IVD. La busta contenente la piastra deve essere portata a temperatura ambiente prima dell'apertura. Prelevare soltanto le piastre necessarie.

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1 PIASTRE PER IMMUNODIFFUSIONE RADIALE (RID/MONORID) Piastre per immunodiffusione radiale per la determinazione quantitativa delle proteine nei fluidi biologici umani 1 X 12 test (RID) Ref Vedere tabella di 18 X 1 test (MONORID) conversione LOT IVD Sull etichetta esterna 2-8 C SIGNIFICATO CLINICO E DESTINAZIONE D USO La determinazione e la titolazione delle proteine è d aiuto nella diagnosi di molti stati patologici nei quali può essere riscontrato sia un aumento che una diminuzione di tali analiti. Il dosaggio tramite immunodiffusione radiale viene ampiamente utilizzato in molti laboratori per la sua semplicità e la sua economicità. PRINCIPIO DEL METODO Nella metodica di immunodiffusione radiale il campione viene fatto reagire con un antisiero, specifico per l analita da dosare, contenuto all interno dell agar della piastra. Dall interazione tra l analita in esame e i corrispondenti anticorpi inclusi nell agar si forma un alone di precipitazione, la cui misura è proporzionale alla concentrazione dell analita ricercato. Confrontando la misura del diametro del precipitato con i valori riportati nella rispettiva tabella di conversione è possibile determinare la concentrazione dell analita. CONTENUTO DEL KIT Piastra RID piastra a 12 pozzetti contenente agar con incluso antisiero specifico anti proteine umane. Pronto all'uso. Quantità: 1x12 test oppure Piastra MONORID piastra monorid a 1 pozzetto contenente agar con incluso antisiero specifico anti proteine umane. Pronto all'uso. Quantità: 18x1 test Istruzioni d uso Ref INSRID Il presente documento. Tabella di conversione Ref TCRID/TCMRD MATERIALE NECESSARIO, MA NON FORNITO I seguenti materiali non sono contenuti nel kit, ma sono richiesti per l'esecuzione del test: Pipette di precisione da 5, 10, 20 µl con appositi puntali monouso Provette con portaprovette Misuratore ottico per piastre RID Ref 001L CONSERVAZIONE E STABILITA' DEI REATTIVI La piastra deve essere conservata a 2-8 C e utilizzata entro la data di scadenza riportata sull'etichetta. La busta contenente la piastra deve essere portata a temperatura ambiente prima dell'apertura. Prelevare soltanto le piastre necessarie. CONSERVAZIONE E STABILITA DEI CAMPIONI Verificare nella tabella di conversione la quantità di campione che deve essere seminata e l eventuale necessità di diluire lo stesso (Apolipoproteina A1, Albumina), nonché il tipo di fluido biologico in cui deve essere effettuata la ricerca (siero, plasma, secreti, urine). In particolare si ricorda che il dosaggio di Fibrinogeno ed Antitrombina III deve essere effettuato su plasma. I campioni, se non utilizzati immediatamente, possono essere conservati per 2 giorni a 2-8 C se protetti dall evaporazione e dalla contaminazione. In caso di conservazione prolungata, congelare a temperatura -20 C. Evitare il congelamento/scongelamento ripetuto del campione. Evitare l uso di campioni emolizzati o lipemici. PRECAUZIONI DI SICUREZZA I reagenti del kit non sono considerati pericolosi secondo le normative vigenti sulla classificazione, l imballaggio ed etichettatura delle sostanze pericolose. Tuttavia essi devono essere trattati con cautela, evitandone l ingestione, il contatto con la pelle, gli occhi e le membrane mucose. Tutti i reattivi presenti nel kit sono esclusivamente per uso diagnostico in vitro. Per l uso dei reattivi e del materiale del laboratorio attenersi alla Buona Pratica del Laboratorio (GLP). Utilizzare per l analisi guanti protettivi monouso. I campioni devono essere maneggiati con cura ed eliminati come agenti potenzialmente pericolosi perché potrebbero trasmettere infezioni. Gli oggetti venuti a contatto diretto con materiale biologico e controlli devono essere trattati come potenzialmente infettivi. Tutti i materiali devono essere smaltiti a norma di legge come rifiuti potenzialmente infetti. PRECAUZIONI TECNICHE La procedura deve essere eseguita con attenzione per ottenere risultati corretti, rispettando i tempi di incubazione. Almeno 30 minuti prima dell uso, portare a temperatura ambiente tutti i reagenti necessari al dosaggio. Non utilizzare le piastre oltre la data di scadenza riportata sulle etichette. Si consiglia di utilizzare per una seduta d'esame lo stesso lotto di piastre. Prelevare dalla busta le piastre necessarie al test e riporre le restanti a 2-8 C. Evitare lunghe interruzioni tra le fasi del test e mantenere gli stessi tempi di distribuzione per tutti i campioni ed eventuali controlli. Evitare ogni contaminazione dei reattivi al momento del prelievo dai flaconi. Si raccomanda di utilizzare pipette con puntali monouso. Conservare le piastre non ancora utilizzate capovolte al fine di evitare la precipitazione di gocce di condensa sull agar. Proteggere le piastre dalla disidratazione mantenendole ben sigillate. La semina deve essere effettuata con accuratezza e precisione, utilizzando pipette correttamente tarate. La semina deve essere eseguita verticalmente al pozzetto e non obliquamente allo stesso per evitare fenomeni di

2 ovalizzazione dell alone di reazione, stando bene attenti a non fare trasbordare il campione dal pozzetto. UTILIZZATORE PREVISTO Il dispositivo è destinato ad essere utilizzato esclusivamente da parte di professionisti della diagnostica di laboratorio (tecnici laureati o diplomati in discipline attinenti la microbiologia e l immunochimica). PROCEDURAOPERATIVA Nota: nel caso sia necessario utilizzare la stessa piastra RID a 12 pozzetti per più sedute analitiche si consiglia di effettuare l incubazione a 2-8 C allungando i tempi di incubazione di almeno 24 ore o, preferibilmente, nel caso il numero di sieri da testare in ogni seduta analitica sia inferiore a 12, utilizzare le piastre Monorid. 1. Seminare il campione richiesto, nelle quantità specificate nella Tabella di Conversione, al centro del pozzetto della piastra, evitando un sovrariempimento del pozzetto o danneggiamenti al gel d agaroso. 2. Incubare a temperatura ambiente e possibilmente in camera umida per 48 ore (72 ore per le Ig M). Nel caso fosse necessario effettuare l incubazione a 2-8 C prolungare la stessa di 24 ore. 3. Al termine dell incubazione misurare i diametri degli immunoprecipitati utilizzando l apposito misuratore ottico Meridian Healthcare (Ref 001L) e leggere sull apposita tabella di conversione la relativa concentrazione. Nota: Si consiglia, per maggior sicurezza, di effettuare la lettura dopo 72 ore qualora i diametri dei precipitati siano superiori o uguali a quelli del valore normale più alto. La misurazione dei diametri degli immunoprecipitati deve essere eseguita con una precisione non inferiore a 0,1 mm. Si consiglia di utilizzare il misuratore ottico Meridian Healthcare (Ref 001L). CONTROLLO DI QUALITA Si consiglia di inserire, possibilmente in ogni seduta analitica, due sieri di controllo noti, utilizzando materiale di controllo Meridian Healthcare (vedi Listino Meridian H sezione Diagnostica Varia Calibratori e Controlli per piastre R.I.D. ). Il controllo e la calibrazione di tutte le piastre RID/MRD sono stati effettuati secondo la standardizzazione internazionale CRM 470 BCR (Community Bureau of Reference of the European Communities). CARATTERISTICHE DEL TEST Sensibilità La sensibilità è stata determinata utilizzando sieri di riferimento a concentrazione nota (Dade Behring, Dako, ICN). La tabella di conversione riporta il range di misura. Specificità Le misurazioni correlano al 100 % con i dati ottenuti utilizzando piastre Dade Behring. Precisione Una serie di campioni a concentrazione nota sono stati ripetutamente testati ed i risultati ottenuti mostrano un CV 20 %. LIMITAZIONI DELLA PROCEDURA Le piastre RID/MRD sono solo per uso diagnostico in vitro. I risultati ottenuti devono essere interpretati nel quadro clinico globale del paziente. POSSIBILI CAUSE DI ERRORE Le più comuni cause di errore possono essere: Inquinamento o errata conservazione dei reattivi o dei campioni. Agar essiccato durante la procedura. Contaminazione fra i diversi pozzetti durante la deposizione dei campioni. Danneggiamento del pozzetto con il puntale durante la semina. SMALTIMENTO Fare riferimento alle leggi localmente in vigore. RADIAL IMMUNODIFFUSION PLATES (RID/MONORID) For the quantitative determination of proteins in human biological fluids 1 X 12 tests (RID) Ref see conversion table 18 X 1 tests (MONORID) LOT IVD on labels 2-8 C CLINICAL SIGNIFICANCE AND INTENDED USE The determination, measure and monitoring of proteins in patients are an important aid in the diagnosis of a wide variety of pathologies and clinical conditions. Radial immuno diffusion (RID) in agarose gel has established itself as an economical and simple method for this purpose. PRINCIPLE OF METHOD In RID/MRD patient specimen in a small well is allowed to react with an antiserum suspended agarose gel to form antibody antigen complexes. After the incubation, the analyte to be examined and the corresponding antibody in the agarose results in a precipitation ring which diameter is proportional to the level of antigen. The value of the measured diameter in millimeters can be compared to a conversion table and the analyte concentration determined. CONTENTS OF KIT RID plates: 12 well plate containing agarose suspended antiserum to human serum proteins. Ready for use. Quantity: 1X12 test or MONORID plates: 1 well plate containing agarose suspended antiserum to human serum proteins. Ready for use. Quantity: 18X1 test Product insert Ref INSRID Present document Conversion Table Ref TCRID/TCMRD MATERIALS NECESSARY BUT NOT PROVIDED The following materials required for testing are not provided in the kit. Precision pipettes with disposable tips for delivering 5, 10 and 20 µl Test tubes and sample rack RID plate reader Ref 001L

3 STORAGE AND STABILITY OF REAGENTS RID plate reader must be stored at 2-8 C and used prior to the expiry date printed on the labels. Let pouch with RID plate equilibrate 30 minutes at room temperature before opening. STORAGE AND STABILITY OF SAMPLES Before starting with procedure verify, on analyte specific conversion table, required sample volume, possible need of diluting sample (i.e. Apolipoprotein A1, Albumin), as well as type of biological fluid (i.e. serum, plasma, secretions, urine) to be tested. In particular, plasma is required for Fibrinogen and Antithrombin III determinations. When not immediately used, samples can be stored at 2-8 C for up to 2 days prior to their use, provided they are protected against evaporation and contamination. For longer storage, freeze samples at -20 C. Avoid repeated freeze-thaw cycles. Use of hemolyzed and lipemic samples should be avoided. SAFETY PRECAUTIONS The reagents are not considered dangerous according to current regulations about classification, packaging and labelling of dangerous substances. However, they should be handled with caution, avoiding swallowing and contact with skin, eyes and mucous membranes. All Kit reagents are for exclusive in vitro diagnostic use. At all times follow Good Laboratory Practices (GLP) when using reagents and laboratory materials. Wear disposable protective gloves when performing tests. All test specimens should be handled with care and disposed as potentially hazardous and infectious agents. All items subjected to direct contact with either biological materials or controls should be handled as potentially infectious. Dispose of all used materials as potentially biohazardous waste in accordance with applicable law. TECHNICAL PRECAUTIONS The procedure should be followed carefully in order to obtain correct results in strict accordance with the times indicated. Prior to their use, let all reagents equilibrate 30 minutes at ambient temperature. Do not use the RID plate beyond the expiry date printed on each component label and do not mix reagents from different kit lots. Remove the plates you need for the test from the bag and store the rest at 2/8 C. Avoid interruptions in test procedure and follow same rate and sequence when pipetting reagents. Avoid all cross-contamination of reagents by using disposable pipette tips. Store unopened plates upside down to prevent drops of condensation on agarose. Close plate during incubations to protect agarose from dehydration. Sample should be dispensed accurately and precisely, using precision pipettes, which should be held vertical, not oblique to the well in order to prevent formation of elliptical precipitation ring, avoiding any sample spillage outside the well. OPERATING PROCEDURE Note: In the event that the same 12-well RID plate should be used for multiple test sessions, it is recommended to perform incubation at 2-8 C, prolonging incubation times by at least 24 hours or, preferably, to use monorid plates, when the number of sera to be tested for each test session is less than Carefully pipette required samples, according to the volume specified in the Conversion Table, into the center of each well of RID plate. Note: avoid any overfill or damage to the surrounding agarose gel. 2. Cover RID plate and incubate 48 hours (72 hours for IgM) at room temperature. If incubation at 2-8 C is necessary, incubation should be prolonged by 24 hours. 3. After incubation, measure diameter of precipitation ring, using the special Meridian Healthcare RID reader (Ref 001L), and compare it to the corresponding value in the conversion table and relevant concentration. Note: it is recommended to repeat reading after 72 hours to verify if there are precipitation diameters equal to or larger than the highest normal value. The reading precision must not be inferior to 0.1 mm. The use of the Meridian Healthcare RID reader (Ref 001L) is recommended. QUALITY CONTROL It is recommended to include 2 control sera in each test series. For this purpose use the RID controls listed in the Meridian Healthcare product catalog. The calibration and control of RID/MRD plates are based on the CRM 470 BCR (Community Bureau of Reference of the European Communities) reference material. TEST CHARACTERISTICS Sensitivity was determined with the use of reference serum with established values (Dade Behring, Dako, ICN). The conversion table lists the expected measuring ranges. Specificity exhibits 100% agreement with corresponding RID plates from Dade Behring. Precision: A series of samples at a known concentration was repeatedly tested, and the results showed -20% CV. LIMITATION OF PROCEDURE Test results obtained from this assay are only intended as a diagnostic aid. They should be interpreted in the light of a patient's history, symptoms and further diagnostic tests by physicians. POSSIBLE ERROR CAUSES The most common errors may be caused by: Pollution or incorrect storage and conservation of reagents and samples. Agarose dried out during procedure. Well to well contamination and pipetting errors Well damage by tip during pipetting WASTE DISPOSAL Refer to local law. INTENDED END USER This device is intended for exclusive use by laboratory diagnostics professionals (i.e., qualified or graduated technicians in Microbiology and Immunochemistry).

4 BIBLIOGRAFIA/REFERENCES 1. RL Alexander, Jr Comparison of radial immunodiffusion and laser nephelometry for quantitating some serum proteins Clin. Chem., Feb 1980; 26: GC Blanchard and R Gardner Two immunofluorescent methods compared with a radial immunodiffusion method for measurement of serum immunoglobulins Clin. Chem., May 1978; 24: JC Daniels, TM Vyvial, WC Levin, and SE Ritzmann Methodologic differences in values for M-proteins in serum, as measured by three techniques Clin. Chem., Feb 1975; 21: H Cloppet, A Francina, H Coquelin, Y Boucaud-Maitre, P Hutinel, and R Creyssel Laser nephelometry and radial immunodiffusion compared for immunoglobulin quantification in pathological sera Clin. Chem., Jan 1982; 28: G Virella and HH Fundenberg Comparison of immunoglobulin determinations in pathological sera by radial immunodiffusion and laser nephelometry Clin. Chem., Oct 1977; 23: SE Maddison and CB Reimer Normative values of serum immunoglobulins by single radial immunodiffusion: a review Clin. Chem., May 1976; 22: WC Butts, GE James, and M Keuhneman Intra-individual variation in the concentrations of IgA, IgG, IgM, and complement component C3 in serum of a normal adult population Clin. Chem., Mar 1977; 23: MC Pizzolato, MA Pizzolato, and A Agostoni Single radial immunodiffusion of undiluted serum proteins Clin. Chem., Mar 1972; 18: Legend of the symbols used on the labels:/ Legenda simbologia impiegata sulle etichette: H F CE Mark (requirement of 98/79/CE regulation)/ Prodotto conforme alla Direttiva 98/79/CE For in vitro diagnostic use/ Per uso diagnostico in vitro C Batch code/ Numero di lotto B Catalogue number / Codice I Storage temperature/ Limiti di temperature per la conservazione K Expiry date (year-month)/ Data di scadenza (anno-mese) J Consult accompanying documents/ Consultare i documenti allegati L Consult operating instructions/ Consultare le istruzioni per l uso A Biohazard/ Rischio biologico Manufacturer/ Fabbricante

5 Tabella di Conversione/Conversion Table Piastre MONO R.I.D./ MONO R.I.D. plates TC MRD394-rev05 Pag.1/1 Titolo/Title : PIASTRE MONORID Prealbumina/ Prealbumina MONORID PLATES Ref MRD394 Lot. P9711OV Exp. 2017/06 CAMPIONE/Sample: DILUZIONE del CAMPIONE/Sample Dilution: VOLUME di SEMINA/Volume to apply: 10 µl VALORI NORMALI/Normal Values: Siero/Serum Indiluito/Undiluted (Neat) mg/dl Note: Attenersi scrupolosamente alle indicazioni riportate sulla tabella di conversione del test in oggetto. Si consiglia di utilizzare come materiale di controllo e calibrazione i calibratori e controlli Meridian Healthcare (vedi Calibratori e Controlli per piastre R.I.D. nella sezione del listino Immunodiffusione radiale (R.I.D.) Meridian Healthcare). Misurare i diametri degli aloni con precisione (±0.1mm- utilizzando l apposito misuratore ottico Ref. 001L ). Carefully follow the instructions on the conversion table. It is recommended to use calibrators and controls Meridian Healthcare (see "Calibrators and Controls in Meridian Healthcare product catalogue RID radial immunodiffusion section). Carefully measure ring diameters with precision (±0.1mm, using the special RID reader Ref. 001L). CONC. CONC. CONC. (mm) mg/dl (CRM 470) (mm) mg/dl (CRM 470) (mm) mg/dl (CRM 470) 5,2 3,17 7,2 22,71 9,2 42,25 5,3 4,15 7,3 23,68 9,3 43,22 5,4 5,12 7,4 24,66 9,4 44,20 5,5 6,10 7,5 25,64 9,5 45,18 5,6 7,08 7,6 26,62 9,6 46,15 5,7 8,05 7,7 27,59 9,7 47,13 5,8 9,03 7,8 28,57 9,8 48,11 5,9 10,01 7,9 29,55 9,9 49, , , ,06 6,1 11,96 8,1 31,50 10,1 51,04 6,2 12,94 8,2 32,48 10,2 52,02 6,3 13,92 8,3 33,45 10,3 52,99 6,4 14,89 8,4 34,43 10,4 53,97 6,5 15,87 8,5 35,41 10,5 54,95 6,6 16,85 8,6 36,38 10,6 55,92 6,7 17,82 8,7 37,36 10,7 56,90 6,8 18,80 8,8 38,34 10,8 57,88 6,9 19,78 8,9 39,32 10,9 58, , , ,83 7,1 21,73 9,1 41,27 11,1 60,81