MARIO DAVINO, ANTONINO CATARA e GIUSEPPE CARBONE**

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1 MARIO DAVINO*, ANTONINO CATARA* e GIUSEPPE CARBONE** * Istituto di Patologia vegetale, Università, Catania ** Osservatorio per le Malattie delle Piante, Catanzaro NUOVE ACQUISIZIONI SULLA DIFFUSIONE DEL VIRUS DELLA TRI- STEZZA DEGLI AGRUMI IN ITALIA (1984) La tristezza è una malattia da virus ( CTV ) degli agrumi originaria dall'estremo Oriente, dove 1 uso dell arancio amaro (Citrus aurantium L.) - che è il portinnesto più suscettibile - è praticamente sconosciuto (BAR-JOSEPH et al.,1981 ). Essa è attualmente diffusa in Africa, Sud America,India, Australia, Sud-Est asiatico, Filippine, California, Florida, Spagna ed Israele. La gravità dei danni e l'epidemiologia della malattia sono estremamente variabili, in dipendenza di vari fattori fra cui i ceppi di CTV presenti, l'efficacia dei vettori, le combinazioni d innesto e le condizioni ambientali. In Italia, la malattia è stata segnalata in passato solo sporadicamente (RUSSO,1956; SERVAZZI et al.,1967; CATARA,1968; CARTIA et al., 1980; DAVINO e CATARA,1982). Tuttavia, recenti indagini condotte con il saggio immunoenzimatico hanno permesso di individuare n. 23 piante infette, ottenute con marze introdotte dall e- stero (DAVINO et al ), Si è ritenuto, pertanto, di dover estendere le osservazioni agli agrumeti limitrofi, al fine di accertare altri eventuali focolai.

2 Materiali e metodi Le indagini sono state condotte mediante osservazione diretta delle piante in campo,alla ricerca di piante con sintomi sospetti,che venivano poi sottoposte a saggi immuno enzimatici e a saggi biologici su limetta messicana (Citrus aurantifolia (Christm.) Swingle ). Esse sono state effettuate prevalentemente sulla fascia ionica calabrese, dove era stato individuato il precedente focolaio di infezione (DAVINO et al.,1.c. ), e in altre aree agrumicole della Sicilia e della Calabria dove si conosceva l'esistenza di impianti di cultivar introdotte dall'estero. a ) Osservazioni in campo. Dopo una ricognizione generale del fondo, è stato esaminato più dettagliatamente un campione di piante, generalmente quelle situate sulle diagonali dell'appezzamento, asportando un tassello di corteccia nel punto d innesto per osservare se era presente l'alveolatura inversa sull'arancio amaro (CATARA, l.c. ). b) Saggio immunoenzimatico. Per questo saggio si è adoperato un antisiero ottenuto dall'isolato T4 del virus della tristezza (GONSAlVES et al.,1977), gentilmente fornito dal Dr. S. M. Garnsey. Gli estratti sono stati preparati da campioni di foglie e/o di corteccia di giovani. rametti raccolti qualche giorno prima o conservati in congelatore a -32 C. Come testimoni infetti sono stati usati.semenzali di limetta messicana inoculati con un isolato di tristezza proveniente dal Giappone ( TJ ) (CARTIA et al., l.c.) e semenzali di arancio amaro o di limetta messicana inoculati con il ceppo T4 proveniente dalla Florida (GARNSEY et al., 1977). Entrambi gli isolati, su limetta messicana, inducono vistose de-

3 -267- colorazioni e successiva suberificazione delle nervature fogliari e alveolatura del legno. I saggi sono stati eseguiti secondo il metodo utilizzato da BAR- JOSEPH et al.( 1980 ), già descritto in un precedente lavoro ( DAVI- NO e CATARA, l.c. ). e) Saggio su piante indicatrici. Al fine di avere informazioni sulla virulenza degli isolati virali presenti, porzioni di corteccia delle piante risultate infette sono state inoculate su semenzali di limetta messicana allevati in vasi da 3 1, in substrato composto per 2 / 3 di torba ed 1/ 3 di terreno vulcanico sterilizzato con calore umido. Le piante indicatrici sono state mantenute in serra ad una temperatura di C e protette da rete a maglia fine, onde evitare l'ingresso di insetti. Risultati Le indagini di campo hanno riguardato complessivamente n pian te di cui n ottenute con materiale di propagazione introdotto dall'estero (tab. n.1). In particolare, le specie e cultivar locali sono le seguenti: arancio dolce (C. sinensis Osbeck} Sanguinello e Tarocco, mandarino (C. reticulata Blanco) Avana, clementine (C. reticulata Blanco) Comune mentre quelle originarie dall'estero sono arancio dolce Golden Buckeye, Navelina, Valencia late e Washington navel; mandarino Satsuma (C. unshiu Mare.) tipo Wase; clementine Oroval; pompelmo (C. paradisi Macf.) Marsh seedless. Il test ELISA ha permesso di accertare la presenza di CTV su n. 26 piante di arancio dolce Golden Buckeye, su n. 37 di mandarino Satsuma, su n. 4 di pompelmo Marsh seedless e su una pianta di clementine Comune. Complessivamente, pertanto, le piante infette sono risultate n. 69 (tab.n. 1 ). Essendo tutte innestate su arancio amaro, esse presentavano chiari sintomi di deperimento ad eccezione della pianta di clementine Comune che presentava uno sviluppo normale.

4 Tabella n.1 - Risultati dei saggi immunoenzimatici effettuati nel 1983 per il virus della tristezza degli agrumi in Calabria e Sicilia. Piante Specie e cultivar località N. Esaminate Saggiate Infette Arancio dolce Golden Buckeye Bonavia {SR).Guardavalle (CZ} Navelina Bonavia (SR) Tarocco Ardore e S.Ilario (RC),Bianco(RC) Guardavalle (CZ) Valentia late Ardore (RC),Brancaleone (RC) Washington navel S Ilario (RC) Sanguinello Ardore (RC),Bianco{RC), S.Ilario ( Mandarino e similari Clementine Comune Ardore {RC}, Guardavalle (CZ), Clementine Oroval OrovalDroval S.Ilario (CZ) Ardore (RC) Mandarino Avana Guardavalle (CZ) Satsuma Wase Guardavalle (CZ), Pietrarotta (CZ) S.Eufemia (CZ) Pompelmo Marsh seedless Guardavalle (CZ)

5 -269- In particolare, le piante di mandarino Satsuma mostravano un nanismo molto accentuato, foglie piccole e deperimento generale. Benchè a detta del proprietario avessero circa 20 anni di età, non differivano da piante vicine di due anni d'impianto. Sollevando una porzione di corteccia al di sotto della linea d innesto era possibile notare una minutissi-ma estroflessione del legno cui corrispondevano delle alveolature sulla faccia cambiale della corteccia. Dopo 2 mesi dalla inoculazione i semenzali di limetta messicana hanno mostrato le caratteristiche decolorazioni delle nervature e successivamente sono state osservate anche alveolature a carico del legno dei rametti. Discussione Tutte le n. 69 piante trovate infette da CTV risultano circoscritte in un area distante qualche centinaio di metri dall'azienda dove è avvenuto il primo rinvenimento di CTV in Calabria (DAVI- NO et al., l.c. ). Di esse n. 68 appartengono alle stesse cultivar importate già rinvenute infette nella precedente indagine e solo una a clementine Comune. Tutte le altre piante di cultivar locali, adiacenti a quelle infette, sono risultate sane. È pertanto verosimile che le piante infette appartenenti a cultivar introdotte siano state ottenute per propagazione di marze. Per quanto riguarda la piante di clementine, benchè non si possa escludere la possibilità che essa derivi dal reinnesto di altra pianta di importazione, lo sviluppo normale lascia almeno dubitare che l'infezione sia avvenuta solo in epoca piuttosto recente. Salgono pertanto a n.92 le piante infette da CTV rinvenute in Calabria nello scorcio degli ultimi due anni.

6 Benché tale numero possa sembrare ridotto, sulla base di quanto esposto in un precedente lavoro e di quanto occorso in altri paesi risulta evidente che la nostra agrumicoltura corre seri pericoli, connessi con alcune evenienze favorevoli alla diffusione che potrebbero verificarsi (DAVINO et al., 1.c.). Infatti, poichè i parametri climatici nei quali gli agrumi sono coltivati sono simili in tutte le zone agrumicole è ragionevole ipotizzare che certi insetti e/o patogeni che sono presenti in f orma epidemica in altre regioni possano espandersi in altre aree (ROISTA- CHER 1981 a, 1981 b ; 1982). Non si può ad esempio essere certi che l'afide bruno orientale (Toxoptera citricidus Kirk. ) non possa acclimatarsi e vivere bene in California o nel bacino del Mediterraneo, come d'altronde è avvenuto in alcune aree agrumicole dell'argentina. L eccezionalità della situazione richiede, pertanto, interventi adeguati che dovrebbero essere orientati verso l'ampliamento delle indagini e l e-radicazione dei focolai di infezione. Un siffatto programma potrà essere sviluppato solo attraverso il potenziamento degli organi di controllo e il loro coordinamento con le istituzioni di ricerca già attrezzate allo scopo. Riassunto E stata effettuata un indagine al fine di accertare la diffusione del virus della tristezza degli agrumi in alcune aree della Calabria e della Sicilia. L' indagine è stata effettuata mediante l'osservazione diretta di piante in campo, saggi immunoenzimatici e saggi su semenzali di limetta messicana. In totale sono state saggiate n piante di varie specie di agrumi. I risultati hanno permesso di accertare la presenza del virus in n. 26 piante di arancio dolce Golden Buckeye, n.37 di mandarino Satsuma Wase e n. 4 di pompelmo Marsh seedless importate dall estero e su una pianta di clementine

7 comune. Summary New results on the distribution of citrus tristeza virus in Italy The distribution of citrus tristeza virus in some areas of Calabria and Sicily regions has been surveyed by field inspection of the trees, enzyme-linked immunosorbent assay and indexing on mexican lime seedlings. Among 1,038 ELISA tested trees n. 26 Golden Buckeye sweet oranges, n. 37 Satsuma mandarins and n. 4 Marsh seedless grapefruits introduced from abroad and one clementine Comune tree were found infected. Letteratura citata 1) BAR-JOSEPH M., GARNSEY S.M., GONSALVES D., PURCIFULL D.E. (1980 ). Detection of citrus tristeza virus. I. Enzyme -linked immunosorbent assay (ELISA) and SDS-Immunodiffusion methods. In: Proc. th Conf. IOCV, Univ. California IOCV,Univ.California,Riverside,1-8. 2) BAR-JOSEPH M.,ROISTACHER C.N.,GARNSEY S.M.,GUMPF D.J. (1981). A review on tristeza, an ongoing threat to citriculture. Proc. Int. Soc. Citriculture, 1, ) CARTIA G., BARBAGALLO S., CATARA A. (1980). Lack of spread of citrus tristeza virus by aphids in Sicily.In:Proc.8th Conf. IOCV, Univ. California, Riverside, ) CATARA A. (1968). Un nuovo caso di tristezza ripropone l'urgenza del controllo sanitario delle nostre coltivazioni agrumicole. Tec.agric. Catania, 20, ) DAVINO M., CATARA A. (1982). Risultati di saggi immunoenzimatici ELISA per il virus della tristezza degli agrumi. Atti Giornate Fitopatologiche, 1982, Suppl., ) DAVINO M., RUSSO F., CARTIA G., TERRANOVA G. (1983). Nuovi casi di tristezza degli agrumi accertati in Calabria. Inf.tore fitopatol., 33,

8 -272-7) GARNSEY S.M., GONSALVES D., PURCIFULL D.E. (1977). Mechanical transmission of citrus tristeza virus. Phytopathology, 67, ) GONSALVES D., PURCIFULL D.E., GARNSEY S.M. (1978). Purification and serology of citrus tristeza virus. Phytopathology, 68, ) ROISTACHER C.N. (1981 a). A blueprint for disaster. Part I: The hystory of seedling yellow diseases. Citrograph, 67, 4, 5, ) ROISTACHER C.N. (1981 b ). A blueprint for disaster. Part II: Recent changes in transmissibility of seedling yellows. Citrograph, 67, ) ROISTACHER C.N. (1 982). A blueprint for disaster. Part III: The destructive potential far seedling yellows. Citrograph, 67, 3, 48, ) RUSSO F. (1 956). La presenza del virus della tristezza su limone Dwarf Meyer" e mandarino Satsuma riscontrate in Sicilia. Riv. Agrumicoltura 1 1, , 13) SERVAZZI O., MARRAS F., FODDAI A. (1967). La presenza del virus della "Tristezza"degli Agrumi in Sardegna. Studi Sassar. Sez. III, 1 5,