanto concerne licenze o diritti espressi o impliciti, protetti da brevetto, marchio di fabbrica o da un diritto di proprietà di Abbott Laboratories. Abbott è un marchio commerciale registrato di Abbott Laboratories. m, m1000 e m2000sp sono marchi commerciali di Abbott Laboratories. 2 Procedura di preparazione manuale dei campioni per i dosaggi Abbott RealTime RNA

7 Descrizione Lo scopo della preparazione del campione consiste nell'estrarre e concentrare le molecole di RNA bersaglio per rimuovere dall'estratto potenziali inibitori dell'amplificazione e renderlo in tal modo amplificabile. Il sistema msample Preparation consiste in un set di reagenti per l'estrazione degli acidi nucleici. Tali reagenti vengono utilizzati con i sistemi automatizzati m1000 ed m2000sp, ma possono anche essere usati manualmente come descritto di seguito. Principi di funzionamento Durante la preparazione del campione si dispensano mmicroparticles ed mlysis nel numero necessario di cartucce di reazione. Quindi si aggiunge ciascun campione ad una cartuccia di reazione e si passa all'incubazione. Durante l'incubazione a 50 C, si verifica la lisi e gli acidi nucleici vengono assorbiti dalle microparticelle della soluzione mlysis. Ad incubazione terminata, per catturare le microparticelle, si applica un magnete alla cartuccia di reazione. Il sopranatante della lisi viene eliminato. Con una serie di fasi, si dispensano le soluzioni di lavaggio mwash 1 ed mwash 2 per lavare le microparticelle e liberarle dalle impurità. Le soluzioni di lavaggio sono poi eliminate. Si aggiunge quindi l'melution Buffer (tampone di eluizione) alle cartucce di reazione, che vengono poi incubate a 75 C per permettere agli acidi nucleici di venire separati dalle microparticelle. In seguito si dispensa la soluzione di lavaggio mwash 2, si applica un magnete e il campione eluito viene trasferito in una provetta o nella piastra a 96 pozzetti per ulteriori procedimenti. Tipi di campione Il protocollo descritto si basa sui metodi automatizzati sviluppati per i target dell'rna virale in plasma o siero umani. Per informazioni sui tipi di campioni appropriati fare riferimento ai foglietti illustrativi dei dosaggi Abbott RealTime. Procedura di preparazione manuale dei campioni per i dosaggi Abbott RealTime RNA 3

8 Precauzioni per il trattamento Area per la preparazione dei reagenti Quando si preparano i campioni è fondamentale attenersi alle buone pratiche di laboratorio, per ridurre al minimo il rischio di contaminazione crociata tra i campioni ed evitare l'introduzione involontaria di nucleasi (RNasi, DNasi) nei campioni prima, durante e dopo la procedura di estrazione. Quando si lavora con gli acidi nucleici, adottare sempre adeguate tecniche asettiche. Le reazioni di amplificazione, come la PCR, sono sensibili all'introduzione involontaria di prodotto da reazioni di amplificazione precedente. Per informazioni sulle attività da eseguire separatamente e sulle aree dedicate, fare riferimento ai foglietti illustrativi dei dosaggi Abbott RealTime. L'area per la preparazione dei reagenti è destinata alla preparazione dei componenti del reagente a base PCR per creare la miscela master di amplificazione e trasferirne le aliquote nella piastra a 96 pozzetti. I camici da laboratorio, le pipette, i puntali, gli agitatori e miscelatori usati nell'area per la preparazione dei reagenti devono rimanere in quest'area e non devono essere spostati dall'area per la preparazione dei campioni o dall'area per l'amplificazione. 4 Procedura di preparazione manuale dei campioni per i dosaggi Abbott RealTime RNA

9 Area per la preparazione dei campioni L'area per la preparazione dei campioni è destinata all'elaborazione dei campioni, dei calibratori e/o controlli e alla dispensazione dei campioni, controlli e calibratori elaborati nella piastra a 96 pozzetti. Tutti i reagenti utilizzati nell'area per la preparazione dei campioni devono rimanere sempre in quest'area. I camici da laboratorio, le pipette, i puntali, gli agitatori e miscelatori usati nell'area per la preparazione dei campioni devono rimanere in quest'area e non devono essere spostati nell'area per la preparazione dei reagenti o nell'area per l'amplificazione. Non portare prodotti di amplificazione nell'area per la preparazione dei campioni. AVVERTENZA: Potenziale rischio biologico. Nessuno dei metodi analitici conosciuti può garantire in modo assoluto che prodotti di origine umana o derivati da microrganismi inattivati non possano trasmettere infezioni. Pertanto, tutti i materiali di origine umana devono essere considerati potenzialmente infettivi. Si raccomanda che questi reagenti e i campioni umani vengano trattati in accordo con quanto descritto nella pubblicazione "OSHA Standard" relativa agli agenti patogeni di origine ematica. I materiali contenenti o sospettati di contenere agenti infettivi devono essere trattati secondo quanto descritto nella pubblicazione "Biosafety Level 2" o linee guida equivalenti. Osservare, tra l'altro, le seguenti misure precauzionali: indossare guanti quando si maneggiano campioni o reagenti non pipettare con la bocca non mangiare, bere, fumare, truccarsi o maneggiare lenti a contatto nelle aree dove vengono trattati questi materiali pulire e disinfettare schizzi dei campioni prevedendo l'uso di un disinfettante tubercolicida come ipoclorito di sodio all'1,0% o altri disinfettanti adeguati decontaminare ed eliminare tutti i campioni, i reagenti ed altro materiale a potenziale rischio biologico in accordo con le norme locali, regionali e nazionali. Tutti i materiali devono essere trattati in modo da minimizzare la potenziale contaminazione delle aree di lavoro. Procedura di preparazione manuale dei campioni per i dosaggi Abbott RealTime RNA 5

10 Quando si manipolano i prodotti chimici, osservare sostanzialmente le seguenti precauzioni: per istruzioni circa l'uso e le precauzioni, consultare le schede di sicurezza MSDS evitare il contatto con la pelle e gli occhi. Se il contatto con i materiali non può essere evitato, utilizzare guanti impermeabili, occhiali protettivi e indumenti appropriati mantenere sempre la postazione di lavoro in perfetto ordine. Non mangiare, bere o conservare alimenti e bevande nei luoghi in cui vengono utilizzati i prodotti chimici rivolgersi ad un medico, se si osservano irritazioni o segni di tossicità in seguito all'esposizione. Area per l'amplificazione L'area per l'amplificazione è destinata all'amplificazione PCR e alla rilevazione del prodotto amplificato. Le piastre a 96 pozzetti sigillate vengono dunque trasferite dall'area per la preparazione dei campioni e caricate nel termociclatore. I camici da laboratorio e l'attrezzatura usati nell'area per l'amplificazione devono rimanere in quest'area e non devono essere spostati nell'area per la preparazione dei reagenti o nell'area per la preparazione dei campioni. 6 Procedura di preparazione manuale dei campioni per i dosaggi Abbott RealTime RNA

11 Contaminazione e inibizione Per minimizzare i rischi di contaminazione da nucleasi, di contaminazione crociata tra campioni, contaminazione con prodotto amplificato e inibizione, osservare le seguenti precauzioni: indossare sempre indumenti protettivi adatti usare guanti privi di talco. cambiare i guanti dopo aver toccato potenziali contaminanti (campioni, eluiti e/o prodotto amplificato) per tutte le operazioni di dispensazione manuale, utilizzare sempre puntali con barriere anti aerosol sterili. I puntali delle pipette devono essere usati una sola volta. I reagenti del sistema Abbott msample Preparation sono esclusivamente monouso. Al termine di ciascun protocollo, eliminare tutti i reagenti rimanenti. L'mLysis, le soluzioni di lavaggio mwash 1 ed mwash 2, l'melution Buffer e l'mmicroparticles rimanenti possono essere eliminati in accordo con le linee guida del proprio laboratorio. NOTA: Disinfettare in autoclave il materiale PCR amplificato non degrada il prodotto amplificato, ma può contribuire al rilascio dello stesso provocando l'apertura della piastra sigillata o della provetta. L'area del laboratorio può essere contaminata con prodotto amplificato, se il materiale di rifiuto non viene attentamente maneggiato e contenuto prima e dopo l'elaborazione. Procedura di preparazione manuale dei campioni per i dosaggi Abbott RealTime RNA 7

12 Materiale ed attrezzatura necessari Materiale monouso Materiali supplementari puntali con barriera anti aerosol sterili da 1000 µl puntali con barriera anti aerosol sterili da 200 µl puntali per pipette a ripetizione sterili da 5 ml in grado di dispensare volumi di 100 µl cartucce di reazione in polipropilene da 12 x 75 mm (n. di listino 04J71-20 o equivalente) provette "microfuge" con estremità avvitabile da 1,5 ml e tappi (n. di listino 04J71-50 o equivalente) pipette monouso sterili da 5 ml piastra in polipropilene a 96 pozzetti (facoltativa) supporti magnetici per provette da 12 x 75 mm supporti magnetici per provette da 1,5 ml supporti non magnetici per provette da 12 x 75 mm supporti non magnetici per provette da 1,5 ml blocco riscaldatore per provette da 12 x 75 mm (in grado di raggiungere i 50 C) blocco riscaldatore per provette da 1,5 ml (in grado di raggiungere i 75 C) termometro timer riempipipette o dispositivo simile pipetta di precisione regolabile da 1000 µl pipetta di precisione regolabile da 200 µl pipetta a ripetizione in grado di dispensare volumi di 100 µl centrifuga in grado di raggiungere i 2000 giri 8 Procedura di preparazione manuale dei campioni per i dosaggi Abbott RealTime RNA

13 contenitore del liquido di scarico (non è consentito che la candeggina entri in contatto con il liquido di scarico). Fare riferimento alla sezione Pulizia, a pagina 16, per le avvertenze e le informazioni sulle precauzioni da adottare. contenitore per i rifiuti solidi camice da laboratorio guanti monouso privi di talco occhiali protettivi cabina di sicurezza biologica approvata per lavori con materiale infettivo, se richiesto Reagenti del sistema Abbott msample Preparation (n. di listino 4J70-24) Istruzioni per la conservazione Abbott Lysis Buffer (mlysis - tampone di lisi) (MD130A) Abbott Wash Buffer 1 (mwash 1 - tampone di lavaggio 1) (MD131A) Abbott Wash Buffer 2 (mwash 2 - tampone di lavaggio 2) (MD132A) Abbott Elution Buffer (melution - tampone di eluizione) (MD133A) Abbott Microparticles (mmicroparticles - microparticelle) (MD134A) Conservare il sistema Abbott msample Preparation e i suoi componenti come indicato dalle istruzioni sulle etichette. Procedura di preparazione manuale dei campioni per i dosaggi Abbott RealTime RNA 9

14 Protocollo di estrazione Un sistema Abbott msample Preparation comprende 4 x 24 preparazioni. Un vassoio di reagenti elabora 24 campioni. Togliere i flaconi dal vassoio e capovolgere gentilmente i flaconi Abbott msample Preparation per assicurare una soluzione omogenea. Se, aprendo i flaconi dei reagenti, si osservano cristalli in uno di essi, lasciar riequilibrare il reagente a temperatura ambiente fino a quando i cristalli scompaiono. Non utilizzare i reagenti senza aver atteso che i cristalli siano scomparsi. Per ottenere indicazioni su come svolgere questo protocollo, fare riferimento alla sezione Riassunto del protocollo, a pagina 17. Portare a termine tutte le fasi per ogni campione, prima di procedere con la fase successiva. Allestimento 1. Accendere i blocchi riscaldatori a temperatura controllata. a. Impostare il blocco delle cartucce di reazione da 12 X 75 mm a 50 C. b. Impostare i blocchi delle provette da 1,5 ml a 75 C. 2. Etichettare tutte le provette necessarie. a. Una cartuccia di reazione da 12 X 75 mm per campione per la fase 1 di mlysis. b. Una provetta "microfuge" con estremità avvitabile da 1,5 ml per campione per le fasi delle soluzioni di lavaggio mwash 1 ed mwash 2, nonché per il tampone melution. c. Una provetta "microfuge" con estremità avvitabile da 1,5 ml per campione o una piastra in polipropilene a 96 pozzetti per l'eluito. 3. Controllare la temperatura dei blocchi riscaldatori. Non procedere fino a quando i blocchi riscaldatori sono alla temperatura giusta. 4. Dispensare il controllo interno nel flacone dell'mlysis che contiene 70 ml. Per ogni estrazione vengono usati 2,4 ml. Per il volume adeguato di controllo interno, fare riferimento al foglietto illustrativo specifico del dosaggio. 10 Procedura di preparazione manuale dei campioni per i dosaggi Abbott RealTime RNA

15 5. Al termine della dispensazione del controllo interno nel flacone di mlysis, tappare il flacone e miscelare capovolgendo gentilmente 5-10 volte.! AVVERTENZA: Onde evitare lesioni personali, seguire le istruzioni del produttore per il blocco riscaldatore. Per evitare di bruciarsi, prima di maneggiarli, spegnere i blocchi e lasciarli raffreddare a 35 C o a temperatura inferiore. Lisi 1. Risospendere le mmicroparticles, agitando gentilmente fino a che le particelle sono in sospensione e non si vedono più particelle sedimentate sul fondo del flacone. 2. Collocare le cartucce di reazione da 12 x 75 mm in un rack non magnetico a temperatura ambiente. A risospensione ultimata, utilizzare un puntale per pipetta a ripetizione da 5 ml in grado di dispensare aliquote di 100 µl; aggiungere 100 µl di mmicroparticles ad ogni cartuccia di reazione da 12 X 75 mm. 3. Con una pipetta monouso sterile da 5 ml, dispensare 2,4 ml di mlysis in ciascuna cartuccia di reazione da 12 X 75 mm nel rack non magnetico. 4. Con la pipetta di precisione e i puntali con barriera anti aerosol, dispensare la quantità desiderata di campione (campioni, calibratori e/o controlli) nelle cartucce di reazione da 12 X 75 mm e mescolare la miscela campionelisi eseguendo aspirazione e dispensazione con la pipetta di trasferimento del campione fino ad ottenere una sospensione uniforme. NOTA: Fare riferimento al foglietto illustrativo del dosaggio per informazioni sulla preparazione dei campioni. Per il dosaggio RealTime HIV-1 centrifugare tutti i campioni a 2000 giri per 5 minuti prima di dispensare nelle cartucce di reazione. Per il dosaggio RealTime HCV centrifugare i campioni a 2000 giri per 5 minuti se i campioni sono torbidi o contengono sostanze particolate. NOTA: Il volume del campione può variare da 0,2 ml a 1,0 ml come indicato nei foglietti illustrativi specifici dei dosaggi. Analizzare in maniera equivalente i campioni, i calibratori e i controlli. 5. Quando a tutti i campioni è stato aggiunto l'mlysis e sono stati miscelati, collocare le provette nel blocco riscaldatore a 50 C. Procedura di preparazione manuale dei campioni per i dosaggi Abbott RealTime RNA 11

16 6. Avviare il timer e incubare tutte le provette per 20 minuti a 50 C. 7. Ad incubazione terminata, collocare le cartucce di reazione da 12 X 75 mm in un sostegno a cattura magnetica per 2 minuti, per permettere di catturare le particelle sul lato delle provette. 8. Con le provette nel sostegno a cattura magnetica, utilizzare una pipetta nuova e pulita da 5 ml per ogni campione, per rimuovere il lisato da ogni provetta ed eliminarlo in un contenitore del liquido di scarico. Eliminare il fluido il più completamente possibile. NON disturbare o aspirare le particelle catturate magneticamente. 9. Togliere le cartucce di reazione da 12 X 75 mm dal rack magnetico e trasferirle in uno non magnetico. Primo lavaggio con mwash 1 1. Per ogni campione usare un puntale nuovo e pulito da 1000 µl e dispensare 700 µl di mwash 1, quindi risospendere le particelle magnetiche nel fluido di lavaggio aspirando gentilmente e dispensando con il puntale. Lavare le particelle dal lato della provetta, se necessario. NOTA: Quando si aggiungono i tamponi di lavaggio, dispensare il liquido lentamente per evitare di schizzare. 2. Trasferire il liquido di lavaggio e le particelle in una provetta "microfuge" con estremità avvitabile da 1,5 ml dotata di etichetta. 3. Collocare tali provette in un supporto a cattura magnetica per un minuto, per permettere di catturare le particelle sul lato delle provette. 4. Per ogni campione usare un puntale nuovo e pulito da 1000 µl per togliere l'mwash 1 dalle provette "microfuge" con estremità avvitabile da 1,5 ml ed eliminarlo in un contenitore del liquido di scarico. Eliminare il fluido il più completamente possibile. NON disturbare o aspirare le particelle catturate magneticamente. 5. Togliere le provette "microfuge" con estremità avvitabile da 1,5 ml dal rack magnetico e trasferirle in uno non magnetico. 12 Procedura di preparazione manuale dei campioni per i dosaggi Abbott RealTime RNA

17 Secondo lavaggio con mwash 1 1. Per ogni campione usare un puntale nuovo e pulito da 1000 µl e dispensare 700 µl di mwash 1, quindi risospendere le particelle magnetiche nel fluido di lavaggio aspirando gentilmente e dispensando con il puntale. Lavare le particelle dal lato della provetta, se necessario. 2. Collocare tali provette in un supporto a cattura magnetica per un minuto, per permettere di catturare le particelle sul lato delle provette. 3. Per ogni campione usare un puntale nuovo e pulito da 1000 µl per togliere l'mwash 1 dalle provette "microfuge" con estremità avvitabile da 1,5 ml ed eliminarlo in un contenitore del liquido di scarico. Eliminare il fluido il più completamente possibile. NON disturbare o aspirare le particelle catturate magneticamente. 4. Togliere le provette "microfuge" con estremità avvitabile da 1,5 ml dal rack magnetico e trasferirle in uno non magnetico. Primo lavaggio con mwash 2 1. Per ogni campione usare un puntale nuovo e pulito da 1000 µl e dispensare 700 µl di mwash 2, quindi risospendere le particelle magnetiche nel fluido di lavaggio aspirando gentilmente e dispensando con il puntale. Lavare le particelle dal lato della provetta, se necessario. 2. Collocare tali provette in un supporto a cattura magnetica per un minuto, per permettere di catturare le particelle sul lato delle provette. 3. Per ogni campione usare un puntale nuovo e pulito da 1000 µl per togliere l'mwash 2 dalle provette "microfuge" con estremità avvitabile da 1,5 ml ed eliminarlo in un contenitore del liquido di scarico. Eliminare il fluido il più completamente possibile. NON disturbare o aspirare le particelle catturate magneticamente. 4. Togliere le provette "microfuge" con estremità avvitabile da 1,5 ml dal rack magnetico e trasferirle in uno non magnetico. Procedura di preparazione manuale dei campioni per i dosaggi Abbott RealTime RNA 13

18 Secondo lavaggio con mwash 2 1. Per ogni campione usare un puntale nuovo e pulito da 1000 µl e dispensare 700 µl di mwash 2, quindi risospendere le particelle magnetiche nel fluido di lavaggio aspirando gentilmente e dispensando con il puntale. Lavare le particelle dal lato della provetta, se necessario. 2. Collocare tali provette in un supporto a cattura magnetica per un minuto, per permettere di catturare le particelle sul lato delle provette. 3. Per ogni campione usare un puntale nuovo e pulito da 1000 µl per togliere l'mwash 2 dalle provette "microfuge" con estremità avvitabile da 1,5 ml ed eliminarlo in un contenitore del liquido di scarico. Eliminare il fluido il più completamente possibile. NON disturbare o aspirare le particelle catturate magneticamente. 4. Togliere le provette "microfuge" con estremità avvitabile da 1,5 ml dal rack magnetico e trasferirle in uno non magnetico. Prima fase con melution 1. Per ogni campione usare un puntale nuovo e pulito da 200 µl e dispensare 25 µl di melution Buffer, quindi risospendere le particelle magnetiche nel fluido aspirando e dispensando con il puntale. Lavare le particelle dal lato della provetta, se necessario. 2. Tenere le singole provette nel rack non magnetico fino a quando il tampone melution è stato dispensato in tutti i campioni. 3. Collocare le provette "microfuge" con estremità avvitabile da 1,5 ml nel blocco riscaldatore a 75 C e incubare per 20 minuti. 4. Togliere le provette dal blocco riscaldatore a 75 C e rimetterle nel rack non magnetico. 14 Procedura di preparazione manuale dei campioni per i dosaggi Abbott RealTime RNA

19 Seconda fase con melution 1. Per ogni campione usare un puntale nuovo e pulito da 200 µl e dispensare 63 µl di mwash 2, quindi risospendere le particelle magnetiche nel fluido aspirando e dispensando con il puntale. Lavare le particelle dal lato della provetta, se necessario. 2. Tenere le singole provette in un rack non magnetico fino a quando la soluzione di lavaggio mwash 2 è stata dispensata in tutti i campioni. 3. Collocare tali provette in un supporto a cattura magnetica per un minuto, per permettere di catturare le particelle sul lato delle provette. 4. Per ogni campione usare un puntale nuovo e pulito da 200 µl e togliere il campione eluito dalla provetta "microfuge" con estremità avvitabile da 1,5 ml. NON disturbare o aspirare le microparticelle catturate. 5. Il campione eluito può essere collocato in una provetta "microfuge" con estremità avvitabile da 1,5 ml nuova o in una piastra in polipropilene a 96 pozzetti. 6. Fare riferimento alla sezione Protocollo di dosaggio I nel foglietto illustrativo adeguato e, per inizializzare l amplificazione e la rilevazione, continuare con le istruzioni riportate nella sezione Area per l amplificazione. Procedura di preparazione manuale dei campioni per i dosaggi Abbott RealTime RNA 15

20 Pulizia 1. Eliminare le provette dei campioni ed i flaconi dei calibratori e controlli secondo le linee guida del laboratorio. 2. I reagenti del sistema Abbott msample Preparation sono esclusivamente monouso. I reagenti rimanenti e il liquido di scarico devono essere eliminati secondo le linee guida del laboratorio. AVVERTENZA: Non miscelare agenti ossidanti,! quali ipoclorito di sodio, con i reagenti mlysis, mwash 1 ed mmicroparticles della confezione di reagenti del sistema msample Preparation. Non miscelare agenti ossidanti, quali ipoclorito di sodio, con i liquidi di scarico, in quanto tale miscela potrebbe generare gas tossici. Se la miscela si trova in un contenitore chiuso, si può creare pressione all'interno del contenitore. È responsabilità di ciascun laboratorio separare il liquido di scarico e accertarsi che sia trattato ed eliminato nel rispetto delle leggi locali e nazionali vigenti in materia. 3. Rimuovere ed eliminare tutti i materiali monouso e i rifiuti solidi secondo le linee guida del proprio laboratorio. 4. Pulire i rack dei campioni, i blocchi riscaldatori e i rack magnetici immergendoli in una soluzione di ipoclorito di sodio allo 0,5% per circa 10 minuti, quindi sciacquare completamente con acqua e lasciare asciugare all'aria. 5. Decontaminare e pulire l'area di lavoro secondo le linee guida del proprio laboratorio. 16 Procedura di preparazione manuale dei campioni per i dosaggi Abbott RealTime RNA

21 Riassunto del protocollo Riassunto del protocollo Dispensare controllo interno e miscelare 2,4 ml mlysis 0,7 ml mwash µl mmicroparticles 50 C, 20 min. sep. mag. Cartuccia di reazione Cartuccia di reazione Miscelare Sep. mag. TA Da0,2mla1ml campione (volume elaborato) *Per il dosaggio RealTime HIV-1 centrifugare tutti i campioni a 2000 giri per 5 minuti. *Per il dosaggio RealTime HCV centrifugare i campioni a 2000 giri per 5 minuti se sono torbidi o contengono sostanze particolate. Ripetere per un totale di due lavaggi con mwash 1 0,7 ml mwash 2 Cartuccia di reazione Sep. mag. TA Ripetere per un totale di due lavaggi con mwash 2 melution (25 µl) Cartuccia di reazione mwash 2 (63 µl) Cartuccia di reazione 75 C, 20 min Legenda degli elementi del procedimento TA = temperatura ambiente Eluito (88 µl) Sep mag Sep mag = separazione magnetica delle microparticelle dalla maggior parte di sovranatante Miscelare = effettuando ripetute aspirazioni e dispensazioni Figura 1.0: Riassunto del protocollo Procedura di preparazione manuale dei campioni per i dosaggi Abbott RealTime RNA 17

22 ANNOTAZIONI 18 Procedura di preparazione manuale dei campioni per i dosaggi Abbott RealTime RNA